背景外泌體（exosome）為細(xì)胞膜或多囊泡胞內(nèi)體與細(xì)胞膜融合過程中所產(chǎn)生的分子直徑30～100nm的小囊泡,在真核生物的血液、尿液和唾液等多種甚至全部體液中廣泛分布。近年來針對外泌體及其所含microRNA（miRNA）的研究發(fā)現(xiàn),其與乳腺癌的發(fā)病及預(yù)后關(guān)系密切,并且可能在乳腺癌的早期診斷和臨床評估中發(fā)揮重要作用。截至目前,已有大量針對乳腺癌細(xì)胞外泌體miRNA的研究發(fā)現(xiàn)其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)展階段和耐藥性息息相關(guān)。遺憾的是,大多數(shù)研究都在細(xì)胞系中進(jìn)行,其miRNA的變化并不能完全代表患者體內(nèi)miRNA水平的波動。此外由于外泌體的研究是近年來新興的熱點,受制于樣本數(shù)量及實驗規(guī)模,目前多數(shù)的研究仍基于既往血漿或病理組織中的結(jié)果展開。因此在本研究中,我們將直接針對乳腺癌患者血漿外泌體的研究,采用二代測序的方法對外泌體miRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行全面、深入的分析,篩選其可能的核心靶點,并嘗試建立與療效、預(yù)后等臨床事件的關(guān)聯(lián)。目的1)探索不同方法提取外泌體miRNA的差異,構(gòu)建有臨床應(yīng)用價值的實驗方法;2)明確外泌體miRNA在新輔助化療效果差異的Luminal A型乳腺癌患者中的不同表達(dá)水平以及... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

外泌體結(jié)構(gòu)示意圖

取的總ＲＮＡ樣本進(jìn)行片段選擇，通過膠分離技術(shù)收集１７－３０ｎｔＡ?片段，富集后按照?ＴｒｕＳｅｑ?Ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ?Ｓａｍｐｌｅ?Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕ８）方法及流程進(jìn)行。在分離得到的ＲＮＡ片段的兩端分別連接上接成ｃＤＮＡ，進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增建立測序文庫，具體如下。??（?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｒ??

圖３�。遥危炼鷾y序流程。（Ａ）為橋式擴(kuò)增、ＤＮＡ簇生成的流程，（Ｂ）??為邊合成邊測序的原理示意。??７．?dāng)?shù)據(jù)過濾處理??對高通量測序結(jié)果所獲得的原始測序序列（Ｒａｗ?Ｒｅａｄｓ）進(jìn)行去接頭、去低質(zhì)量片??段等處理，以獲得用于后續(xù)分析的目標(biāo)序列（Ｃｌｅａｎ?Ｒｅａｄｓ）。數(shù)據(jù)過濾處理的具??體步驟包括：??１）去除測序質(zhì)量較低的序列；??２）去除無法確定堿基信息的比例大于１０％的序列；??３）去除沒有３＇接頭的序列；??４）去除有５＇接頭污染的序列；??５）去除沒有插入片段的序列；??６）去除包含ｐｌｏｙＡ／Ｔ的序列（大部分連續(xù)的ｐｏｌｙＡ／Ｔ，可能來源于測序錯誤）；??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]外泌體及其在腫瘤診療中的意義[J]. 張敏,張晨光,丁衛(wèi).  生理科學(xué)進(jìn)展. 2014(05)



本文編號：3088901