膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤）,又稱為四級(jí)星形細(xì)胞瘤,與其他的膠質(zhì)瘤一起構(gòu)成了絕大多數(shù)的惡性腦瘤。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是惡性程度最高的腦腫瘤,具有高死亡率,預(yù)后差以及生存期短等特性。目前亟需探索更多膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診斷和治療方案來進(jìn)一步延長膠質(zhì)母細(xì)胞瘤病人的生存期。核仁紡錘體相關(guān)蛋白1（NUSAP1）最初是作為一個(gè)有絲分裂調(diào)控因子被發(fā)現(xiàn),同時(shí)NUSAP1也是一個(gè)微管結(jié)合蛋白。NUSAP1不僅參與到有絲分裂過程中,在多種生物學(xué)進(jìn)程尤其是腫瘤生物學(xué)中也發(fā)揮著必不可少的作用。研究表明,NUSAP1在多種人類腫瘤中高表達(dá),因此NUSAP1是腫瘤治療中的一個(gè)潛在靶標(biāo)。然而,NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的作用尚不清楚。本論文旨在研究NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中所扮演的角色。結(jié)合臨床數(shù)據(jù)平臺(tái)及臨床樣本的分析,NUSAP1可作為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤診斷及治療的分子標(biāo)記物。結(jié)合細(xì)胞水平及體內(nèi)水平的研究,NUSAP1能夠促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的生長,并且NUSAP1能夠增強(qiáng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的化學(xué)耐藥性,提供了NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤治療中的理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.NUSAP1在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)并且其高表達(dá)與膠質(zhì)瘤病人的不... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 概述
    1.2 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
        1.2.1 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的特性
        1.2.2 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療
    1.3 核仁紡錘體相關(guān)蛋白(NUSAP1)與腫瘤
        1.3.1 NUSAP1的生物學(xué)特性
        1.3.2 NUSAP1的研究進(jìn)展
第2章 引言
    2.1 研究背景及目的意義
        2.1.1 研究背景
        2.1.2 研究目的及意義
    2.2 主要研究內(nèi)容
        2.2.1 NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤預(yù)后的影響
        2.2.2 NUSAP1對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、凋亡和成瘤能力的調(diào)控
        2.2.3 NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長的機(jī)制研究
        2.2.4 NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤化學(xué)耐藥性的研究
    2.3 技術(shù)路線
第3章 NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床預(yù)后分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
        3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料(組織樣本及細(xì)胞系)
        3.1.2 臨床病人數(shù)據(jù)庫
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.3 細(xì)胞傳代
        3.2.4 細(xì)胞凍存
        3.2.5 免疫組織化學(xué)
        3.2.6 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        3.2.7 臨床數(shù)據(jù)分析
        3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者以及細(xì)胞系中高表達(dá)
        3.3.2 NUSAP1與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)
    3.4 討論
第4章 NUSAP1 調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、凋亡、DNA損傷以及腫瘤形成能力
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
        4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 NUSAP1敲低載體構(gòu)建
        4.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染以及細(xì)胞感染
        4.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)及鋪板
        4.2.4 MTT實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 BrdU實(shí)驗(yàn)
        4.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        4.2.7 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        4.2.8 Caspase3/7 活性檢測
        4.2.9 彗星實(shí)驗(yàn)
        4.2.10 免疫熒光
        4.2.11 軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)
        4.2.12 小鼠原位移植瘤實(shí)驗(yàn)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中下調(diào)NUSAP1的表達(dá)
        4.3.2 敲低NUSAP1抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖
        4.3.3 敲低NUSAP1促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)生細(xì)胞凋亡
        4.3.4 敲低NUSAP1 引起膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞發(fā)生DNA損傷
        4.3.5 敲低NUSAP1抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的克隆形成能力
        4.3.6 敲低NUSAP1抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力
    4.4 討論
第5章 NUSAP1對(duì)ATR通路的影響及其調(diào)控作用
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
        5.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 RNA提取(Trizol/氯仿抽提)
        5.2.2 熒光定量PCR
        5.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染及細(xì)胞感染
        5.2.4 蛋白免疫印跡
        5.2.5 蛋白穩(wěn)定性檢測
        5.2.6 蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        5.2.7 泛素化實(shí)驗(yàn)
        5.2.8 蛋白截短實(shí)驗(yàn)
        5.2.9 SUMO化實(shí)驗(yàn)
        5.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中ATR蛋白的表達(dá)量與NUSAP1 蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)
        5.3.2 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中NUSAP1 調(diào)控ATR的蛋白穩(wěn)定性
        5.3.3 NUSAP1 調(diào)控ATR的泛素化
        5.3.4 NUSAP1 通過穩(wěn)定ATR促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)生凋亡和DNA損傷
        5.3.5 NUSAP1與ATR相互結(jié)合
        5.3.6 NUSAP1 通過其COOH基末端與ATR結(jié)合
        5.3.7 NUSAP1 通過其SAP結(jié)構(gòu)域調(diào)控ATR的泛素化和SUMO化
    5.4 討論
第6章 NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的化學(xué)耐藥性
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑
        6.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        6.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 慢病毒轉(zhuǎn)染
        6.2.2 細(xì)胞感染
        6.2.3 NUSAP1敲低及過表達(dá)與化療藥物的聯(lián)合使用
        6.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        6.2.5 細(xì)胞活力檢測以及細(xì)胞半致死濃度(IC50)計(jì)算
        6.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 敲低NUSAP1增強(qiáng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤對(duì)替莫唑胺和阿霉素治療的敏感性
        6.3.2 NUSAP1 通過其SAP結(jié)構(gòu)域增強(qiáng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的化學(xué)耐藥性
        6.3.3 NUSAP1 通過穩(wěn)定ATR調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的生長以及化學(xué)耐藥性
    6.4 討論
第7章 綜合與討論
    1.NUSAP1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況及其與預(yù)后的關(guān)系
    2.NUSAP1對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長及成瘤能力的調(diào)控研究
    3.NUSAP1調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長的分子機(jī)制研究
    4.NUSAP1 通過其SAP結(jié)構(gòu)域調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的化學(xué)耐藥性
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
博士在讀期間發(fā)表論文及參研課題情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hepatitis B virus X protein enhances hepatocarcinogenesis by depressing the targeting of NUSAP1 mRNA by miR-18b[J]. Zhe Yang,Jiong Li,Guoxing Feng,Yuan Wang,Guang Yang,Yunxia Liu,Shuqin Zhang,Jinyan Feng,Xiaodong Zhang.  Cancer Biology & Medicine. 2019(02)



本文編號(hào)：3199494