本文關(guān)鍵詞：樹突狀細(xì)胞Notch信號(hào)在1，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的:哮喘是一種具有明顯異質(zhì)性的疾病。根據(jù)哮喘氣道內(nèi)浸潤的炎癥細(xì)胞不同,可以把哮喘分成嗜酸細(xì)胞性、中性粒細(xì)胞性、混合細(xì)胞性和寡細(xì)胞性哮喘[1]。不同的炎癥細(xì)胞表型,提示具有不同的免疫學(xué)炎癥機(jī)制。過去用“Th1/Th2失衡學(xué)說”來闡述其發(fā)病機(jī)制,但該學(xué)說不能完全解釋嗜酸性細(xì)胞炎癥的發(fā)生機(jī)制,更不能解釋非嗜酸性細(xì)胞性炎癥的機(jī)制。隨著更多的輔助性T(Th)細(xì)胞的發(fā)現(xiàn),對(duì)哮喘發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制認(rèn)識(shí)也在不斷的深入。近年發(fā)現(xiàn),調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells,Treg)和Th17細(xì)胞都在哮喘發(fā)病中起有重要作用。Treg具有抑制Th分化的作用。Th17則在中性粒細(xì)胞炎癥中起有重要作用。但Th細(xì)胞分化調(diào)節(jié)的機(jī)制仍沒有完全闡明。Treg是具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用的重要T細(xì)胞亞群。Treg可以通過抑制其他輔助細(xì)胞、輔助細(xì)胞效應(yīng)因子、APC等來完成負(fù)反饋?zhàn)饔谩４罅垦芯垦芯匡@示,哮喘患者存在明顯的Tregs分化不足和功能低下。也有文獻(xiàn)報(bào)道哮喘患者體內(nèi)存在Th17/Treg失衡。所以我們認(rèn)為Th17/Treg失衡是中性粒細(xì)胞性哮喘發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。Th17細(xì)胞可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞炎癥,在哮喘的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。哮喘患者外周血T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞增多,而其主要細(xì)胞因子IL-17A可以促進(jìn)氣道高反應(yīng),加重中性粒細(xì)胞在氣道中的浸潤,促進(jìn)氣道的重塑,參與后期氣道和全身炎癥反應(yīng),促進(jìn)其他炎癥因子的生產(chǎn)從而加重哮喘。也有研究發(fā)現(xiàn)在重癥哮喘患者誘導(dǎo)痰及氣管粘膜層IL-17表達(dá)顯著上升;氣道對(duì)乙酰甲膽堿的高反應(yīng)性也與誘導(dǎo)痰IL-17A水平呈正相關(guān)。Rhonda等研究發(fā)現(xiàn)低劑量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可以加重氣道內(nèi)中性粒細(xì)胞的浸潤,促進(jìn)氣道的高反應(yīng)性,這與誘導(dǎo)氣道內(nèi)強(qiáng)烈的Th17細(xì)胞免疫反應(yīng)相關(guān)。我們前期研究也成功使用低劑量的LPS誘導(dǎo)出以Th17為主的中性粒細(xì)胞性哮喘模型。樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)是體內(nèi)最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞,DCs將抗原信息遞呈給T細(xì)胞時(shí),可以產(chǎn)生免疫反應(yīng)或免疫耐受兩種不同的結(jié)果。在哮喘的發(fā)展中,DCs既可以促進(jìn)以Th2、Th17細(xì)胞為主的氣道變應(yīng)性炎癥,也可以是調(diào)控以Treg為主的免疫耐受。dcs對(duì)t細(xì)胞的活化是通過三個(gè)信號(hào)介導(dǎo):信號(hào)1通過t細(xì)胞受體(tcr)與mhc-抗原肽復(fù)合物相互作用來傳遞,信號(hào)2通過共刺激信號(hào)t細(xì)胞cd28與dcs上cd80/cd86的相互作用傳遞,這兩個(gè)信號(hào)共同啟動(dòng)了t細(xì)胞的克隆擴(kuò)增并分化為效應(yīng)t細(xì)胞,另一個(gè)信號(hào)-nocth信號(hào)通路決定了t細(xì)胞發(fā)育命運(yùn)。研究顯示,dcs過表達(dá)delta-like4可以增加il-17的分泌,而中和delta-like4可以抑制體內(nèi)th17細(xì)胞活化[2,3]。lps刺激可以上調(diào)delta-like配體,并參與th17細(xì)胞的活化[4]。1,25-二羥維生素d3(1α,25-dihydroxyvitamind3,1,25(oh)2d3)是維生素d體內(nèi)的活性形式,具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用,在哮喘中的作用也較多的研究。我們實(shí)驗(yàn)室過去的研究也證實(shí)1,25-二羥維生素d3具有調(diào)節(jié)th細(xì)胞分化,誘導(dǎo)tregs活化的作用。也有研究發(fā)現(xiàn),1,25-二羥維生素d3可以通過dc途徑間接地抑制th17細(xì)胞分化[7]。但是,1,25-二羥維生素d3詳細(xì)的作用機(jī)制并不清楚,1,25-二羥維生素d3是否能通過dcs的notch信號(hào)來調(diào)節(jié)th17細(xì)胞的分化目前還沒有報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)假設(shè)1,25-二羥維生素d3可以通過調(diào)節(jié)dcs表達(dá)的notch配體delta-like4從而抑制th17細(xì)胞分化。本實(shí)驗(yàn)提取ova致敏小鼠脾臟dcs,分別用lps,lps+dex,lps+vitd3處理小鼠脾臟dcs24小時(shí),然后檢測(cè)dcs表面mhcⅡ、共刺激分子及各notch配體的表達(dá)。然后將處理24小時(shí)的dcs與t細(xì)胞共培養(yǎng)后,檢測(cè)各輔助性t細(xì)胞的分化,探討lps及1,25-二羥維生素d3處理的dcs對(duì)th17等輔助性t細(xì)胞分化的影響。進(jìn)一步阻斷與th17細(xì)胞分化相關(guān)的差異表達(dá)notch配體,探討1,25-二羥維生素d3對(duì)th17細(xì)胞分化的機(jī)制。研究方法:第一部分:1,25-二羥維生素d3對(duì)lps處理的ova致敏的小鼠脾臟dcs表型的影響1.ova致敏小鼠模型的建立在d0、d6給予小鼠腹腔注射0.02%ova-al(oh)3溶液200ul致敏,在第13天后給予1%的ova溶液氣道連續(xù)霧化3天,得到ova致敏模型小鼠。通過肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞比例來判斷模型是否成功。2.1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps等對(duì)dcs的影響處死模型小鼠后,無菌分離脾臟,將脾臟細(xì)胞處理成無紅細(xì)胞的單細(xì)胞懸液,用cd11c免疫磁珠分選出樹突狀細(xì)胞。用1ul/mlpbs處理的dcs作為對(duì)照組,1ug/mllps處理的dcs作為lps組,1ug/mllps+1×10-8mol/l地塞米松處理的dcs作為lps+dex組,1ug/mllps+1×10-8mol/l1,25-二羥維生素d3處理的dcs作為lps+vitd3組。各組細(xì)胞在5%co2、37℃無菌環(huán)境中培養(yǎng)24小時(shí)后,進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。2.1.流式技術(shù)檢測(cè)lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs的凋亡各不同處理因素可能影響dcs的活性,造成不同組別間dcs活性的差異。我們用annexinv/pi檢測(cè)培養(yǎng)24小時(shí)的dcs凋亡程度,以排除后期共培養(yǎng)階段由于dcs活性差異而導(dǎo)致的t細(xì)胞分化差異。2.2.lps,lps+dex和lps+vitd3對(duì)dcs表面共刺激分子及mhcⅡ表達(dá)影響收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs,用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組dcs細(xì)胞表面mhcⅡ和共刺激分子cd80、cd86、cd40的表達(dá)。2.3.westernblot檢測(cè)lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達(dá)的notch各配體蛋白水平收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs,用蛋白裂解液提取各組細(xì)胞總蛋白后,用westernblot方法檢測(cè)各種處理后dcs中notch配體jagged1,jagged2,delta-like1,delta-like3和delta-like4的蛋白表達(dá)。2.4.rt-qpcr檢測(cè)lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達(dá)的notch各配體mrna水平收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs,提取各組dcs總rna,逆轉(zhuǎn)錄成cdna,通過特異性擴(kuò)增后,檢測(cè)各種處理后dcs中notch配體jagged1,jagged2,delta-like1,delta-like3和delta-like4的mrna表達(dá)。2.5.elisa檢測(cè)dcs上清液中細(xì)胞因子的表達(dá)收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs的上清液,用elisa檢測(cè)上清液中il-10、il-23和tgf-β的表達(dá)。第二部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟dcs在共培養(yǎng)中對(duì)t細(xì)胞分化的影響我們?cè)诘谝徊糠忠呀?jīng)檢測(cè)到在不同處理因素下dcs處于不同的免疫狀態(tài),而這種不同免疫狀態(tài)的dcs是否會(huì)影響t細(xì)胞的分化呢?為了進(jìn)一步檢測(cè)各因素處理的dcs對(duì)t輔助性細(xì)胞分化的影響,我們將不同因素處理后的dcs與t細(xì)胞共培養(yǎng)24小時(shí),然后檢測(cè)各型輔助t細(xì)胞分化比例及分泌的效應(yīng)因子。無菌分離ova致敏小鼠脾臟,將脾臟處理為無紅細(xì)胞的單細(xì)胞懸液,用cd4+免疫磁珠分選出t淋巴細(xì)胞。收集上述各因素下培養(yǎng)24h的dcs,用1640洗滌dcs,重懸細(xì)胞,將dcs和t淋巴細(xì)胞按照1:10的比例共培養(yǎng),將共培養(yǎng)細(xì)胞放置在5%co2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)24h。1.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)細(xì)胞中各輔助性t細(xì)胞比例收集培養(yǎng)24h的細(xì)胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個(gè)/ml細(xì)胞,用pma/lonomycin和bfa/monensin刺激上述細(xì)胞6小時(shí)后,孵育結(jié)合流式抗體cd4+ifn-γ+、cd4+il-4+和cd4+il-17a+,然后用流式儀器檢測(cè)其陽性表達(dá)比例;收集培養(yǎng)24h的細(xì)胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個(gè)/ml細(xì)胞,直接孵育結(jié)合cd4+cd25+foxp3,用流式儀器檢測(cè)陽性表達(dá)率。2.elisa檢測(cè)共培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs的上清液,用elisa檢測(cè)上清液中il-4、il-17a和ifn-γ的表達(dá)。第三部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟dcs表達(dá)的detal-like4配體對(duì)th17細(xì)胞分化的影響我們?cè)谇皟刹糠忠呀?jīng)檢測(cè)了1,25-二羥維生素d3處理對(duì)dcs上notch配體表達(dá)的影響,同時(shí)也檢測(cè)了1,25-二羥維生素d3對(duì)輔助性t細(xì)胞分化的影響,那么1,25-二羥維生素d3能否通過調(diào)節(jié)notch配體表達(dá)影響輔助性t細(xì)胞的分化呢?本部分實(shí)驗(yàn)將在共培養(yǎng)階段阻斷detal-like4配體后,觀察輔助性t細(xì)胞的分化情況。在共培養(yǎng)階段,向培養(yǎng)液中加入5ug/ml的detal-like4阻斷抗體,然后放置在5%co2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)24h。1.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)細(xì)胞中各輔助性t細(xì)胞比例收集培養(yǎng)24h的細(xì)胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個(gè)/ml細(xì)胞,用pma/lonomycin和bfa/monensin刺激上述細(xì)胞6小時(shí)后,孵育結(jié)合流式抗體cd4+ifn-γ+、cd4+il-4+和cd4+il-17a+,然后用流式儀器檢測(cè)其陽性表達(dá)比例;收集培養(yǎng)24h的細(xì)胞,調(diào)節(jié)濃度為1×106個(gè)/ml細(xì)胞,直接孵育結(jié)合cd4+cd25+foxp3,用流式儀器檢測(cè)陽性表達(dá)率。2.elisa檢測(cè)共培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子收集各種處理因素培養(yǎng)24h的dcs的上清液,用elisa檢測(cè)上清液中il-17a表達(dá)。研究結(jié)果:第一部分:1,25-二羥維生素d3對(duì)lps處理的ova致敏的小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞表型的影響1.ova致敏小鼠模型的建立模型組小鼠balf中嗜酸性粒細(xì)胞比例高于對(duì)照組小鼠(p0.05),細(xì)胞計(jì)數(shù)也較對(duì)照組顯著增多(p0.05),成功復(fù)制ova致敏嗜酸粒細(xì)胞性哮喘。2.1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps等對(duì)dcs的影響2.1.dcs純度及各因素處理的dcs凋亡率用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)分離出的模型小鼠脾臟dcs純度,dcs純度大于80%,可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。用流式技術(shù)檢測(cè)經(jīng)各處理后凋亡狀態(tài),各組間的凋亡基本一致,排除由于dcs狀態(tài)差異引起的t細(xì)胞分化差異。2.2.lps,lps+dex和lps+vitd3對(duì)dcs表面共刺激分子及mhcⅡ表達(dá)影響lps刺激的dcs和模型對(duì)照組dcs相比cd80、cd86及mhcⅡ分子表達(dá)無顯著差異(p0.05),僅cd40表達(dá)升高(p0.05),分別為cd80(61.5±11.7%vs58.5±8.4%),cd86(54.4±8%vs65±2.4%),cd40(16.9±3.4%vs31.2.±7.7%),mhcⅡ分子(27.7±8.1%vs27.3±4.3%)。dex或vitd3處理的dcs與lps刺激dcs相比,表達(dá)的共刺激分子cd80、cd86、cd40及mhcⅡ分子均無顯著降低(p0.05),分別為cd80(64.4±10.5%,65.4±8.0%vs58.5±8.4%),cd86(56.4±2.3%,58.9±1.6%vs65±2.4%),cd40(21.6±2.3%,22.4±8.9%vs31.1±7.7%)mhcⅡ分子(36.4±4.9%,25.8±7.9%vs27.3±4.3%)。當(dāng)免疫紊亂時(shí),dcs會(huì)高表達(dá)mhcⅡ分子和共刺激分子,獲得成熟的表型及功能,這是的dcs可以特異性的與t淋巴細(xì)胞結(jié)合,導(dǎo)致t淋巴細(xì)胞活化成為效應(yīng)t細(xì)胞。結(jié)果顯示lps、1,25-二羥維生素d3或者地塞米松處理24小時(shí)并不影響dcs共刺激分子及mhcⅡ表達(dá),不影響dcs的成熟狀態(tài)。2.3.westernblot檢測(cè)lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達(dá)的notch各配體蛋白水平和對(duì)照組相比,1,25-二羥維生素d3處理后,jagged1蛋白表達(dá)升高(p0.05)。jagged2蛋白表達(dá)趨勢(shì)基本與jagged1蛋白表達(dá)一致。加入lps刺激后detal-like1表達(dá)升高(p0.05),加入1,25-二羥維生素d3處理后dcs表達(dá)的detal-like1升高(p0.05),加入地塞米松處理的dcs表達(dá)detal-like1與lps組比較降低(p0.05)。dcs表達(dá)的detal-like3經(jīng)lps刺激未見上升(p0.05),同時(shí)加入1,25-二羥維生素d3處理的dcs表達(dá)detal-like3無顯著差異(p0.05)。與對(duì)照組相比較,lps刺激的dcs表達(dá)的detal-like4增加(p0.05),1,25-二羥維生素d3處理后與僅lps刺激相比較dcs表達(dá)的detal-like4有下降(p0.05)。這顯示1,25-二羥維生素d3可以調(diào)節(jié)jagged1,jagged2,delta-like1和delta-like4蛋白水平,而地塞米松調(diào)控delta-like1蛋白表達(dá)。2.4.rt-qpcr檢測(cè)lps,lps+dex和lps+vitd3處理dcs表達(dá)的notch各配體mrna水平lps刺激dcs后,和模型對(duì)照組相比,dcs表達(dá)的jagged1mrna上升0.3倍(p0.05),jagged2mrna上升0.2倍(p0.05),detal-like1mrna上升3.5倍(p0.01),detal-like3mrna上升0.4倍(p0.01),detal-like4mrna上升6.5倍(p0.01);在lps刺激的同時(shí)加入vitd3或者dex后,發(fā)現(xiàn)vitd3組jagged1mrna表達(dá)是lps組的1.5倍(p0.05),jagged2mrna是lps組的1.4倍(p0.01),delta-like1mrna是lps組的2.4倍(p0.01),detal-like3mrna是lps組的0.85倍(p0.05),detal-like4mrna是lps組的0.54倍(p0.05);而dex組對(duì)jagged1、jagged2、delta-like1、delta-like3無明顯影響,而僅detal-like4mrna是lps組0.8倍(p0.05)。notch信號(hào)通路是決定t細(xì)胞分化重要信號(hào),結(jié)果表明1,25-二羥維生素d3可以調(diào)節(jié)各notch配體mrna表達(dá),地塞米松能下調(diào)delta-like4mrna表達(dá),可能提示1,25-二羥維生素d3可以通過調(diào)節(jié)notch信號(hào)從而調(diào)控t細(xì)胞分化,這需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。2.5.elisa檢測(cè)dcs上清液中細(xì)胞因子的表達(dá)對(duì)照組小鼠脾臟dcs低分泌il-10(10.35±1.85)pg/ml,il-23(4.28±0.95)pg/ml,高分泌tgf-β(592.59±60.16)pg/ml,lps處理的dcs高分泌il-10(110.72±9.16)pg/ml、tgf-β(840.44±109.3)pg/ml,對(duì)il-23(3.56±1.05)pg/ml分泌未有明顯影響。在lps處理dcs的同時(shí)加入地塞米松的dcs低分泌il-10(72.69±5.05)pg/ml和tgf-β(615.54±9.56)pg/ml,對(duì)il-23分泌也未有明顯影響;在lps刺激的同時(shí)加入1,25-二羥維生素d3處理的dcs低分泌il-10(92.72±15.06)pg/ml,tgf-β(734.44±57.58)pg/ml略有降低、il-23(4.19±1.20)pg/ml分泌未有明顯影響。細(xì)胞因子也會(huì)影響t細(xì)胞向不同t輔助細(xì)胞分化,il-23和tgf-β在th17細(xì)胞分化的起始、穩(wěn)定和維持階段都發(fā)揮重要作用,il-10在treg分化中也有重要作用。結(jié)果表明1,25-二羥維生素d3和地塞米松都可以抑制dcs分泌il-10和tgf-β,對(duì)dcs分泌il-23無影響,提示1,25-二羥維生素d3和地塞米松可能通過il-10和tgf-β影響th17與treg分化與功能。第二部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟dcs在共培養(yǎng)中對(duì)t細(xì)胞分化的影響1.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)細(xì)胞中各輔助性t細(xì)胞比例與對(duì)照組相比較,lps處理后的dcs可以刺激t細(xì)胞向cd4+ifn-γ+(8.93±2.18vs15.77±2.23)、cd4+il-4+(9.32±2.36vs12.6±1.07)、cd4+il-17a+(9.27±1.35vs16.06±1.83)、cd4+cd25+foxp3(16.4±1.57vs10.93±1.43)分化(p均小于0.05)。1,25-二羥維生素d3處理后,和對(duì)照組比較,也可以使t細(xì)胞向cd4+ifn-γ+(17.33±2.32vs8.93±2.18)、cd4+il-4+(13.62±1.38vs9.32±2.36)分化(p均小于0.05)。和lps組比較,1,25-二羥維生素d3處理的dcs可以抑制由lps引起的il-17a(7.61±1.72vs16.06±1.83)分化(p0.05)。地塞米松處理dcs與lps組比較,地塞米松可以抑制由lps引起的cd4+ifn-γ+(8.93±1.13vs15.77±2.23)、cd4+il-4+(7.10±0.81vs12.6±1.07)、cd4+il-17a+(8.86±0.96vs16.06±1.83)、cd4+cd25+foxp3(9.46±0.85vs16.4±1.57)分化(p均小于0.05)。這表明地塞米松可以抑制由lps引起各輔助t細(xì)胞分化,1,25-二羥維生素d3促進(jìn)th1細(xì)胞和th2細(xì)胞分化,抑制th17細(xì)胞分化。2.elisa檢測(cè)共培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子lps處理后與對(duì)照組比較細(xì)胞上清液中il-17a(12.01±2.2vs4.46±0.11)、il-4(2.5±0.14vs1.66±0.12)分泌升高(p均小于0.05)。1,25-二羥維生素d3處理后與lps組比較,il-17a(3.11±0.25vs12.01±2.2)分泌下降(p0.05),il-4(3.15±0.3vs2.5±0.14)分泌上升(p0.05)。加入地塞米松與lps組比較,il-17a(3.89±0.75vs12.01±2.2)、il-4(1.3±0.24vs2.5±0.14)、ifn-γ(0.56±0.2vs1.88±0.57)分泌均下降(p均小于0.05)。ifn-γ、il-4和il-17a分別是th1、th2和th17細(xì)胞的重要效應(yīng)因子,結(jié)果顯示lps可以促進(jìn)t輔助細(xì)胞分泌ifn-γ、il-4和il-17a,進(jìn)一步發(fā)揮t輔助細(xì)胞效應(yīng)。地塞米松處理抑制細(xì)胞分泌其細(xì)胞因子,而1,25-二羥維生素d3可以促進(jìn)il-4分泌,抑制il-17a分泌。第三部分:1,25-二羥維生素d3及l(fā)ps處理ova致敏小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞表達(dá)的detal-like4配體對(duì)th17細(xì)胞分化的影響1.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)細(xì)胞中各輔助性t細(xì)胞比例在共培養(yǎng)期間加入detal-like4阻斷抗體后,lps處理后的dcs與對(duì)照組相比不能使t細(xì)胞向cd4+il-17a+分化(9.4±1.41vs10.03±0.73),同時(shí)加入1,25-二羥維生素d3或者地塞米松處理后和lps組比較未有進(jìn)一步下降(8.96±0.22,9.36±0.67vs9.4±1.41)。與阻斷detal-like4前比較,lps組在阻斷后cd4+il-17a+分化下降(16.06±1.83vs9.4±1.41)(p0.05)。阻斷detal-like4后,treg在對(duì)照組、lps組、lps+dex組和lps+vitd3組各組間差異表達(dá)與阻斷前各組間差異表達(dá)趨勢(shì)一致。這表示阻斷detal-like4配體后,抑制了th17分化,但不影響treg分化;阻斷detal-like4配體可以抑制1,25-二羥維生素d3對(duì)th17細(xì)胞分化調(diào)節(jié)。2.elisa檢測(cè)共培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子阻斷detal-like4后的共培養(yǎng)上清液il-17a,lps+dex組與對(duì)照組、lps組比較有下降(1.50±0.36vs3.08±0.5,3.33±0.17)(p均小于0.05),而lps+vitd3組與對(duì)照組、lps組比較無明顯降低(3.47±0.63vs3.08±0.5,3.33±0.17)。這表明阻斷detal-like4后可以抑制1,25-二羥維生素d3對(duì)il-17a的調(diào)控,而不能完全抑制地塞米松對(duì)il-17a的調(diào)控。研究結(jié)論與研究意義1.致敏小鼠分離出的脾臟dcs都處于較成熟狀態(tài),而lps、地塞米松或者1,25-二羥維生素d3處理24小時(shí)不影響這種成熟狀態(tài)。相較地塞米松,1,25-二羥維生素d3對(duì)notch配體的影響更顯著,這可能提示1,25-二羥維生素d3能顯著通過notch信號(hào)通路影響t輔助細(xì)胞的分化。2.lps處理dcs可以刺激t細(xì)胞向th17與treg分化,地塞米松處理dcs,可以抑制由lps引起輔助細(xì)胞分化,但不影響th17/treg平衡。1,25-二羥維生素d3處理dcs,能夠抑制由lps引起的th17細(xì)胞分化,而對(duì)lps引起的treg細(xì)胞分化無明顯影響,有利于th17/treg平衡。3.1,25-二羥維生素d3對(duì)th17分化和功能的抑制主要是通過下調(diào)dcs表達(dá)的notch配體detal-like4,而阻斷detal-like4不影響treg細(xì)胞分化,因此阻斷detal-like4可以有利于th17/treg平衡。地塞米松同時(shí)抑制th17細(xì)胞和treg細(xì)胞分化,但這種調(diào)控不單是通過detal-like4配體。detal-like4在1,25-二羥維生素d3抑制th17分化中發(fā)揮重要作用,進(jìn)一步表明detal-like4在dcs介導(dǎo)的th17分化中的作用。在體外阻斷detal-like4可以有利于恢復(fù)th17/treg平衡,為今后設(shè)計(jì)阻斷detal-like4的dcs治療哮喘提供新的思路。樹突狀細(xì)胞notch信號(hào)在1,25-二羥維生素d3調(diào)節(jié)th17
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-15
• 中文摘要15-23
• 前言23-26
• 第一章 1,25-二羥維生素D3對(duì)LPS處理的OVA致敏的小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞表型的影響26-57
• 1.1 材料與方法26-40
• 1.2 結(jié)果40-55
• 1.3 討論55-56
• 1.4 小結(jié)56-57
• 第二章 1,25-二羥維生素D3及LPS處理OVA致敏小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞在共培養(yǎng)中對(duì)T細(xì)胞分化的影響57-73
• 2.1 材料與方法57-62
• 2.2 結(jié)果62-70
• 2.3 討論70-72
• 2.4 小結(jié)72-73
• 第三章 1,25-二羥維生素D3及LPS處理OVA致敏小鼠 脾臟樹突狀細(xì)胞表達(dá)的Detal-like4配體對(duì)Th17細(xì)胞分化的影響73-87
• 3.1 材料與方法73-78
• 3.2 結(jié)果78-83
• 3.3 討論83-85
• 3.4 小結(jié)85-87
• 全文結(jié)論87-88
• 參考文獻(xiàn)88-93
• 文獻(xiàn)綜述Notch信號(hào)通路在CD4+ T輔助細(xì)胞分化中的作用93-107
• 參考文獻(xiàn)102-107
• 攻讀博士期間發(fā)表的文章107-108
• 致謝108-109

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱安友;呂合作;張倫軍;胡建國;王鳳超;李柏青;;結(jié)核分枝桿菌耐熱抗原激活的人γδT細(xì)胞Th2極性分化特征以及T-bet/GATA-3對(duì)分化的調(diào)控作用[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2015年01期

  本文關(guān)鍵詞：樹突狀細(xì)胞Notch信號(hào)在1，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：309878