前言:氧化應(yīng)激參與諸多心血管疾病,并且已知為心肌細(xì)胞發(fā)生病理變化的重要機(jī)制之一。泛素化作為一種重要的生化反應(yīng),近幾年已被證實(shí)為凋亡相關(guān)的關(guān)鍵步驟。本次研究中發(fā)現(xiàn)E3泛素化連接酶可通過與Mcl-1結(jié)和促進(jìn)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞（H9c2）損傷。Mcl-1可抑制同家族Bcl-2內(nèi)其他成員并參與維持細(xì)胞生存,但Fbw7可降解Mcl-1并干預(yù)此過程。因此我們推測Fbw7可能為促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡的因素。材料與方法:本次研究細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選用H9c2大鼠心肌細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,并應(yīng)用H₂O₂作為氧化應(yīng)激誘導(dǎo)藥物建立H9c2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型。應(yīng)用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、Western Blot、ROS活性氧檢測驗(yàn)證不同程度氧化應(yīng)激損傷下,H9c2細(xì)胞活性、凋亡水平,Fbw7、Mcl-1、Bax的蛋白表達(dá),以及ROS產(chǎn)生水平。而后探究敲減Fbw7后,上述指標(biāo)的變化,以及應(yīng)用免疫共沉淀驗(yàn)證Fbw7與Mcl-1在生理及氧化應(yīng)激損傷下分子結(jié)合水平。Western Blot、流式細(xì)胞術(shù)、ROS圖像均由Photoshop 2017處理,結(jié)果分析條形圖應(yīng)用Graphpad ... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 建立氧化應(yīng)激模型
    2.3 CCK-8 法檢測細(xì)胞活性
    2.4 流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測細(xì)胞凋亡率
    2.5 Western Blot(WB,蛋白質(zhì)印跡法)檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平
    2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染沉默或過表達(dá) Fbw7
    2.7 免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation,co-IP)檢測蛋白分子結(jié)合或相互作用
    2.8 活性氧測定(Reactive Oxygen Species,ROS)檢測細(xì)胞內(nèi) ROS 積累水平
    2.9 質(zhì)粒抽提擴(kuò)增 GFP-Fbw7 過表達(dá)質(zhì)粒
        2.9.1 轉(zhuǎn)化及擴(kuò)大培養(yǎng)
        2.9.2 質(zhì)粒抽提過程(需質(zhì)粒中提試劑盒)
    2.10 常用試劑制備方法
    2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
3 結(jié)果
    3.1 Fbw7在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷中表達(dá)升高
    3.2 敲減Fbw7 后氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷緩解。
    3.3 敲減Fbw7 后氧化應(yīng)激心肌細(xì)胞ROS積累量減少。
    3.4 Fbw7 通過與Mcl-1 相互作用參與氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷
4 討論
5 結(jié)論
本研究的創(chuàng)新性自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡介



本文編號(hào)：3320418