濾泡輔助性T細胞（T Follicular helper cells,Tfh）是效應(yīng)T細胞（effector T cells）的一種,由初始T細胞（na?ve T cells）被抗原遞呈細胞激活后分化而來。不同于效應(yīng)T細胞產(chǎn)生不同的白介素發(fā)揮效應(yīng)作用,Tfh主用通過進入濾泡后與抗原特異性的B細胞相互作用,發(fā)揮著促進生發(fā)中心（germinal center）的形成,漿細胞與抗體的產(chǎn)生,以及記憶B細胞形成的作用。Tfh的發(fā)育是多階段多層次的,由多條信號通路所調(diào)控,包括TCR信號,ICOS信號等。AKT又稱為蛋白激酶B（PKB）,是一種絲氨酸蘇氨酸激酶。同時,AKT具有三種亞型,AKT1,AKT2以及AKT3,它們具有高度相似的蛋白結(jié)構(gòu),都具有激酶活性,但是在不同的細胞中其表達量有所不同,而不同AKT亞型發(fā)揮的功能也有所不同。作為重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,AKT信號通路處于一個細胞信號通路調(diào)控的樞紐地位,例如AKT信號通路參與調(diào)控細胞存活,細胞周期與增殖,細胞遷移,腫瘤發(fā)生等。研究也已發(fā)現(xiàn),FOXO1,mTORC等AKT的下游調(diào)節(jié)分子對Tfh的發(fā)育分化起著的重要調(diào)控作用。因此,我們在此推測AKT是... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院上海巴斯德研究所)上海市

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

AKT信號通路中的底物與功能(ManningandToker,2017)

第三章Tfh發(fā)育需要AKT磷酸化27第三章Tfh發(fā)育需要AKT磷酸化3.1AKT亞型在Tfh中的表達為解答Akt亞型在Tfh中的表達情況，我們決定在小鼠模型中誘導(dǎo)分化Tfh細胞，檢測Akt亞型mRNA表達情況。InfluenzaA/PuertoRico/8/34H1N1(PR8)病毒是小鼠適應(yīng)株，被應(yīng)用于多種免疫反應(yīng)的研究。在PR8感染下小鼠會產(chǎn)生效應(yīng)CD4+T細胞和殺傷性CD8+T細胞，以及產(chǎn)生抗原特異性抗體來清除病毒，在Tfh分化發(fā)育的研究中被多次使用(Yooetal.,2012,Leonetal.,2014,Heetal.,2018)。因此，我們首先使用流感病毒PR8，以滴鼻的方式給小鼠攻毒，以此激活免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)不同階段的Tfh細胞產(chǎn)生。在小鼠感染后第10～11天(Tfh分化擴增的頂峰)，我們收取小鼠脾臟和肺門引流淋巴結(jié)(lungdraininglymphnode)細胞，通過富集CD4+T細胞，并使用抗體染色CD4、CD44、CD62L表面分子來區(qū)分naiveCD4+T細胞(CD4+CD44loCD62Lhi)和activatedCD4+T(CD4+CD44hiCD62LloT細胞，從activatedCD4+T細胞中分選小鼠non-Tfh(PD-1loCXCR5lo，pre-Tfh(PD-1miCXCR5mi)和Tfh(PD-1hiCXCR5hi)細胞(圖3.1)。圖3.1小鼠流感模型中Tfh的圈門策略小鼠淋巴細胞經(jīng)過富集后，通過FSC與SSC去除粘連細胞；在CD4+T細胞中圈出CD44hiCD62Llo激活的T細胞；從中圈取CXCR5loPD-1lonon-Tfh細胞,CXCR5miPD-1mipre-Tfh細胞,和CXCR5hiPD-1hiTfh細胞。

Tfh和non-Tfh中Akt亞型mRNA的表達


本文編號：3227565