發(fā)布時間：2017-04-18 09:06

  本文關鍵詞：膠質(zhì)瘤中GLUT3基因異常表達的意義及其相關調(diào)控機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：膠質(zhì)瘤中GLUT3的表達及其意義研究背景：膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細胞。膠質(zhì)瘤是常見的神經(jīng)上皮腫瘤之一,包括星形細胞腫瘤,少突膠質(zhì)細胞腫瘤,混合性膠質(zhì)細胞腫瘤和室管膜腫瘤。星形細胞瘤是膠質(zhì)瘤中最常見者,世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO)根據(jù)其生物學行為將其分為Ⅰ～Ⅳ級。Ⅰ級：纖維型星形細胞瘤；Ⅱ級：低度惡性星形細胞瘤；Ⅲ級：間變型星形細胞瘤；Ⅳ級：多形性膠質(zhì)母細胞瘤。惡性膠質(zhì)瘤(malignant glioma, MG)主要包括Ⅲ級及Ⅳ級膠質(zhì)瘤,約占到顱內(nèi)原發(fā)惡性腫瘤的80%。由于膠質(zhì)瘤具有侵襲性生長的生物學特性以及其生長于腦或脊髓,生長部位部位特殊,通常難以手術完全切除。血腦屏障的存在,阻礙了大部分化療藥物進入腦組織內(nèi),從而化療也無法發(fā)揮其應有的作用。放療雖然是各種類型膠質(zhì)瘤常用的輔助治療方法,也只能在一定程度上延緩腫瘤的復發(fā)。目前即使采用手術+放療+化療等綜合治療手段,其預后也仍然相當不樂觀。MG的中位生存期只有12-15個月,總體的五年生存率不足6%。因此探尋新的有效的治療方法是十分有必要的。這促使我們必須深入開展對該疾病發(fā)生發(fā)展的機理、尤其是分子機理的研究,以尋找到更為有效的治療靶點。葡萄糖是大部分真核細胞的主要能量底物。水溶性的葡萄糖不能自由通過脂質(zhì)生物質(zhì)膜。葡萄糖的跨膜轉(zhuǎn)運進入細胞是葡萄糖參與代謝的關鍵限速步驟。葡萄糖的跨膜轉(zhuǎn)運必須由一類稱之為葡萄糖轉(zhuǎn)運體的蛋白家族協(xié)助轉(zhuǎn)運。這一家族目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的成員有14個。按照轉(zhuǎn)運體之間序列結構的相似性劃分,該蛋白家族可以劃分為三個亞家族：家族1 (GLUTs 1-4,14);家族2 (GLUTs 5, 7,9, and 11);與家族3 (GLUTs 6,8,10,12, and HMIT)。按照葡萄糖轉(zhuǎn)運過程中鈉離子依賴與否,葡萄糖轉(zhuǎn)運體家族成員又可以分成鈉離子依賴型與非鈉離子依賴型兩大類。鈉離子依賴性轉(zhuǎn)運體必須順鈉離子與葡萄糖濃度梯度轉(zhuǎn)運鈉離子與葡萄糖,而非鈉離子型可以逆葡萄糖濃度主動攝取葡糖糖。鈉離子依賴性轉(zhuǎn)運體主要表達在小腸的吸收上皮,與日常從飲食中攝取葡萄糖有關。此類轉(zhuǎn)運體還表達在腎臟上,參與葡萄糖的重吸收。非鈉離子依賴型轉(zhuǎn)運體可以表達在絕大多數(shù)細胞上。這類轉(zhuǎn)運體的表達具有一定的組織特異性。紅細胞主要表達GLUT1,肝臟主要表達GLUT2,肌肉和脂肪組織主要表達GLUT4。在腦內(nèi)這兩類轉(zhuǎn)運體均有表達,只是表達的位置、轉(zhuǎn)運能力、組織特異性有所不同。GLUT1在腦內(nèi)有兩種形式：糖基化程度高的GLUT1主要表達在腦血管壁上負責葡萄糖跨血腦屏障轉(zhuǎn)運,糖基化程度低的GLUT1主要分布于星型膠質(zhì)細胞的尾足與胞體上。GLUT2主要表達在下丘腦的神經(jīng)元上,是一個葡萄糖感受器,具有食物攝入調(diào)節(jié)功能。在下丘腦神經(jīng)元上GLUT2被認為可以調(diào)節(jié)突觸活性以及神經(jīng)遞質(zhì)釋放功能。GLUT3是大腦內(nèi)含量最多的轉(zhuǎn)運體,其轉(zhuǎn)運能力大約為GLUT1的5倍,主要分布于神經(jīng)元上,尤其是軸突與樹突上。GLUT3的分布密度與局部皮層葡萄糖消耗量相吻合。GLUT5是主要的果糖轉(zhuǎn)運體,在腦內(nèi)GLUT5是小膠質(zhì)細胞上唯一的己糖轉(zhuǎn)運體,并不分布于神經(jīng)元上。上述生理分布模式在病理狀態(tài)下會出現(xiàn)改變。在腦缺血缺氧過程早期中,GLUT3會出現(xiàn)增高,可以增加神經(jīng)元的葡萄糖攝取,提高神經(jīng)元的缺血缺氧耐受能力。用可以表達人的GLUT1與GLUT3的爪蟾卵實驗,將其置于低滲液中可以發(fā)現(xiàn)GLUT3的表達量呈指數(shù)形式增長。糖尿病大鼠可以引起大腦皮層中GLUT3的表達增加。原代培養(yǎng)的大鼠神經(jīng)元給予葡萄糖剝奪48h,也可以使GLUT3 mRNA增加4倍。在生理條件下,GLUT3蛋白在膠質(zhì)細胞上難以檢出,但是隨著膠質(zhì)瘤細胞的惡變,葡萄糖轉(zhuǎn)運體3在膠質(zhì)瘤中的表達明顯升高,且與其病理分級呈現(xiàn)顯著的正相關。那么GLUT3在膠質(zhì)瘤中異常表達具有什么意義?目的：首先通過免疫組化技術檢測不同級別膠質(zhì)瘤標本中的GLUT3以及Ki-67表達情況,明確膠質(zhì)瘤在演進過程中GLUT3表達量與腫瘤細胞增殖情況的關系。再用RNA干擾技術抑制膠質(zhì)瘤中GLUT3表達,觀察由此對膠質(zhì)瘤細胞生長特性的改變。由此探明GLUT3在惡性膠質(zhì)瘤中異常表達意義。(1).免疫組化方法檢測膠質(zhì)瘤甲醛固定石蠟包埋標本中GLUT3, Ki-67的表達情況。方法：1)收集膠質(zhì)瘤WHO Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級標本,每級5例。2)用免疫組化方法檢測標本中GLUT3、Ki-67蛋白的表達量3)統(tǒng)計方法：應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。標本中GLUT3(或Ki-67)蛋白的表達量以每100個細胞中GLUT3(或Ki-67)蛋白陽性表達細胞數(shù)計算,并以均數(shù)±標準差(X±S)方式表示,所有數(shù)據(jù)均為三次或以上重復試驗結果。兩組樣本之間均數(shù)比較采用兩獨立樣本t檢驗加以分析；多組均數(shù)間比較：方差齊同時整體比較采用One-way ANOVA,組間兩兩比較采用LSD法；方差不齊時整體比較采用welch檢驗,組間兩兩比較采用Tamhane's檢驗。GLUT3與Ki-67蛋白的表達量的相關性用Spearman相關方法加以分析。檢驗水準設為口=0.05。結果：1)隨著膠質(zhì)瘤病理級別的增高,樣本中GLUT3的表達陽性率呈現(xiàn)逐級上升趨勢分別為：Ⅰ級：0.900±0.909%, Ⅱ級：13.420±3.653%,Ⅲ級：64.280±8.094%,Ⅳ級：93.340±5.212%,經(jīng)方差齊性檢驗,得levene統(tǒng)計量F=51.561,P0.001,說明組間方差不齊,采用welch法行整體分析,welch統(tǒng)計量為6016.194,P0.001,組間兩兩比較采用Tamhane's方法,各組間比較P值均小于0.001,差異具有統(tǒng)計學意義。2)隨著膠質(zhì)瘤病理級別的增高,樣本中Ki-67的表達陽性率呈現(xiàn)逐級上升趨勢分別為：Ⅰ級：0.600±0.833%, Ⅱ級：11.140±4.291%,Ⅲ級：20.560±3.759%,Ⅳ級：31.500±4.896%,經(jīng)方差齊性檢驗,得levene統(tǒng)計量F=17.639,P0.001,說明組間方差不齊,采用welch法行整體分析,welch統(tǒng)計量為1106.416, P0.001,組間兩兩比較采用Tamhane's方法,各組間比較P值均小于0.001,差異具有統(tǒng)計學意義。3)在腫瘤內(nèi)部快速生長區(qū)中的GLUT3與Ki-67表達量均高于慢速生長區(qū)(GLUT3:93.340±5.212％/53.267±6.341%, t=-23.963, p0.001; Ki-67: 32.333±6.562% /21.333±5.158%, t=-7.224, P0.001),差異具有統(tǒng)計學意義。4)樣本中GLUT3的表達陽性率與Ki-67的表達陽性率呈呈正相關(spearman,rs=0.928,P0.001)。(2)抑制GLUT3表達對膠質(zhì)瘤生長特性的影響方法：1)構建GLUT3病毒干擾載體,包裝GLUT3干擾病毒顆粒Lv-GLUT3;2)檢驗病毒Lv-GLUT3沉默GLUT3表達的效果；3)用MTT實驗方法檢測Lv-GLUT3感染膠質(zhì)瘤細胞株U251,抑制GLUT3表達后膠質(zhì)瘤細胞增殖速度的改變4)用傷口愈合實驗方法檢測Lv-GLUT3感染膠質(zhì)瘤細胞株U251,抑制GLUT3表達后膠質(zhì)瘤細胞遷移能力的改變5)用transwell實驗方法檢測Lv-GLUT3感染膠質(zhì)瘤細胞株U251,抑制GLUT3表達后膠質(zhì)瘤細胞侵襲能力的改變6)用流式細胞術方法檢測Lv-GLUT3感染膠質(zhì)瘤細胞株U251,抑制GLUT3表達后腫瘤細胞凋亡情況的改變7)統(tǒng)計學方法：使用SPSS 17.0分析,計量資料用均數(shù)±標準差(X±s)表示,所有數(shù)據(jù)均為三次或三次以上重復試驗所得結果。對所測結果進行正態(tài)性檢驗以及方差齊性檢驗,正態(tài)分布數(shù)據(jù)兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗,三組或三組以上均數(shù)比較采用方差分析,其中MTT實驗結果與傷口愈合實驗結果采用重復測量方差分析方法進行分析。檢驗水準設為α=0.05,P0.05認定為差異具有統(tǒng)計學意義。結果：1)所構建的GLUT3病毒干擾載體Lv-GLUT3,可以高效的感染膠質(zhì)瘤U251細胞。與感染陰性對照病毒顆粒Lv-NC組相比,感染Lv-GLUT3后可以使膠質(zhì)瘤細胞中GLUT3-mRNA的相對表達量下降(0.0000615±0.0000202/0.000647±0.000237,t=7.383,P0.001)以及GLUT3蛋白的相對表達量下降(0.108±0.0159/0.364±0.0444,t=16.267,P0.001)。與感染陰性對照病毒顆粒Lv-NC組相比,感染Lv-GLUT3后可以明顯抑制膠質(zhì)瘤細胞中葡萄糖攝取量下降,反映在細胞培養(yǎng)留在液中的葡萄糖含量較對照組增高(0D505：0.532±0.0308/0.449±0.0322,t=-5.619,P0.001),差異具有統(tǒng)計學意義。2)MTT檢測結果采用重復測量方差分析方法加以分析,mauchly的W=0.758,P=0.125,滿足球形度檢驗,時間主效應F=1734.375,P0.001,時間與組別的交互效應檢測F=70.883,P0.001,處理組間比較有差別(F=800.730,P0.001)。與感染陰性對照病毒Lv-NC組相比,感染Lv-GLUT3后的48 h、72 h、96 h等時間點上,腫瘤細胞生長速度慢于對照組,分別為：48h(0D490：0.780±0.0257/0.859±0.0157),72h(0D490：1.018±0.00677/1.206±0.0165),96h(0D490：0.929±0.0115/1.022±0.00387)。3)傷口愈合實驗結果采用重復測量方差分析方法加以分析,mauchly的W=0.930,P=0.304,滿足球形度檢驗,時間主效應F=647.000,P0.001,時間與組別效應F=23.164,P0.001.處理組間比較有差別(F=228.343,P0.001)。與感染陰性對照病毒Lv-NC組相比,感染病毒Lv-GLUT3后腫瘤細胞在12 h、24 h、 36 h等時間點上,傷口愈合能力降低,傷口未愈合面積比例分別為：12 h(0.779±0.0884/0.515±0.0721),24 h(0.565±0.121/0.211±0.0305),36 h(0.186±0.0744/0.0345±0.0386)。4) Transwell實驗結果顯示：與感染陰性對照病毒Lv-NC組相比,感染病毒Lv-GLUT3后膠質(zhì)瘤細胞可以侵透基質(zhì)膜到達下室的細胞數(shù)減少(14.400±3.851/67.267±10.053,經(jīng)兩獨立樣本t檢驗得t=19.019,P0.001),差異具有統(tǒng)計學意義。5)流式細胞術檢測結果顯示,與感染陰性對照病毒Lv-NC組相比,感染病毒Lv-GLUT3后反映細胞凋亡的標志物--磷脂酰絲氨酸陽性細胞比率增高(0.133±0.00290/0.0777±0.00630,經(jīng)兩獨立樣本t檢驗得t=23.757,P0.001),差異具有統(tǒng)計學意義,提示感染Lv-GLUT3后膠質(zhì)瘤細胞凋亡數(shù)增多。結論：1、GLUT3在膠質(zhì)瘤中出現(xiàn)異常表達,并且隨著腫瘤級別增高而增高,在腫瘤內(nèi)部生長快速區(qū)域表達量高于生長慢速區(qū)域,GLUT3表達分布與反映細胞增殖標志物Ki-67表達分布一致,說明GLUT3的表達與細胞增殖速度情況平行。2、在膠質(zhì)瘤中抑制GLUT3表達可以抑制膠質(zhì)瘤細胞的增值速度,降低膠質(zhì)瘤細胞的遷移侵襲能力,并促進腫瘤細胞的凋亡。第二部分 轉(zhuǎn)錄因子SP1參與膠質(zhì)瘤中GLUT3異常表達的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究背景：在惡性膠質(zhì)瘤中存在著GLUT3 mRNA的過度表達,這提示GLUT3基因轉(zhuǎn)錄活性的升高。基因的轉(zhuǎn)錄是指是以DNA單鏈為模板,在DNA依賴的RNA聚合酶催化下合成RNA鏈的過程。這一過程受到嚴密的調(diào)控�；虻霓D(zhuǎn)錄調(diào)控主要由一類被稱為轉(zhuǎn)錄因子的蛋白(反式作用因子)與基因附近(通常在基因上游)的非編碼區(qū)內(nèi)特定DNA模塊(順式作用元件)結合,起到激活或者抑制基因表達的作用。因此基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控主要涉及到兩大類因素：反式作用因子與順式作用元件。就基因序列而言,必須存在轉(zhuǎn)錄因子的潛在結合位點,并且這些潛在結合位點沒有受到甲基化、乙�；刃揎�,可以被轉(zhuǎn)錄因子結合。就轉(zhuǎn)錄因子而言,典型的轉(zhuǎn)錄因子在結構上具有DNA結合域,可以識別結合特定的DNA序列。同一類轉(zhuǎn)錄因子的結合位點有很高的序列相似性,通常為6-20bp的一段短序列。轉(zhuǎn)錄因子的潛在結合位點可以通過一些生物信息學軟件加以測算尋找。SP1是第一個確定的轉(zhuǎn)錄因子,屬于Spl/Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子家族。SP1在結構上具有鋅指結構,可以通過鋅指結構特異性地結合到DNA上富含GC的區(qū)域上,SP1識別的DNA序列為5'-(G/T)GGGCGG(G/A) (G/A) (C/T)-3'. Spl既是正常生長發(fā)育所必須,也對多種腫瘤包括膠質(zhì)瘤發(fā)揮著重要影響。我們用TFsearch、 TESS等軟件對GLUT3啟動子的DNA結構進行的分析發(fā)現(xiàn)這一區(qū)域人、大鼠、小鼠具有高度同源性,它們都具有3個Spl的結合域。人的SP1結合位點分別位于GGGGCGTGGTGGCG GGCG (score,94.5), GGGGCGGGGGCGGGGG (score,91.8), GGGGGGTGGGGTGGGGTGGGG (score,90.4) [29]。這提示Sp1有可能通過與這些位點的結合而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。在小鼠和大鼠的神經(jīng)元中Sp1可與啟動子的順式作用原件結合而降低GLUT3的表達。而在骨骼肌細胞中進行的實驗則顯示Sp1可以與三個結合位點中一個相結合,并促進(3LUT3的轉(zhuǎn)錄。上述這些發(fā)現(xiàn)一方面證實了Sp1確實參與了GLUT3基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,另一方面又顯示SP1對GLUT3的調(diào)控存在著組織特異性。Guan H等報道,在222例膠質(zhì)瘤標本中58.6%的標本中出現(xiàn)了SP1的高表達,并且SP1的表達量與膠質(zhì)瘤的WHO分級呈正相關。那么在膠質(zhì)瘤中SP1的異常表達與GLUT3的表達之間有何關系?目的：通過分析克隆人GLUT3基因的啟動子,構建SP1結合位點野生型與突變型GLUT3基因啟動子報告基因載體以及SP1真核表達載體,觀察轉(zhuǎn)染SP1真核表達載體上調(diào)SP1表達對GLUT3基因的表達以及GLUT3基因啟動子活性的影響,再通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術觀察在細胞內(nèi)SP1與GLUT3基因啟動子區(qū)的結合關系。方法：1)構建SP1真核表達載體pIRES2-ZsGreenl-SP1、培養(yǎng)U251細胞,分組分別轉(zhuǎn)染pIRES2-ZsGreenl-SP1、空質(zhì)粒pIRES2-ZsGreen1、用RT-PCR檢測SP1、GLUT3、GAPDH的mRNA表達情況,分析SP1表達量及GLUT3表達量之間的關系。用免疫印跡方法檢測SP1、GLUT3、GAPDH的蛋白表達情況,分析SP1表達量及GLUT3表達量之間的關系。2)分析人GLUT3基因結構,擴增出GLUT3基因啟動子區(qū),并將其定向克隆到螢火蟲熒光素酶報告基因載體pGL3-basic中,構建出SP1結合位點野生型螢火蟲熒光素酶報告基因載體pGL3-GLUT3-wt.將pGL3-GLUT3-wt以及空質(zhì)粒pGL3-basic分別與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染入膠質(zhì)瘤細胞U251中,用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測重組質(zhì)粒pGL3-GLUT3-wt中插入片段的啟動子活性。3)分析GLUT3基因啟動子區(qū)內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子SP1的潛在結合位點,用定點突變的方法構建SP1結合位點突變型螢火蟲熒光素酶報告基因載體pGL3-GLUT3-mut。4)培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細胞,分組轉(zhuǎn)染pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1、 PGL3-GLUT3-mut+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1 以及 pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK +pIRES2-ZsGreenl培養(yǎng)后用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測三組細胞的啟動子活性,觀察SP1結合位點在SP1上調(diào)GLUT3基因啟動子活性中的作用。5)培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細胞,甲醛固定,超聲打碎DNA后,用SPl抗體做染色質(zhì)免疫共沉淀,陽性對照為細胞裂解液Input,陰性對照為小鼠IgG代替SP1抗體,以各組獲得DNA做模板,用SP1結合位點相關引物行熒光定量PCR,觀察各組熒光強度,判斷在腫瘤細胞內(nèi)SP1是否結合于GLUT3基因的啟動子上。6)使用SPSS 17.0分析,計量資料用均數(shù)±標準差(X±s)表示,所有數(shù)據(jù)均為三次或三次以上重復試驗所得結果。對所測結果進行正態(tài)性檢驗以及方差齊性檢驗,正態(tài)分布數(shù)據(jù)兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗,多組均數(shù)間比較：方差齊同時整體比較采用One-way ANOVA,組間兩兩比較采用LSD法；方差不齊時整體比較采用welch檢驗,組間兩兩比較采用Tamhane's檢驗。檢驗水準設為α=0.05。結果：1)構建的重組質(zhì)粒pGL3-GLUT3-wt.pGL3-GLUT3-mut,pIRES2-ZsGreenl-SP1經(jīng)過測序,證實序列正確。2)與轉(zhuǎn)染空載體pIRES2-ZsGreenl組相比,轉(zhuǎn)染構建的SPl真核表達載體pIRES2-ZsGreenl-SP1可以使膠質(zhì)瘤細胞中SP1-mRNA與GLUT3-mRNA相對表達量上升(SP1-mRNA/GADPH-mRNA:0.573±0.0900/0.0844±0.00919, t=-16.204, p 0.001:GLUT3-mRNA/GADPH-mRNA:0.513±0.0656/0.0392±0.0104, t=-21.401,p 0.001):SPl-protein與GLUT3-protein相對表達量上升(SP1-protein/GADPH-protein:0.414±0.0573/0.212±0.0394,t=-8.585. p 0.001:SP1-protein/GADPH-protein:0.337±0.0557/0.114±0.0400, t=-9.721,p 0.001).3)與轉(zhuǎn)染pGL3-basic+pRL-TK組相比,在轉(zhuǎn)染pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK組膠質(zhì)瘤中相對熒光素酶活性明顯增高(37.477±4.870/2.367±0.760,t=-21.370,P0.001)。4)轉(zhuǎn)染pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1組、轉(zhuǎn)染pGL3-GLUT3-mut+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1組和pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK+ pIRES2-ZsGreenl組膠質(zhì)瘤細胞中相對熒光素酶活性比較,經(jīng)方差齊性檢驗,得levene統(tǒng)計量F=2.294,P=0.123,說明組間方差齊同,經(jīng)單因素方差分析,得F=45.514,P0.001整體差異具有統(tǒng)計學意義。其中轉(zhuǎn)染pGL3-GLUT3-Wt+ pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1組膠質(zhì)瘤細胞中相對熒光素酶活性比轉(zhuǎn)染pGL3-GLUT3-mut+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1組和pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK+ pIRES2-ZsGreen1組高(56.561±11.012/27.212±5.920,LSD,P0.001,6.561±11.012/25.841±4.726,LSD,P0.001)。其中pGL3-GLUT3-mut+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl-SP1組和pGL3-GLUT3-wt+pRL-TK+pIRES2-ZsGreenl組中相對熒光素酶活性差異不大(27.212±5.920/25.841±4.726,LSD,p=0.710).結果提示GLUT3啟動子區(qū)內(nèi)SP1結合位是SP1上調(diào)GLUT3基因啟動子活性的結構基礎。6)免疫共沉淀結果顯示：以各組獲得的DNA為模板,以SP1結合位點相關引物行熒光定量PCR,各組相對熒光強度比較,經(jīng)方差齊性檢驗,得levene統(tǒng)計量F=7.560,P=0.003,說明組間方差不齊,經(jīng)welch檢驗,得F=421.377,P0.001整體差異具有統(tǒng)計學意義。組間比較結果顯示SPl抗體沉降組相對熒光強度低于Input組(236.206±56.688/459.069±44.985,Tamhane's,p 0.001),而高于小鼠IgG組(236.206±56.688/23.278±11.148,Tamhane's,p 0.001),上述結果提示在膠質(zhì)瘤細胞中SPl結合于GLUT3基因的啟動子區(qū)。結論：轉(zhuǎn)錄因子SP1可以作用于GLUT3啟動子區(qū)上SP1結合位點,并上調(diào)GLUT3啟動子活性。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤 葡萄糖轉(zhuǎn)運體3 SP1 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 啟動子
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-21
• 第一章 GLUT3在膠質(zhì)瘤中的異常表達及其意義21-69
• 引言21
• 第一節(jié) 膠質(zhì)瘤在演進過程中GLUT3表達量與Ki-67表達量之間的相關性21-31
• 材料與試劑22-23
• 實驗方法23-24
• 結果24-30
• 討論30-31
• 第二節(jié) 抑制GLUT3表達后對膠質(zhì)瘤生長特性的影響31-69
• 第一小節(jié) GLUT3慢病毒干擾載體的構建與鑒定31-56
• 材料與試劑31-33
• 方法33-47
• 結果47-55
• 討論55-56
• 第二小節(jié) 抑制GLUT3表達后對膠質(zhì)瘤生長特性的影響56-69
• 材料與試劑56-58
• 方法58-61
• 結果61-67
• 討論67-69
• 第二章 SP1參與膠質(zhì)瘤中GLUT3的轉(zhuǎn)錄調(diào)控69-116
• 引言69-70
• 第一節(jié) 在膠質(zhì)瘤中SP1對GLUT3基因表達的影響70-92
• 材料與試劑71-72
• 方法72-85
• 結果85-90
• 討論90-92
• 第二節(jié) SP1可以結合于GLUT3基因啟動子區(qū),并激活GLUT3的轉(zhuǎn)錄92-116
• 材料與試劑92-93
• 方法93-108
• 結果108-113
• 討論113-116
• 全文總結116-118
• 后記與展望118-119
• 綜述119-130
• 參考文獻130-142
• 縮略詞表142-144
• 在學期間所發(fā)表論文144-145
• 致謝145-147
• 統(tǒng)計學審稿證明147

  本文關鍵詞：膠質(zhì)瘤中GLUT3基因異常表達的意義及其相關調(diào)控機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：314503