研究背景與目的:胸腺表達(dá)的趨化因子（TECK,CCL25）,是一種由小腸上皮細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞及髓質(zhì)樹突狀細(xì)胞表達(dá)和分泌的趨化因子,通過與其唯一的受體CCR9結(jié)合,對胸腺細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和活化的巨噬細(xì)胞發(fā)揮趨化作用。最初,CCR9在調(diào)節(jié)胸腺細(xì)胞定位并促進(jìn)其發(fā)育、成熟以及促進(jìn)細(xì)胞向腸道歸巢方面的功能得到了全面的研究。最近的研究表明,正常小腸和腸系膜淋巴結(jié)中的CCR9⁺T細(xì)胞高表達(dá)CD69,而且血液循環(huán)中的CCR9⁺T細(xì)胞活化程度高于CCR9-細(xì)胞。另外,從外周血和小腸中分離出的CCR9⁺T細(xì)胞主要表達(dá)產(chǎn)生IFNγ的Th1細(xì)胞因子譜。Hepatic等先前發(fā)現(xiàn),原發(fā)性硬化性膽管炎患者肝臟中有激活的功能性CCR9⁺T細(xì)胞浸潤,這與病變部位（腸外和胸腺外）CCL25的異常高表達(dá)有關(guān)。CCL25/CCR9還具有授權(quán)效應(yīng)性/記憶性T細(xì)胞到達(dá)組織的強(qiáng)大功能。CCR9與CCL25的結(jié)合還可以抑制CD4⁺T細(xì)胞向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）分化。在自身免疫中,CCR9⁺... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 三陰性乳腺癌概述
        1.1.1 三陰性乳腺癌的病理特征及預(yù)后
        1.1.2 三陰性乳腺癌的免疫特點(diǎn)及免疫系統(tǒng)對三陰性乳腺癌預(yù)后的影響
        1.1.3 三陰性乳腺癌的靶向治療
    1.2 趨化因子的生理功能及在腫瘤微環(huán)境中的作用
        1.2.1 趨化因子的生理作用
        1.2.2 趨化因子在腫瘤中的作用
        1.2.3 CCL25 及其受體CCR9 的功能
    1.3 CD47 分子在腫瘤免疫逃逸中的作用
        1.3.1 CD47 分子的自我標(biāo)記作用
        1.3.2 靶向CD47 分子在腫瘤免疫治療中的作用
    1.4 抗PD-L1 抗體在腫瘤治療中的應(yīng)用
        1.4.1 PD-1/PD-L1 抗體的抗腫瘤作用機(jī)制
        1.4.2 PD-1 抗體在治療三陰性乳腺癌中的應(yīng)用
        1.4.3 影響PD-1/PD-L1 抗體治療效果的因素及通過聯(lián)合治療刺激免疫反應(yīng)增強(qiáng)PD-1/PD-L1 抗體療效的方法
    1.5 納米載體在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用
    1.6 小干擾RNA在腫瘤治療中的應(yīng)用
        1.6.1 si RNA的基因沉默功能機(jī)制
        1.6.2 納米系統(tǒng)遞送si RNA的優(yōu)勢
    1.7 本課題的研究目的及內(nèi)容
第2章 4T1 腫瘤中CCR9+淋巴細(xì)胞的浸潤與CCL25 無關(guān)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 細(xì)胞
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.3 研究對象
        2.2.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.6 主要溶液的配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）分離
        2.3.2 免疫組化
        2.3.3 小鼠 4T1 原位乳腺癌模型建立
        2.3.4 小鼠脾細(xì)胞的獲取
        2.3.5 小鼠腫瘤組織中單個(gè)核細(xì)胞的獲取
        2.3.6 T細(xì)胞體外增殖活化
        2.3.7 流式檢測
        2.3.8 數(shù)據(jù)分析及處理
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 健康志愿者與患者外周血T細(xì)胞CCR9 的表達(dá)差異
        2.4.2 CCL25 在人和小鼠的三陰性乳腺癌中的表達(dá)
        2.4.3 人結(jié)腸癌和三陰性乳腺癌中CCR9 的表達(dá)
        2.4.4 CCR9 在小鼠的脾臟和 4T1 腫瘤組織中的表達(dá)
+T細(xì)胞的活化表型">        2.4.5 CCR9⁺T細(xì)胞的活化表型
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第3章 納米顆粒的合成和體外及體內(nèi)作用的研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 細(xì)胞
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及耗材
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配置
        3.3.2 魚精蛋白/R10與siRNA的最適結(jié)合比例
        3.3.3 NP-siCD47/CCL25顆粒合成
        3.3.4 NP-siCD47/CCL25顆粒的表征
        3.3.5 細(xì)胞對NP-siCD47/CCL25顆粒的攝取
        3.3.6 NP-siCD47/CCL25體外沉默作用
        3.3.7 mRNA提取,逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR
        3.3.8 蛋白質(zhì)印跡分析
        3.3.9 蛋白質(zhì)印跡分析NP-siCD47/CCL25的組織分布和腫瘤富集
        3.3.10 納米顆粒NP-siCD47/CCL25體內(nèi)給藥后,siCD47和CCL25的體內(nèi)作用
        3.3.11 納米顆粒NP-siCD47/CCL25體內(nèi)給藥后,siCD47和CCL25的體內(nèi)作用
        3.3.12 免疫組化
        3.3.13 免疫熒光
        3.3.14 流式檢測
        3.3.15 數(shù)據(jù)處理
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 4T1 腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織 CCR9、CD47 和 PD-L1 的表達(dá)
        3.4.2 納米顆粒的設(shè)計(jì)和工作原理
        3.4.3 納米顆粒的表征
        3.4.4 4T1 細(xì)胞在中性和酸性條件下對顆粒的攝取
        3.4.5 NP-siCD47/CCL25顆粒的體外沉默效率
        3.4.6 納米顆粒在體內(nèi)重要器官及腫瘤組織、腫瘤細(xì)胞中的分布。
        3.4.7 體內(nèi)給藥后,siCD47的作用
        3.4.8 體內(nèi)給藥后,CCL25的作用
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第4章 納米顆粒NP-SICD47/CCL25的抗腫瘤作用
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 細(xì)胞
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)耗材及儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 BALB/c或BALB/c-nu小鼠4T1腫瘤形成抑制實(shí)驗(yàn)
        4.3.2 已建立的4T1腫瘤治療實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 抑制4T1腫瘤腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)
        4.3.4 治療后檢測腫瘤免疫微環(huán)境實(shí)驗(yàn)
        4.3.5 PD-1/PD-L1 抗體聯(lián)合治療實(shí)驗(yàn)
        4.3.6 病理檢測
        4.3.7 流式檢測
        4.3.8 數(shù)據(jù)處理
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 納米顆粒NP-siCD47/CCL25抑制4T1腫瘤原位生長
        4.4.2 納米顆粒NP-siCD47/CCL25抑制4T1腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移
+T細(xì)胞">        4.4.3 NP-siCD47/CCL25抑制4T1腫瘤生長的作用依賴CD8⁺T細(xì)胞
        4.4.4 NP-siCD47/CCL25對靶向PD-1/PD-L1的免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療4T1腫瘤作用的影響
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3055711