發(fā)布時間：2020-11-21 08:36

　　 目的研究圍絕經(jīng)期失眠與腸道菌群的關(guān)系,及天王補心顆粒與天王補心飲片是否具有等效性,在此基礎(chǔ)上,探討天王補心顆粒通過調(diào)節(jié)圍絕經(jīng)期失眠患者腸道菌群的組成變化來發(fā)揮其臨床療效的潛在機制。方法1.理論探討:系統(tǒng)的總結(jié)回顧了中醫(yī)古籍及現(xiàn)代學(xué)者對于失眠的病名、病因、病機及治療方法的認識,闡述了中醫(yī)藥治療失眠的可能機制。分析了圍絕經(jīng)期失眠的中醫(yī)病因病機,總結(jié)出陰虛火旺,心神失養(yǎng)是圍絕經(jīng)期失眠的發(fā)病機理,滋陰安神法是圍絕經(jīng)期失眠的重要治法。同時也整理了天王補心方中多個單藥的藥理作用。為天王補心丹治療圍絕經(jīng)期失眠提供了理論依據(jù)。2.實驗研究:(1)分別從湖北省中醫(yī)院腦病科專家門診、湖北中醫(yī)藥大學(xué)國醫(yī)堂門診及武漢市中醫(yī)醫(yī)院治未病中心門診共收集女性圍絕經(jīng)期失眠病例13例,分別收集患者予以天王補心顆粒治療前、治療后及其非失眠配偶的糞便,采用宏基因組測序法分別檢測各組的腸道菌群組成。(2)分別從上述三個門診共收集失眠病例100例,采用隨機數(shù)字表法將患者隨機分為天王補心飲片組和天王補心顆粒組各50例,分別予以天王補心飲片和天王補心顆粒劑治療,觀察兩組的臨床有效率。其中,天王補心顆粒劑組中含有13例女性圍絕經(jīng)期失眠患者,我們在完成前述實驗的基礎(chǔ)上,再對患者使用天王補心顆粒治療前后分別采用匹茲堡睡眠指數(shù)量表、中醫(yī)證候積分、阿森斯量表、失眠嚴(yán)重程度指數(shù)、漢密爾頓抑郁量表和漢密爾頓焦慮量表進行療效評價。結(jié)果1.圍絕經(jīng)期失眠與腸道菌群的相關(guān)性研究圍絕經(jīng)期失眠組及其非失眠配偶對照組兩組腸道菌群基本信息分析顯示,圍絕經(jīng)期失眠組中含有1884種物種,對照組中含有1659種物種,兩組共同含有的物種總計有1336種。各個樣品均能夠在界、門、綱、目、科、屬、種這7個分類水平上穩(wěn)定注釋,且各個樣品間注釋程度相似。對照組與圍絕經(jīng)期失眠組之間存在羅氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌、普拉梭菌、擬桿菌、糞便擬桿菌和蔗糖梭菌等的組成異常。其中,羅氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌和蔗糖梭菌等菌群在圍絕經(jīng)期失眠組中較對照組占比更多,而普拉梭菌、擬桿菌和糞便擬桿菌則占比更少。2.天王補心顆粒與天王補心飲片的等效性研究及天王補心顆粒對圍絕經(jīng)期失眠的療效研究本研究共完成病例100例,天王補心顆粒劑組和天王補心飲片組各50例,其中天王補心顆粒劑組內(nèi)含有13例女性圍絕經(jīng)期失眠患者。天王補心顆粒/飲片治療100例失眠患者的臨床研究中,我們首先分別對兩組的性別、年齡、身高、體重、BMI等進行分析,結(jié)果顯示,兩組之間年齡、身高、體重、BMI等無明顯差異(P0.05),提示兩組之間一般情況基線均衡,具有可比性。我們緊接著對天王補心顆粒和天王補心飲片的臨床療效進行了觀察,結(jié)果顯示,天王補心顆粒劑組臨床有效率為76%,而天王補心飲片組的臨床有效率為78%,兩者的臨床有效率無顯著差異(P0.05)。天王補心顆粒劑干預(yù)圍絕經(jīng)期失眠患者的研究中,結(jié)果顯示,天王補心顆粒能夠顯著減少圍絕經(jīng)期失眠患者的匹斯堡量表得分、中醫(yī)證候評分、失眠嚴(yán)重程度指數(shù)、阿森斯量表、漢密爾頓焦慮量表和漢密爾頓抑郁量表評分等(P0.05)。3.天王補心顆粒對圍絕經(jīng)期失眠患者腸道菌群組成的影響天王補心顆粒治療圍絕經(jīng)期失眠前組及治療后組均含有1884種物種,兩組間物種無明顯區(qū)別。與治療前組相比,治療后組中羅氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌和蔗糖梭菌等豐度減少,而普拉梭菌、擬桿菌、糞便擬桿菌、雙歧桿菌和乳酸菌則占比增加。我們將天王補心顆粒治療后的菌群組成與對照組進行了對比,結(jié)果顯示,與對照組相比,天王補心顆粒治療后組相關(guān)菌群的豐度仍存在一定的差距。結(jié)論1.天王補心飲片和天王補心顆粒的療效具有等效性。2.天王補心顆粒能有效治療圍絕經(jīng)期失眠。3.圍絕經(jīng)期失眠與腸道菌群紊亂有關(guān),變化的主要菌種為羅氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌、普拉梭菌、擬桿菌、糞便擬桿菌和蔗糖梭菌的。4.天王補心顆粒通過調(diào)節(jié)圍絕經(jīng)期女性失眠患者體內(nèi)紊亂的腸道菌群來發(fā)揮其臨床療效。
【學(xué)位單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

我們對納入的對照組及失眠組的樣品組成物種進行檢測。結(jié)果顯示,對照組含有1659種物種,失眠組中含有1884種物種,兩組共同含有的物種總計有1336種。我們根據(jù)以上信息繪制韋恩圖(見圖1),并以此為基礎(chǔ)進行后續(xù)進一步分析。4.4兩組間物種組成分析

基于Bracken結(jié)果的絕對豐度及注釋信息,對每個樣品在一共7個分類水平界、門、綱、目、科、屬、種(Kingdom,Phylum,Class,Order,Family,Genus,Species)上的序列數(shù)目占總序列數(shù)的比例進行統(tǒng)計,可以有效的評估樣本的物種注釋分辨率,注釋到屬/種的比例越高則表示該樣本的注釋效果越好。如圖2所示,各個樣品均能夠在界、門、綱、目、科、屬、種這7個分類水平上穩(wěn)定注釋,且各個樣品間注釋程度相似。我們進一步對所有樣本進行統(tǒng)計和分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在界水平(圖3),兩組中均檢測到物種:Bacteria,物種占比情況:Bacteria(100.00%);在門水平(圖4);兩組中檢測到擬桿菌門(Bacteroidetes),厚壁菌門(Firmicutes),變形菌門(Proteobacteria),放線菌門(Actinobacteria)等;在綱水平(圖5),兩組間均可檢測到擬桿菌綱(Bacteroidia),梭菌綱(Clostridia),Negativicutes綱,丙型變形菌綱(Gammaproteobacteria),放線菌綱(Actinobacteria)等;在目水平(圖6),兩組間均可檢測到擬桿菌目(Bacteroidales),Enterobacterales目,Selenomonadales目,梭菌目(Clostridiales)等;在科水平(圖7),兩組間均可檢測到瘤胃菌科(Ruminococcaceae),普雷沃氏菌科(Prevotellaceae),毛螺菌科(Lachnospiraceae),擬桿菌科(Bacteroidaceae)等;在屬水平(圖8),兩組間均可檢測到瘤胃球菌屬(Ruminococcus),糞桿菌屬(Faecalibacterium),巨單胞菌屬(Megamonas),氏菌屬(Roseburia),普氏菌屬(Prevotella),擬桿菌屬(Bacteroides)等;在種水平(圖9),兩組間均可檢測到擬桿菌(Bacteroides vulgatus),普氏菌(Prevotella copr),單形擬桿菌(Bacteroides uniformis),卵圓擬桿菌(Bacteroides ovatus),單形巨單胞菌(Megamonas funiformis),普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)等。由于在綱、目、科、屬、種水平上,物種的分類較多,從而導(dǎo)致在圖5-9中無法全部展示其所有的分類,基于此,我們進一步對所獲得的結(jié)果進行分析,將樣品名作為橫坐標(biāo)(Sample Name),縱坐標(biāo)(Sequence Number Percent)表示注釋到該分類水平的序列數(shù)目占總注釋數(shù)據(jù)的比率,柱狀圖自上而下的顏色順序?qū)?yīng)于右側(cè)的圖例顏色順序。在各分類水平?jīng)]有注釋的序列被歸為unclassified一類。圖例中最多只顯示最優(yōu)勢的20個種類,余下的相對豐度較低的物種被歸類為Other在圖中展示。同時,我們?yōu)榱烁忧宄娘@示對照組與失眠組之間物種的組成差異,我們將屬于對照組的樣品歸類并命名為A組,將屬于失眠組的樣品歸類并命名為B組,結(jié)果見圖10-14。由于入組人群的個體差異性存在,各組內(nèi)樣品間的物種組成不盡相同,為了更好的觀察對照組與失眠組之間物種的組成差異,我們將實驗樣品分為A組和B組,并對其進行統(tǒng)計和分析,結(jié)果如圖15-20所示。在門水平上,兩組之間存在擬桿菌門,厚壁菌門,變形菌門的組成差異;在綱水平,A組與B組之間存在擬桿菌綱,梭菌綱,Negativicutes綱和丙型變形菌綱等組成差異;在目水平,兩組間存在擬桿菌目,Selenomonadales目,Enterobacterales目,梭菌目和韋永氏球菌目的組成不同;在科水平,兩組間存在擬桿菌科,毛螺菌科,瘤胃菌科,普雷沃氏菌科,Selenomonadales科,Enterobacterales科,韋永氏球菌科,tannerellaceae科,韋榮球菌科和雙歧桿菌科之間的組成差異;在屬水平,A、B兩組間存在瘤胃球菌屬,糞桿菌屬,巨單胞菌屬,氏菌屬,普氏菌屬,擬桿菌屬,布勞特氏菌屬,埃希氏菌屬和lachnoclostridium屬的組成不同;而在種水平,兩組間存在擬桿菌,普氏菌,單形擬桿菌,糞便擬桿菌,單形巨單胞菌,普拉梭菌,羅氏拜瑞氏菌和瘤胃球菌的組成差異。

為了研究正常組與失眠組之間的差異性,我們根據(jù)相關(guān)參考文獻[114-116],選擇了絕對豐度排名前20名的物種,通過進行聚類分析從而構(gòu)建樣品的聚類,以此考察兩組間在各個分類水平上的差異性。結(jié)果見圖21-26,圖21-26分別體現(xiàn)了兩組在門、綱、目、科、屬、種這六種分類水平上的聚類情況。由于圖21-26圖中信息較多且繁雜,為更加清晰的體現(xiàn)對照組及失眠組在各分類水平上的聚類情況,我們將樣品分為A、B兩組,然后再進行聚類分析,結(jié)果見圖27-32。種是生物分類系統(tǒng)上的基本單位,種、屬相對于門、綱、目、科而言,更加細致也更加準(zhǔn)確。因此,在本試驗中,我們對圖31及圖32進行分析,結(jié)果顯示,A、B兩組之間存在羅氏拜瑞氏菌,瘤胃球菌,普氏菌,普拉梭菌,擬桿菌,糞便擬桿菌,蔗糖梭菌等的組成差異,其中,圍絕經(jīng)期失眠組中羅氏拜瑞氏菌,瘤胃球菌,普氏菌和蔗糖梭菌等組成占比較對照組多,而普拉梭菌,擬桿菌,糞便擬桿菌在整體菌群中占比則較對照組少。提示圍絕經(jīng)期失眠患者與正常人相比,其體內(nèi)的腸道菌群組成發(fā)生變化,變化的主要菌種為羅氏拜瑞氏菌,瘤胃球菌,普氏菌,普拉梭菌,擬桿菌,糞便擬桿菌和蔗糖梭菌。圖4 各樣本在門水平的物種相對分布圖
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本文編號：2892809