原發(fā)性肝癌具有較高的致死率和腫瘤異質(zhì)性,其中約90%為肝細(xì)胞癌（HCC）。在HCC中已鑒定了多種腫瘤干細(xì)胞（CSC）的生物標(biāo)志物,但對(duì)于不同CSC亞群中的代謝表型和共享信號(hào)分子或通路仍知之甚少。本課題圍繞肝細(xì)胞癌的CSC展開(kāi),分為如下兩個(gè)主要部分。第一部分:miR-192-5p（miR-192）在多組肝細(xì)胞癌CSC標(biāo)記物陽(yáng)性的HCC患者中,表達(dá)顯著沉默。在HCC病人隊(duì)列（n=241）中,定義五組CSC陽(yáng)性的HCC患者,即EpCAM⁺,CD90⁺,CD133⁺,CD44⁺和CD24⁺HCC,及相對(duì)應(yīng)陰性患者,進(jìn)而比較分析陽(yáng)性與陰性患者組間miRNA表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)14個(gè)miRNA在各組陽(yáng)性患者中均顯著表達(dá)下調(diào),且與預(yù)后相關(guān)。其中最顯著的miRNA為miR-192。隨后研究發(fā)現(xiàn),miR-192在肝臟中含量豐富且特異性強(qiáng)。在2個(gè)獨(dú)立的HCC隊(duì)列中（n=613）驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),miR-192在五組CSC陽(yáng)性亞群中均顯著下調(diào)。此外,過(guò)表達(dá)miR-192能顯著抑制HCC細(xì)胞的惡性表型如細(xì)胞遷移、侵襲... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 肝癌
        1.1.1 肝癌分類(lèi)
        1.1.2 肝癌的原發(fā)驅(qū)動(dòng)因素
    1.2 HCC的異質(zhì)性
        1.2.1 HCC的腫瘤干性（所用的CSC標(biāo)志物）
        1.2.2 腫瘤干性的信號(hào)通路調(diào)控
    1.3 腫瘤代謝
        1.3.1 HCC的腫瘤代謝
        1.3.2 腫瘤代謝與腫瘤干性的關(guān)系
        1.3.3 靶向糖酵解對(duì)腫瘤干性抑制
    1.4 微小RNA（microRNA）
        1.4.1 MicroRNA發(fā)現(xiàn)、功能
        1.4.2 MicroRNA參與HCC的腫瘤代謝
        1.4.3 MicroRNA參與HCC腫瘤干性
    1.5 腫瘤微環(huán)境
        1.5.1 廣譜定義
        1.5.2 代謝分子參與調(diào)控腫瘤微環(huán)境——乳酸
    1.6 本課題的主要科學(xué)問(wèn)題
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑盒
        2.1.6 抗體
        2.1.7 常規(guī)試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.4 慢病毒包裝及感染細(xì)胞
        2.2.5 雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 Western blot
        2.2.7 ECAR和 OCR檢測(cè)
        2.2.8 TRIzol法提細(xì)胞總RNA
        2.2.9 mRNA逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.10 microRNA逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.11 CRISPR/Cas9 基因編輯
        2.2.12 流式細(xì)胞分析
        2.2.13 2-NBDG的攝取,葡萄糖水平和乳酸水平檢測(cè)
        2.2.14 共培養(yǎng)體系
        2.2.15 細(xì)胞惡性程度體現(xiàn)（克隆形成、細(xì)胞遷移、侵襲、劃痕、懸浮小球）
        2.2.16 小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        2.2.18 引物序列
3 miR-192 抑制肝細(xì)胞癌的腫瘤干性
    3.1 前言
    3.2 miR-192-5p在5類(lèi)腫瘤干細(xì)胞陽(yáng)性亞群中均顯著降低
+的HCC病例">    3.3 作為肝臟特異性和高豐度的miRNA,miR-192-5p在 HCC病例中表達(dá)下降,尤其是CSC⁺的HCC病例
    3.4 miR-192-5p顯著抑制HCC細(xì)胞系的腫瘤干細(xì)胞表型
    3.5 miR-192KO細(xì)胞系的建立,及其干性表型
    3.6 miR-192 表達(dá)受甲基化影響
    3.7 miR-192 在癌癥中的相關(guān)研究
+肝細(xì)胞癌中過(guò)度的糖酵解">4 miR-192 的缺失導(dǎo)致CSC⁺肝細(xì)胞癌中過(guò)度的糖酵解
    4.1 前言
    4.2 miR-192 低水平表達(dá)的HCC病例中,糖酵解相關(guān)的代謝分子和基因呈現(xiàn)高表達(dá)
    4.3 miR-192 抑制肝細(xì)胞癌的糖酵解
    4.4 miR-192 缺失的HCC細(xì)胞消耗更多的葡萄糖
    4.5 三個(gè)關(guān)鍵糖酵解調(diào)控因子是miR-192 潛在靶基因,同時(shí)對(duì)增強(qiáng)HCC的腫瘤干性有重要意義
+HCC中高水平c-Myc/低水平miR-192 正反饋機(jī)制">    4.6 c-Myc抑制miR-192 轉(zhuǎn)錄水平,進(jìn)而維持高糖酵解水平的CSC⁺HCC中高水平c-Myc/低水平miR-192 正反饋機(jī)制
+的HCC細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量的乳酸激活微環(huán)境中非HCC細(xì)胞的p-Erk,從而促進(jìn)HCC細(xì)胞自身的腫瘤干性和惡性表型">    4.7 CSC⁺的HCC細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量的乳酸激活微環(huán)境中非HCC細(xì)胞的p-Erk,從而促進(jìn)HCC細(xì)胞自身的腫瘤干性和惡性表型
5 討論及意義
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1 引物列表
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3037634