第一部分:富含亮氨酸重復序列的G蛋白偶聯(lián)受體5在肝細胞癌中的表達及其在腫瘤細胞生物學行為中的效應目的:此部分旨在分析富含亮氨酸重復序列的G蛋白偶聯(lián)受體5（Lgr5）在肝細胞癌（HCC）中的表達量,探討Lgr5的表達量與患者的臨床病理資料以及預后的關系,觀察Lgr5對腫瘤細胞生物學行為的效應。方法:采用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）以及免疫印跡分析檢測肝癌細胞系和肝細胞癌組織樣本中Lgr5的達水平。通過免疫組織化學檢測臨床收集的肝細胞癌樣本中Lgr5的表達情況。結(jié)合Lgr5的表達情況與收集到的肝癌患者的臨床病理資料分析兩者之間的相關性。通過Kaplan–Meier生存曲線分析Lgr5表達量水平與肝癌患者預后的聯(lián)系。建立COX回歸模型與單/多因素分析判別Lgr5是否為肝癌預后的獨立因素。在肝癌細胞系SK-Hep1和HepG2中對Lgr5基因過表達或基因沉默,從而通過Transwell細胞侵襲實驗和細胞劃痕實驗檢測細胞的侵襲遷移能力,CCK8（Cell Counting Kit-8）細胞增殖實驗檢測細胞的增值能力,免疫印跡法分析上皮-間質(zhì)化（epithelial–mesenchymal... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學位級別】：博士

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論文創(chuàng)新點
中文摘要
Abstract
1.引言
第一部分：富含亮氨酸重復序列的G蛋白偶聯(lián)受體5在肝細胞癌中的表達及其在腫瘤細胞生物學行為中的效應
    2.材料與方法
        2.1 臨床樣本
        2.2 細胞株
        2.3 實驗動物
        2.4 主要儀器
        2.5 主要試劑
        2.6 主要溶液的配制
        2.7 實驗方法
    3.實驗結(jié)果
        3.1 Lgr5 在肝細胞癌組織和細胞中的表達
        3.2 Lgr5 在肝細胞癌組織的表達與臨床病理資料和預后的關系
        3.3 Lgr5 可以推動肝癌細胞的EMT進程以及促進細胞的侵襲遷移與生長
        3.4 Lgr5 可以提高腫瘤細胞對阿霉素的耐藥性
    4.討論
第二部分：富含亮氨酸重復序列的G蛋白偶聯(lián)受體5與程序性細胞死亡蛋白5 的之間的相互作用
    5.材料與方法
        5.1 細胞株
        5.2 主要儀器
        5.3 主要試劑
        5.4 主要溶液的配制
        5.5 實驗方法
    6.實驗結(jié)果
        6.1 篩選驗證Lgr5 的相互作用蛋白
        6.2 Lgr5與PDCD5 的結(jié)合位點在Lgr5 蛋白N端△22-561段
        6.3 PDCD5 在肝癌組織和細胞中的表達
        6.4 PDCD5 在肝細胞癌組織中的表達與臨床病理資料以及預后的相關性
        6.5 PDCD5 過表達可以部分逆轉(zhuǎn)Lgr5 介導的藥物耐受
    7.討論
第三部分：富含亮氨酸重復序列的G蛋白偶聯(lián)受體5通過競爭性結(jié)合程序性細胞死亡蛋白5調(diào)控肝癌細胞的化療耐藥
    8.材料與方法
        8.1 臨床樣本
        8.2 細胞株
        8.3 主要儀器
        8.4 主要試劑
        8.5 主要溶液的配制
        8.6 實驗方法
    9.實驗結(jié)果
        9.1 Lgr5和PDCD5 不能影響彼此的表達
        9.2 Lgr5 可以抑制PDCD5 的核轉(zhuǎn)位
        9.3 Lgr5 可以競爭性結(jié)合PDCD5 進而降低p53 的穩(wěn)定性
        9.4 Lgr5 通過PDCD5/p53 抑制阿霉素介導的細胞凋亡
    10.討論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻博期間發(fā)表的科研成果目錄
致謝



本文編號：3336893