發(fā)布時(shí)間：2021-07-11 00:54

　　肝臟具有重要的生理功能,近年來(lái)的研究顯示多種細(xì)胞因子參與病毒性肝炎、酒精性肝損傷、脂肪肝、肝細(xì)胞肝癌等慢性肝病的發(fā)病過(guò)程。其重要發(fā)生過(guò)程是:在損傷因子作用下,激活肝臟Kupffer細(xì)胞（KC）釋放大量細(xì)胞因子,通過(guò)調(diào)控肝星狀細(xì)胞（HSC）中相應(yīng)信號(hào)通路,促進(jìn)HSC細(xì)胞的活化增殖,合成以膠原為主的ECM過(guò)度沉積于肝臟,引起肝臟發(fā)生病理改變,發(fā)展成肝硬化,甚至肝癌。研究發(fā)現(xiàn)HSC在肝臟的炎癥反應(yīng)過(guò)程中可能會(huì)發(fā)揮重要的作用。在多種因素如病毒感染藥物作用等導(dǎo)致肝損傷后,HSC等肝臟細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子,如IL-1,IL-6及IL-10等。HSC膜上特異性受體可以識(shí)別這些細(xì)胞因子,進(jìn)一步將信號(hào)通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路傳遞到核內(nèi),激活核內(nèi)存在的某些關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄因子,最終達(dá)到促進(jìn)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的目的。在此過(guò)程中,激活后的HSC可產(chǎn)生大量的促炎因子和促纖維化因子并通過(guò)旁分泌和自分泌作用,進(jìn)一步刺激未激活轉(zhuǎn)化的HSC轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞,使肝纖維化形成正反饋。炎癥反應(yīng)作為肝纖維化形成和啟動(dòng)因素,是促其形成肝纖維的原因,減輕炎癥有助于阻止肝纖維化的發(fā)生。而HSC作為肝纖維化主要的效應(yīng)細(xì)胞,其在炎癥反... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：145 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮寫詞對(duì)照
中文摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)取材
    2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 藥品與試劑
    2.4 儀器與設(shè)備
    2.5 溶液和試劑的配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 質(zhì)粒的制備和轉(zhuǎn)化
    3.2 動(dòng)物造模、分組
    3.3 肝組織病理學(xué)染色
    3.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)
    3.5. 免疫熒光制片
    3.6 免疫熒光雙染
    3.7 免疫沉淀
    3.8 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.8.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.8.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.8.3 細(xì)胞傳代
        3.8.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.8.5 凍存細(xì)胞
    3.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.10 PDTC處理細(xì)胞
    3.11 RT-PCR
    3.12 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.13 MTT比色法測(cè)細(xì)胞增殖
    3.14 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡
    3.15 Western blot
    3.16 ELISA法檢測(cè)IL-1β 和IL-6 的釋放水平
    3.17 雙熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)
    3.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 NLRC5在纖維化組織中的表達(dá)
        4.1.1 病理組織學(xué)檢測(cè)
        4.1.2 NLRC5、α-SMA在人肝纖維化組織中的表達(dá)
        4.1.3 在肝纖維化組織中NLRC5、α-SMA共定位于活化的肝星狀細(xì)胞
    4.2 過(guò)表達(dá)和沉默NLRC5生物學(xué)效果檢測(cè)
    4.3 NLRC5對(duì)LX-2 細(xì)胞活化及炎癥因子分泌的影響
        4.3.1NLRC5對(duì)LX-2 細(xì)胞活化的調(diào)控作用
            4.3.1.1 TGF-β1 對(duì)LX-2 細(xì)胞中NLRC5、α-SMA的表達(dá)影響
        4.3.2 NLRC5對(duì)LX-2 細(xì)胞中炎癥因子分泌的調(diào)控
    4.4 NLRC5對(duì)LX-2 細(xì)胞增殖、周期及凋亡的的影響
        4.4.1 MTT法檢測(cè)沉默NLRC5對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的LX-2 細(xì)胞增殖的影響
        4.4.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)沉默NLRC5對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的LX-2 細(xì)胞周期及凋亡的影響
        4.4.3 沉默NLRC5對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的LX-2 細(xì)胞中凋亡蛋白表達(dá)的影響
    4.5 NLRC5對(duì)NF-κB與TGF-β1/Smad信號(hào)通路的作用研究
        4.5.1 NLRC5對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)LX-2 細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控作用
        4.5.2 NLRC5對(duì)TNF-α 誘導(dǎo)LX-2 細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控作用
        4.5.3 NLRC5對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)LX-2 細(xì)胞中TGF-β1/Smad信號(hào)通路的調(diào)控作用
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    References



本文編號(hào)：3277000