本文關(guān)鍵詞：SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達及對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學行為的影響和機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景子宮內(nèi)膜癌(Endometrial carcinoma, EC)是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于宮頸癌,但是在一些發(fā)達國家及我國北京、上海等發(fā)達地區(qū)其發(fā)病率達到甚至超過了宮頸癌,而且有逐年上升并且年輕化的趨勢。由于子宮內(nèi)膜癌的臨床癥狀明顯,便于及時發(fā)現(xiàn),并且就診時多處于疾病的早期階段,加之高分化子宮內(nèi)膜樣腺癌居多,其惡性程度低,預后較好,早期患者5年生存率達90%左右。然而由于取材的局限性或誤診為月經(jīng)不調(diào),約15%患者就診時已處于疾病的晚期階段,預后較差,死亡率高達60%。子宮內(nèi)膜癌的治療方法除了常規(guī)手術(shù)和放化療外,缺少新的治療手段,患者生存率在很長一段時間內(nèi)無明顯改善。近年來,腫瘤的靶向治療成為腫瘤研究的熱點與難點,但對于子宮內(nèi)膜癌尚無有效的靶向治療的方向。因此,探究新的特異性強、敏感性高的腫瘤靶分子具有重要的臨床意義。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent Information Regulatorl, SIRT1)是一種依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide, NAD+)的去乙�；�,它可使多種組蛋白和非組蛋白的賴氨酸殘基發(fā)生去乙�；Ｋ娜ヒ阴；钚阅苁蛊淇梢耘c多種重要的轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子作用,調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、染色質(zhì)的穩(wěn)定性及靶基因的活性,從而參與機體的多種生物學功能,如能量代謝、應激反應和細胞衰老等。因此,SIRT1在糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病及代謝性疾病等多種疾病中發(fā)揮著重要的作用。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)SIRT1對腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有一定的影響,其在腫瘤中作為抑癌基因或促癌基因,是由不同組織中的SIRT1上下游調(diào)節(jié)因子分布不同決定的。SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中的表達國內(nèi)外未見研究。同時,另有研究表明,SIRT1可調(diào)節(jié)FoxO1的表達,進而調(diào)節(jié)脂類代謝等細胞生理過程；FoxO1活化后可調(diào)節(jié)多種基因的表達,其中包括固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1(Sterol Regulatory Element Binding Protein 1, SREBP1),其通過降低Spl和SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄活性、干擾轉(zhuǎn)錄起始復合物在SREBP-1c啟動子區(qū)的組裝進而抑制SREBP-1轉(zhuǎn)錄。然而在子宮內(nèi)膜癌中SIRT1和SREBP1的相關(guān)性未見研究。SREBP1是一類固定于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜的具有堿性螺旋-環(huán)-螺旋-亮氨酸拉鏈的結(jié)構(gòu)膜連接蛋白的成員,它能調(diào)節(jié)脂肪酸合成中大多數(shù)酶的活性,例如乙酰輔酶A羧化酶、脂肪酸合成酶、硬脂�；o酶A脫氫酶等。在腫瘤細胞中,脂肪酸的合成是增加的。許多研究表明,SREBP1在多種腫瘤中高表達。我們課題組在以前的研究中表明,SREBP1在子宮內(nèi)膜癌和卵巢中均為高表達,SREBP1的表達與FIGO分期和組織分化程度密切相關(guān),同時體內(nèi)、體外實驗證實,沉默SREBP1的表達可以誘導細胞凋亡,抑制細胞增殖。另有研究表明,抑制SREBP1或其下游的靶基因,能誘導細胞進入凋亡程序。因此SREBP1在腫瘤中可能作為促癌基因發(fā)揮作用。本研究探討SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達情況,分析SIRT1的表達與患者的年齡、疾病分期、腫瘤分化程度等臨床病理特征的相關(guān)性,及與患者生存率的相關(guān)性,通過檢測SREBP1的表達情況,研究SIRT1對子宮內(nèi)膜癌細胞的生物學行為的影響和作用機制,為子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷、預后評價和靶向治療提供新的理論依據(jù)。第一部分SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達及與臨床病理特征的相關(guān)性研究目的：檢測子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生和正常子宮內(nèi)膜組織中的SIRT1蛋白、基因水平的表達情況,并分析其與患者年齡、疾病分期、腫瘤分化程度等臨床病理特征的相關(guān)性,及與患者生存率的相關(guān)性,初步探討S1RT1在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。方法：本研究采用免疫組織化學技術(shù)檢測SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達情況,并通過隨訪研究,應用SPSS統(tǒng)計軟件分析SIRT1的表達與臨床病理特征的相關(guān)性及與患者生存率的相關(guān)性；同時采用實時熒光定量RT-PCR及Western-blot技術(shù)檢測SIRT1在60例新鮮子宮內(nèi)膜樣腺癌及其癌旁正常子宮內(nèi)膜組織中的基因、蛋白質(zhì)的定量表達情況。結(jié)果：1.在子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織中SIRT1均在細胞核中表達。在三者中的陽性表達率分別為81.5%、54.2%、47.1%。SIRT1的陽性表達率在子宮內(nèi)膜樣腺癌組中明顯高于子宮內(nèi)膜不典型增生組及正常子宮內(nèi)膜組,P0.05,差異有顯著性,而子宮內(nèi)膜不典型增生組與正常子宮內(nèi)膜組相比較,P0.05,無統(tǒng)計學差異。2.SIRT1的陽性表達率在子宮內(nèi)膜樣腺癌中低分化組明顯高于高分化組,P0.05,有統(tǒng)計學差異；在Ⅲ、Ⅳ期組明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組,P0.05,有統(tǒng)計學差異；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移組,P0.05,差異有顯著性；不同年齡組之間相比較,P0.05,無統(tǒng)計學意義。3.采用Kaplan-Meier法進行生存分析,結(jié)果顯示：SIRT1陽性表達的患者總體生存時間34.68±3.80個月,SIRT1陰性表達的患者總體生存時間44.93+3.31個月,總體生存時間SIRT1陽性表達的患者比SIRT1陰性表達的患者明顯要短,P0.05,有統(tǒng)計學差異。4.SIRT1的基因表達水平在新鮮子宮內(nèi)膜樣腺癌組織組明顯高于其癌旁正常子宮內(nèi)膜組織組,P0.05,有統(tǒng)計學差異；SIRT1的蛋白質(zhì)表達水平在新鮮子宮內(nèi)膜樣腺癌組織組中亦明顯高于其癌旁正常子宮內(nèi)膜組織組,P0.05,有統(tǒng)計學差異。結(jié)論：1.與子宮內(nèi)膜不典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織相比較,SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中高表達。2.子宮內(nèi)膜樣腺癌中SIRT1的表達與臨床病理分期、組織分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),而與年齡無關(guān)。3.子宮內(nèi)膜樣腺癌中SIRT1的陽性表達,提示較低的患者生存率,預示與不良預后密切相關(guān)。4.SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中作為促癌基因發(fā)揮作用,有待于成為子宮內(nèi)膜樣腺癌的新的腫瘤標志物,用于腫瘤診斷及預后判定。3.子宮內(nèi)膜樣腺癌中SIRT1的陽性表達,提示較低的患者生存率,預示與不良預后密切相關(guān)。4.SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中作為促癌基因發(fā)揮作用,有待于成為子宮內(nèi)膜樣腺癌的新的腫瘤標志物,用于腫瘤診斷及預后判定。第二部分SIRT1對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學行為的影響和作用機制研究目的：檢測SIRT1在子宮內(nèi)膜癌細胞系Ishikwa、ECC、RL95-2、KLE中的表達情況,應用基因干擾技術(shù)沉默SIRT1的表達,探討SIRT1對子宮內(nèi)膜癌細胞生長、增殖、遷移及侵襲的影響。并檢測SIRT1沉默前后SREBP1表達水平的變化,探討SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中的可能的作用機制。方法：應用Western-blot技術(shù)檢測SIRT1在4種子宮內(nèi)膜癌細胞系中的表達情況。構(gòu)建SIRT1的基因干擾系列,應用SIRT1 SiRNA沉默SIRT1的表達,利用慢病毒載體導入RL95-2細胞,應用Western-blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)導效率；研究SIRT1對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學行為的影響；并應用Western-blot技術(shù)檢測SIRT1沉默前后SREBP1表達量的變化。結(jié)果：1.SIRT1在子宮內(nèi)膜癌細胞系Ishikwa、ECC、RL95-2、KLE中表達的灰度值分別為4834.87±105.68、5022.51±89.46、6769.22±121.07、5822.68±178.64,可見SIRT1在RL95-2細胞系中的表達水平較高。2.應用Western-blot技術(shù)檢測干擾組與空質(zhì)粒載體組SIRT1表達的灰度值分別為1103.53±80.41、6157.70±212.69,轉(zhuǎn)導效率達81.4%以上。3.自動細胞計數(shù)結(jié)果顯示：細胞增殖速度干擾組明顯低于空質(zhì)粒載體組及空白對照組,P0.05,有統(tǒng)計學差異；而空質(zhì)粒載體組與空白對照組相比較,P0.05,無統(tǒng)計學意義。4.細胞克隆形成實驗結(jié)果顯示：直徑10mm細胞克隆形成的數(shù)目,干擾組明顯少于空質(zhì)粒載體組及空白對照組,P0.05,差異有顯著性,而空質(zhì)粒載體組與空白對照組相比較,P0.05,無統(tǒng)計學差異。5.細胞遷移和侵襲實驗結(jié)果顯示：細胞遷移數(shù)目,干擾組明顯少于空質(zhì)粒載體組及空白對照組,P0.05,有統(tǒng)計學差異,而空質(zhì)粒載體組及空白對照組相比較,P0.05,無統(tǒng)計學差異；細胞侵襲數(shù)目,干擾組亦明顯少于空質(zhì)粒載體組及空白對照組,P0.05,亦有統(tǒng)計學差異；而空質(zhì)粒載體組及空白對照組相比較,P0.05,無統(tǒng)計學差異。6. Western-blot技術(shù)檢測干擾組與空白對照組SREBP1的表達的灰度值分別為4815.68±101.28、2312.17±89.15,SREBP1的蛋白質(zhì)表達水平在干擾組中明顯低于空質(zhì)粒載體組,P0.05,有統(tǒng)計學意義。結(jié)論：1.進一步證實SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中的表達與組織分化程度密切相關(guān),并且篩選出干擾細胞系。2.SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中可能作為促癌基因發(fā)揮作用,可促進腫瘤細胞生長、增殖、遷移和侵襲。3.SIRT1可能作為子宮內(nèi)膜癌基因治療的靶位點,為子宮內(nèi)膜癌的治療提供新的思路。4.在子宮內(nèi)膜癌中,SIRT1可以影響SREBP1的表達,推測SIRT1可能通過影響脂代謝來發(fā)揮其腫瘤促進作用,有待進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜樣腺癌 沉默信息調(diào)節(jié)因子1 免疫組織化學技術(shù) 實時熒技術(shù)光定量RT-PCR技術(shù) Western-blot技術(shù) 子宮內(nèi)膜癌 SIRT1 基因干擾技術(shù) 細胞生長 細胞增殖 細胞遷移 細胞侵襲 SREBP1 脂代謝
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 符號說明17-19
• 第一部分 SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達及與臨床病理特征的相關(guān)性研究19-47
• 前言19-21
• 材料與方法21-32
• 結(jié)果32-34
• 討論34-39
• 結(jié)論39-40
• 第一部分相關(guān)圖表40-44
• 參考文獻44-47
• 第二部分 SIRT1對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學行為的影響及作用機制研究47-73
• 前言47-49
• 材料與方法49-56
• 結(jié)果56-58
• 討論58-63
• 結(jié)論63-64
• 第二部分相關(guān)圖表64-69
• 參考文獻69-73
• 致謝73-74
• 攻讀博士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄74-75
• 學位論文評閱及答辯情況表75-76
• 英文論文76-101

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄭素平;;RNA干擾在腫瘤治療方面的研究進展[J];中山大學研究生學刊(自然科學.醫(yī)學版);2011年02期

2 邵榮光;;小干擾RNA介導的多靶點腫瘤治療[J];藥學學報;2009年03期

  本文關(guān)鍵詞：SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達及對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學行為的影響和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：253080