第一部分USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達定位研究目的:探討USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達特點及定位。方法:1.通過免疫印跡技術了解USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育表達特點。2.通過免疫熒光技術了解USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達分布。結果:1.USP47在剛出生時即在小鼠海馬、皮層具有豐富的表達,且其表達水平隨著發(fā)育成熟逐漸降低。2.免疫熒光顯示在人腦組織皮層和成年小鼠海馬與皮層腦組織中,USP47與神經(jīng)元標記物NeuN存在共表達,但不與星形膠質細胞標志物GFAP共表達。另外,USP47主要定位于神經(jīng)元胞漿,未在細胞核見到明顯定位。結論:USP47隨神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育成熟蛋白表達水平逐漸降低,且主要定位于神經(jīng)元胞漿,不在星形膠質細胞表達。第二部分USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能研究目的:探討USP47在中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能具有的功能。方法:1.構建靶向敲減USP47表達的慢病毒,并轉染原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,通過免疫印跡技術驗證其敲減效率。2.采用Label-free定量蛋白質組學技術和串聯(lián)質譜技術鑒定USP47相關靶點以及相互作用蛋白,并利用生物信息學軟件分析。3.采用細胞電生理技術分析USP47對神經(jīng)元... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

USP47在小鼠腦中的發(fā)育表達譜

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文29圖1.2免疫熒光染色分析USP47在TBI患者顳葉皮層組織中的表達Figure1.2ExpressionofUSP47inTBIhumanbraintissuebyimmunofluorescencestaining（A）在TBI患者術后的顳葉皮層組織中可見，USP47(紅色)與神經(jīng)元標記物NeuN共定位，且USP47主要定位在神經(jīng)元周圍，而非細胞核中；（B）但USP47（紅色）并不與星形膠質細胞GFAP（綠色）共定位。比例尺50μm，放大圖比例尺10μm。(A)USP47(red)isco-localizedwiththeneuronalmarkerNeuNinthetemporalcorticaltissueofTBIpatients,andismainlylocatedinthecytoplasmoftheneuron,butnotinthenucleus;(B)WhileUSP47(red)doesnotco-localizewithastrocyteGFAP(green).Thescalebar=50μm(10μminzoomimages).同時，我們也觀察了USP47在小鼠腦組織中的表達情況，與人腦組織中的發(fā)現(xiàn)一致，在海馬CA1區(qū)，USP47主要與神經(jīng)元細胞共定位（圖1.3A），而與星形膠質細胞無共定位（圖1.3C），并且USP47并不表達于細胞核，而主要位于神經(jīng)元胞質內。USP47在皮層的定位與海馬一致（圖1.3B，D）。

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文30圖1.3雙標免疫熒光染色分析USP47在成年小鼠腦組織的表達Figure1.3ExpressionofUSP47inadultmousebrainbydual-labelledimmunofluorescencestaining（A-B）在小鼠的顳葉皮層和海馬組織中，USP47(紅色)與神經(jīng)元標記物NeuN共定位，且USP47主要定位在神經(jīng)元周圍，并不定位于細胞核；（B）在小鼠的顳葉皮層和海馬組織中，USP47（紅色）并不與星形膠質細胞GFAP（綠色）共定位。比例尺50μm，放大圖比例尺10μm。(A-B)Inthehippocampusandcortexofmice,USP47(red)isco-localizedwiththeneuronmarkerNeuN,andismainlylocatedinthecytoplasmoftheneuron,notinthenucleus;(B)Inhippocampusandcortexofmouse，USP47(red)isnotcolocalizedwithastrocyteGFAP(green).


本文編號：3331966