【摘要】：背景及目的近年來,胰腺癌的發(fā)病率呈上升的趨勢,但傳統(tǒng)治療及現(xiàn)有的靶向治療并未取得很明顯的進(jìn)展,而胰腺間質(zhì)中的星形細(xì)胞則成為了尋找新的治療靶點(diǎn)的一個(gè)新熱點(diǎn)。透明質(zhì)酸是一種直鏈的多糖大分子。在哺乳類動(dòng)物中,透明質(zhì)酸合成酶2(Hyaluronan Synthase 2,HAS2)是合成透明質(zhì)酸最主要酶,而透明質(zhì)酸最主要的降解酶則是透明質(zhì)酸酶1(Hyaluronidase 1,HYAL1)。已有研究表明,透明質(zhì)酸在胰腺癌中發(fā)揮促腫瘤生長及促遷移的作用,但是其來源及作用機(jī)制尚不明晰。本研究分兩部分進(jìn)行:第一部分,我們探究了胰腺星形細(xì)胞在透明質(zhì)酸生成中的角色,然后利用外源性透明質(zhì)酸處理胰腺癌細(xì)胞系以驗(yàn)證其生物學(xué)效應(yīng),并探索透明質(zhì)酸處理后胰腺癌細(xì)胞中主要的透明質(zhì)酸受體分化簇抗原44(Cluster of Differentiation,CD44)和透明質(zhì)酸介導(dǎo)的細(xì)胞游走受體(Receptor of Hyaluronan Mediated Motility,RHAMM)的表達(dá)情況,初步探討了透明質(zhì)酸的作用機(jī)制。最后我們檢測了調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸代謝的主要酶在胰腺癌臨床樣本中的表達(dá),研究其臨床病理聯(lián)系。第二部分,我們研究了透明質(zhì)酸最主要的受體CD44及其下游信號通路之間的可能的銜接蛋白GRB2相關(guān)性結(jié)合蛋白(GRB2-associated binding protein,GAB2),成纖維細(xì)胞生長因子受體底物2(Fibroblast growth factor receptor substrate 2,FRS2)和 CRK樣原癌基因編碼的蛋白(CRK Like Proto-Oncogene,CRKL)在胰腺癌病例中的表達(dá)、臨床病理聯(lián)系及預(yù)后價(jià)值,為進(jìn)一步闡明透明質(zhì)酸在胰腺癌中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。材料與方法第一部分:我們應(yīng)用Real-Time PCR及Western Blot方法檢測了胰腺癌細(xì)胞系及原代胰腺星形細(xì)胞中調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸代謝的主要酶HAS2和HYAL1的表達(dá),并應(yīng)用Elisa和瓊脂糖凝膠電泳對胰腺癌細(xì)胞系,胰腺星形細(xì)胞上清中的透明質(zhì)酸進(jìn)行了定量和定性分析,同時(shí)驗(yàn)證了胰腺癌組織中透明質(zhì)酸的含量。隨后我們通過外源性透明質(zhì)酸處理或應(yīng)用shRNA敲降胰腺癌細(xì)胞中的HYAL1表達(dá),觀察對胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,然后通過Western Blot檢測透明質(zhì)酸處理對胰腺癌細(xì)胞中CD44和RHAMM表達(dá)的影響,分析可能的作用機(jī)制。最后在收集的胰腺癌臨床樣本中應(yīng)用免疫組化檢測HAS2和HYAL1的表達(dá),分析其臨床病理聯(lián)系。第二部分,我們從北京協(xié)和醫(yī)院病理樣本庫中調(diào)取了滿足以下要求的胰腺導(dǎo)管腺癌的樣本:1)登記日期為2011年1月至2016年1月)接受胰腺癌根治手術(shù)3)未接受術(shù)前放化療,對切片進(jìn)行病理復(fù)核,并進(jìn)行電話隨訪以獲得患者臨床病理資料及預(yù)后信息。應(yīng)用免疫組化檢測其中GBA2,CRKL及FRS2的表達(dá),研究其與胰腺癌患者臨床病理特點(diǎn)的聯(lián)系及預(yù)后價(jià)值。結(jié)果:第一部分:活化的胰腺星形細(xì)胞中HAS2的表達(dá)高于靜止的胰腺星形細(xì)胞;胰腺星形細(xì)胞中HAS2和HYAL1的表達(dá)均低于胰腺癌細(xì)胞。胰腺癌組織中的透明質(zhì)酸主要以高分子量透明質(zhì)酸形式存在;胰腺星形細(xì)胞上清中的透明質(zhì)酸為高分子量透明質(zhì)酸,其含量顯著高于胰腺癌細(xì)胞。使用高分子量透明質(zhì)酸處理胰腺癌細(xì)胞可促進(jìn)其遷移,抑制其增殖。敲降HYAL1后可降低高分子量透明質(zhì)酸促胰腺癌細(xì)胞遷移的能力,并減少透明質(zhì)酸入胞。高分子量透明質(zhì)酸處理后胰腺癌細(xì)胞中CD44發(fā)生斷裂。在18例臨床樣本中,HAS2的表達(dá)率為85.17%,而HYAL1則在所有病例的腫瘤細(xì)胞中表達(dá);HAS2的表達(dá)與腫瘤大小及神經(jīng)侵襲相關(guān)。第二部分:GAB2、CRKL、FRS2的陽性率分別為40%,53.95%和 35.06%。GAB2、CRKL、FRS2及三者共表達(dá)都為無病生存期及總生存期的不良預(yù)后因素,其中GAB2陽性為無病生存期的獨(dú)立不良預(yù)后因素,而GAB2/CRKL/FRS2共表達(dá)為總生存期的獨(dú)立不良預(yù)后因素。結(jié)論:活化的胰腺星形細(xì)胞中高表達(dá)的HAS2是胰腺癌間質(zhì)中高分子量透明質(zhì)酸的來源之一。高分子量透明質(zhì)酸可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的遷移,該作用可能與HYAL1表達(dá)及CD44斷裂相關(guān)。此外,CD44潛在的下游分子銜接蛋白GAB2、CRKL及FRS2在胰腺癌中普遍表達(dá),具有顯著的預(yù)后價(jià)值。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.9

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本文編號：2464605