本文關(guān)鍵詞：CD100及其受體PlexinB2在銀屑病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:銀屑病作為臨床常見(jiàn)的一種慢性炎癥性皮膚病,其典型臨床表現(xiàn)為邊界清晰的鱗屑性紅斑塊[1,2],組織病理以表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)過(guò)度增生及分化異常、真皮炎細(xì)胞浸潤(rùn)為特征。銀屑病易反復(fù)且病情頑固,對(duì)患者生活質(zhì)量影響很大。但關(guān)于銀屑病的確切發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,其治療并不理想。因此,關(guān)于銀屑病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究一直是皮膚科學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)。以往的研究發(fā)現(xiàn),KC和T細(xì)胞的相互作用在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用,是銀屑病發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制之一[3]。KC與T細(xì)胞相互作用所形成的惡性循環(huán),是使銀屑病皮損經(jīng)久不愈的重要原因之一。因此,想要更進(jìn)一步探索闡明銀屑病的發(fā)病機(jī)制,必須更進(jìn)一步深入研究KC與T細(xì)胞之間的相互作用,這對(duì)尋找新的治療方法具有重大意義。近期,有研究證實(shí),小鼠γδT細(xì)胞表面的CD100分子可與KC表面的Plexin-B2結(jié)合,促進(jìn)γδT細(xì)胞的形態(tài)改變和遷移[4],提示CD100-Plexin B2是介導(dǎo)γδT細(xì)胞與KC相互作用的重要機(jī)制。CD100,即Semaphorin 4D,是一種重要的免疫調(diào)節(jié)分子,在T細(xì)胞表面高表達(dá),其作用為調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答,并以可溶型形式(s CD100)以較低水平存在于血清中。CD100的高親和力受體是Plexin-B1和Plexin B2,表達(dá)于多種上皮和內(nèi)皮細(xì)胞以及神經(jīng)和免疫細(xì)胞,參與多種組織細(xì)胞的增殖和遷徙。前期工作中,通過(guò)分析s CD100在銀屑病患者的表達(dá),我們發(fā)現(xiàn),相比于正常對(duì)照,進(jìn)展期銀屑病患者血清中s CD100表達(dá)水平明顯升高,并且,Plexin B2也在銀屑病患者皮損KC上高表達(dá),在濕疹和正常表皮組織中的表達(dá)量則很低,提示CD100-Plexin B2很可能通過(guò)介導(dǎo)KC和γδT細(xì)胞的相互參與了銀屑病發(fā)病,但確切作用及其機(jī)制尚不明確。我們提出假說(shuō)認(rèn)為,CD100與Plexin B2相互作用參與了銀屑病發(fā)病:一方面銀屑病患者體內(nèi)s CD100與皮損KC表面Plexin B2結(jié)合,調(diào)控KC增殖、遷移或其他生物學(xué)活性,另一方面KC通過(guò)其膜表面Plexin B2作用于表皮內(nèi)γδT細(xì)胞,調(diào)控其在表皮內(nèi)的活化和遷移。目的:1.進(jìn)一步明確CD100及Plexin B2在銀屑病患者組織中的表達(dá),明確CD100對(duì)KC的作用。2.利用咪喹莫特(IMQ)誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型,闡明CD100及Plexin B2在小鼠銀屑病模型中的作用。3.在體外細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,闡明CD100-Plexin B2相互作用的分子機(jī)制。方法:1.利用免疫組化、Western-blot、ELISA及RT-PCR與Real-time RT-PCR等方法,分析CD100及其受體Plexin B2在銀屑病患者血清及皮損的表達(dá)。2.利用CD100體外作用于Hacat細(xì)胞和原代KC,分別從細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及凋亡等多個(gè)方面,進(jìn)行CD100對(duì)KC作用的評(píng)估;進(jìn)一步利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn),觀察分析原代KC和Hacat細(xì)胞經(jīng)CD100體外刺激24h后,細(xì)胞的遷移和侵襲改變。3.構(gòu)建咪喹模特銀屑病小鼠模型,檢測(cè)皮損CD100和Plexin B2的表達(dá);以Plexin B2-si RNA作用于銀屑病小鼠模型,從大體、HE、浸潤(rùn)細(xì)胞等層面分析Plexin B2沉默對(duì)銀屑病模型的影響,進(jìn)一步分析Plexin B2沉默后皮損浸潤(rùn)細(xì)胞類(lèi)型、表達(dá)細(xì)胞因子等情況,以探索Plexin B2發(fā)揮作用的機(jī)制。4.體外細(xì)胞培養(yǎng)中干涉Plexin B2的表達(dá),觀察Plexin B2表達(dá)降低對(duì)原代KC和Hacat細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡等不同方面的影響,并檢測(cè)Plexin B2沉默后,相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的變化。5.基于體外細(xì)胞培養(yǎng),分析CD100-Plexin B2作用的下游信號(hào)通路。結(jié)果:1.銀屑病患者外周血中s CD100表達(dá)水平較正常人明顯增高,銀屑病患者皮損局部CD100及plexin B2表達(dá)水平明顯高于正常皮膚及正常人。2.s CD100能夠促進(jìn)Hacat細(xì)胞和原代KC增殖、遷移和侵襲,抑制Hacat細(xì)胞和原代KC凋亡;干涉Plexin B2能夠抑制CD100誘導(dǎo)的KC增殖,提示CD100是通過(guò)與Plexin B2相互作用來(lái)促進(jìn)KC的增殖和侵襲;3.成功構(gòu)建咪喹模特(IMQ)誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型,IMQ誘導(dǎo)七天后,小鼠耳部皮膚出現(xiàn)明顯增厚并伴有紅腫和大量鱗屑,皮損Plexin-B2表達(dá)增高;干涉Plexin B2表達(dá)后,小鼠耳部皮膚的增厚、紅腫和鱗屑明顯緩解,皮損T細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)顯著減少,并且,同時(shí)可觀察到IL-17、IL-22、IL-36、CXCL1、CCL20等炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平明顯下降,表明Plexin B2在IMQ銀屑病模型中發(fā)揮重要作用。4.干涉Plexin B2能明顯抑制Hacat細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,明顯抑制細(xì)胞侵襲和遷移能力;干涉Plexin B2能夠抑制銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子、誘導(dǎo)KC趨化因子產(chǎn)生,提示影響相關(guān)細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生是Plexin B2發(fā)揮功能的重要方式。5.干涉Plexin B2可抑制Hacat細(xì)胞中的Akt及Erk信號(hào)的活化,提示CD100作用于Hacat細(xì)胞主要是通過(guò)Plexin B2激活下游Akt和Erk信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用。結(jié)論:我們發(fā)現(xiàn)CD100及其配體Plexin B2在銀屑病異常表達(dá);CD100-Plexin B2相互作用可以促進(jìn)KC的遷移及增殖;Plexin B2通過(guò)影響相關(guān)細(xì)胞因子及趨化因子的分泌、調(diào)控局部皮膚淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)參與小鼠銀屑病模型的發(fā)病;CD100-Plexin B2的下游信號(hào)途徑包括Akt和Erk信號(hào)通路。我們發(fā)現(xiàn)并首次揭示了CD100-Plexin B2分子間相互作用在銀屑病發(fā)病中的重要作用及潛在機(jī)制,為銀屑病治療提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 Plexin-B2 CD100 淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-16
• 文獻(xiàn)回顧16-34
• 1 材料34-42
• 1.1 主要儀器設(shè)備34-35
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑35-37
• 1.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制37-40
• 1.4 其它材料40-42
• 2 方法42-53
• 2.1 CD100 及PlexinB2 在銀屑病患者中的表達(dá)分析42-47
• 2.2 Plexine-B2 在咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型中的作用47-49
• 2.3 CD100 及PlexinB2 在角質(zhì)形成細(xì)胞中的作用49-52
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析52-53
• 3 結(jié)果53-72
• 3.1 CD100 及其配體Plexin B2 在銀屑病患者的表達(dá)水平及其對(duì)KC生物學(xué)功能的影響53-60
• 3.2 在體干涉Plexin B2 對(duì)咪喹莫特（IMQ）誘導(dǎo)的銀屑病表型的影響60-64
• 3.3 CD100 及其受體Plexin B2 促進(jìn)銀屑病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究64-72
• 4 討論72-76
• 小結(jié)76-77
• 參考文獻(xiàn)77-88
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果88-89
• 致謝89

  本文關(guān)鍵詞：CD100及其受體PlexinB2在銀屑病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：258630