本文關(guān)鍵詞：模擬微重力及延胡索乙素對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251MG凋亡的影響及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性膠質(zhì)瘤是最常見的嚴(yán)重危害人類健康的顱內(nèi)腫瘤之一。由于其呈浸潤性生長,多與腦組織無明顯分界,手術(shù)難以全切,故術(shù)后復(fù)發(fā)率高,生存率低;而常用抗腫瘤藥物對(duì)機(jī)體損害大、毒副作用強(qiáng);且腫瘤細(xì)胞易產(chǎn)生耐藥性,影響治療效果[1]。所以,研究治療腦惡性膠質(zhì)瘤的方法和藥物已成為腦惡性膠質(zhì)瘤治療中的熱點(diǎn)問題[2]。研究證實(shí),藥物治療腦惡性膠質(zhì)瘤主要是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn),因此,探討治療方法和藥物對(duì)腦惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡的影響,具有重要的意義。隨著對(duì)中藥治療惡性膠質(zhì)瘤的相關(guān)研究不斷展開,中藥抗惡性膠質(zhì)瘤的作用已被證實(shí)[8]。作為中醫(yī)氣機(jī)升降理論中的重要組成部分,中藥通過升降的不同特性發(fā)揮著治療腫瘤的作用[9]。于是,我們以導(dǎo)師王宗仁教授臨床實(shí)踐為基礎(chǔ),結(jié)合古代醫(yī)案中篩選出治療腦腫瘤的出現(xiàn)頻次最高的中藥,觀其抗惡性膠質(zhì)瘤的作用效果,為進(jìn)一步研發(fā)治療惡性膠質(zhì)瘤的中藥提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。隨著航天生命科學(xué)的發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)，失重或模擬微重力能夠減慢細(xì)胞生長，影響期周期，促進(jìn)其凋亡，而惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有增值快、細(xì)胞周期失控和抗凋亡等特性，因此，我們選用模擬微重力這一與提升作用類似的手段對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251 MG進(jìn)行干預(yù),觀察其對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期,以及細(xì)胞凋亡的影響。第一部分基于中醫(yī)古籍挖掘的治療腦腫瘤高頻藥物分析目的:篩選古代醫(yī)籍中,即具有升降作用,又具有抗腦腫瘤作用的高頻藥物。方法:應(yīng)用文本發(fā)掘的方法,收集整理古代治療腦腫瘤的醫(yī)籍,提取醫(yī)案;運(yùn)用Microsoft Access軟件建立古代腦腫瘤病醫(yī)案的數(shù)據(jù)庫,運(yùn)用SAS 9.1統(tǒng)計(jì)軟件和頻數(shù)的數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法對(duì)治療腦腫瘤的高頻藥物進(jìn)行挖掘分析,篩選出治療腦腫瘤的高頻藥物。結(jié)果:在343份古籍醫(yī)案中,共記錄143味中藥,高頻藥物集中在前32味,其中以累積頻率達(dá)77.53%。其中,具升調(diào)作用的中藥有11個(gè),占整個(gè)高頻藥物群的34.37%。頻次最高的為具有升提作用的中藥延胡索。結(jié)論:具有升提作用的延胡索是篩選出的治療腦腫瘤頻次最高的中藥。第二部分dl-THP抗惡性膠質(zhì)瘤的作用及機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)一dl-THP對(duì)U251MG凋亡及p53和p21表達(dá)的影響目的:觀察不同濃度的dl-THP對(duì)U251MG凋亡以及p53和下游p21表達(dá)的影響。方法:用不同濃度的dl-THP干預(yù)U251MG,采用CCK-8法檢測(cè)U251MG增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;選用蛋白免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白p53、p21的表達(dá),同時(shí),采用p53抑制劑PFT-α與dl-THP聯(lián)合處理U251MG,觀察U251MG增殖和凋亡。結(jié)果:(1)不同濃度的dl-THP干預(yù)U251MG后,U251MG的增殖均明顯受到抑制(P0.01),并呈濃度依賴性;(2)U251MG凋亡率隨干預(yù)濃度的升高而增加(P0.01);(3)U251MG中p53和p21的表達(dá)上調(diào)(P0.01),PFT-α與dl-THP聯(lián)合處理U251MG后,U251MG的增殖和凋亡被抑制。結(jié)論:dl-THP能在體外抑制U251MG的增殖,并促進(jìn)凋亡,其促進(jìn)凋亡的機(jī)制可能與p53被激活及其下游的p21生成及穩(wěn)定表達(dá)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)二dl-THP對(duì)U251MG荷瘤裸鼠的抑瘤作用及p53和p21表達(dá)的影響目的:觀察dl-THP對(duì)U251MG荷瘤裸鼠抗惡性膠質(zhì)瘤作用及對(duì)p53和p21蛋白表達(dá)的影響。方法:將U251MG種植于BALB/C-nu裸鼠皮下,建立U251MG荷瘤裸鼠模型。連續(xù)給予dl-THP(1mg/Kg/day,2mg/Kg/day)10d后,剝離瘤體,稱重、測(cè)量體積、計(jì)算抑瘤率,并觀察模型小鼠生存時(shí)間;采用免疫組織化學(xué)法和蛋白免疫印跡法檢測(cè)dl-THP治療后瘤體組織內(nèi)p53和p21蛋白的表達(dá)。結(jié)果:(1)dl-THP干預(yù)組的抑瘤率分別為54.2%(dl-THP 1mg/Kg/day)和65.9%(dl-THP2mg/Kg/day),與對(duì)照組相比具有顯著的差異性(P0.01);(2)dl-THP干預(yù)組最長生存時(shí)間為34d;(3)瘤體組織內(nèi)的p53和p21的蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.01)。結(jié)論:dl-THP能明顯抑制瘤組織增長,延長荷瘤小鼠的生存時(shí)間,其作用機(jī)制可能與瘤體組織內(nèi)的p53和p21蛋白表達(dá)上調(diào)促進(jìn)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。第三部分模擬微重力對(duì)U251MG凋亡及p21和IGFBP-2表達(dá)的影響目的:觀察模擬微重力對(duì)U251MG的增殖、細(xì)胞周期和凋亡的影響及促凋亡的機(jī)制。方法:在模擬微重力干預(yù)U251MG 12h、24h、48h、72h后,采用CCK-8法檢測(cè)增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期;透射電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡;采用熒光玻片蛋白芯片篩選與凋亡相關(guān)的細(xì)胞因子,并選用蛋白免疫印跡法和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)模擬微重力對(duì)凋亡相關(guān)蛋白IGFBP-2和p21蛋白及m RNA表達(dá)。結(jié)果:(1)模擬微重力干預(yù)12h、24h、48h、72h后,U251MG的增殖明顯受到抑制(P0.01),并具有時(shí)間依賴性;(2)U251MG的細(xì)胞周期分布發(fā)生明顯改變(P0.01),且隨模擬微重力干預(yù)時(shí)間的增加,逐漸由S期阻滯漸向G0/G1期阻滯轉(zhuǎn)變;(3)U251MG凋亡數(shù)量增加(P0.01),凋亡率隨著干預(yù)時(shí)間的延長而增加(P0.01),并出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和形態(tài)的改變;(4)U251MG中p21的蛋白和m RNA表達(dá)上調(diào),相反,IGFBP-2的表達(dá)下調(diào)(P0.01)。結(jié)論:模擬微重力能抑制U251MG增殖、阻滯其細(xì)胞周期及促進(jìn)其凋亡;凋亡發(fā)生的機(jī)制可能與p21和IGFBP-2的表達(dá)異常有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：腦腫瘤 頻次 升提 延胡索 dl-THP U251MG 凋亡 p53 p21 dl-THP U251MG荷瘤裸鼠模型 p21 p53 模擬微重力 U251MG 凋亡 p21 IGFBP-2
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-28
• 第一部分 基于中醫(yī)古籍挖掘的治療腦腫瘤高頻藥物分析28-38
• 引言28
• 1 資料28-29
• 2 方法29-32
• 3 結(jié)果32-36
• 4 結(jié)論36
• 5 討論36-38
• 第二部分DL-THP抗惡性膠質(zhì)瘤作用及機(jī)制38-67
• 實(shí)驗(yàn)一DL-THP對(duì)U251MG凋亡及P53和P21表達(dá)的影響38-54
• 引言38
• 1 材料38-40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-46
• 3 結(jié)果46-50
• 4 結(jié)論50
• 5 討論50-54
• 實(shí)驗(yàn)二DL-THP對(duì)U251MG荷瘤裸鼠的抑瘤作用及P53和P21表達(dá)的影響54-67
• 引言54
• 1 材料54-55
• 2 實(shí)驗(yàn)方法55-58
• 3 結(jié)果58-62
• 4 結(jié)論62
• 5 討論62-67
• 第三部分 模擬微重力對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251MG凋亡及P21和IGFBP-2 表達(dá)的影響67-89
• 引言67
• 1 材料67-68
• 2 實(shí)驗(yàn)方法68-79
• 3 結(jié)果79-86
• 4 結(jié)論86
• 5 討論86-89
• 小結(jié)89-90
• 參考文獻(xiàn)90-106
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果106-108
• 致謝108

  本文關(guān)鍵詞：模擬微重力及延胡索乙素對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251MG凋亡的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：268543