【摘要】：研究背景與目的:非甾體類抗炎藥相關(guān)性胃病(NSAIDs related gastritis,簡稱NSAIDs相關(guān)性胃病),是指服用非甾體類抗炎藥后出現(xiàn)的胃黏膜損傷,包括上腹痛、黑便、惡心、泛酸、燒心等癥狀,內(nèi)鏡下表現(xiàn)為胃黏膜的急性炎癥、糜爛、潰瘍等改變,嚴重者可出現(xiàn)消化道大出血等急危重癥。非甾體類抗炎藥具有退熱、抗炎、止痛、抑制免疫等作用,隨著其被廣泛運用于各類相關(guān)疾病,如阿司匹林廣泛應用于心腦血管疾病的防治、塞來昔布等止痛藥應用于痛風性關(guān)節(jié)炎等等,非甾體類抗炎藥相關(guān)性胃病發(fā)病率逐年增加。據(jù)不完全統(tǒng)計,全世界有超過3萬人每日服用NSAIDs,其中有將近40%為60歲以上的老年患者。流行病學調(diào)查顯示,將近25%的非甾體類抗炎藥使用人群出現(xiàn)胃腸道的副作用,15~20%的長期服用者出現(xiàn)消化性潰瘍,甚至每年約有2%~4%的患者服用NSAIDs后出現(xiàn)上消化道出血、穿孔等急性并發(fā)癥�，F(xiàn)代醫(yī)學對NSAIDs相關(guān)性胃病的防治主要包括改變劑型或開發(fā)新的衍生物、合理與合并用藥、聯(lián)合運用抑酸藥或抗酸藥及胃黏膜保護劑、抗HP治療等措施。但這些方法存在總體臨床療效并不顯著、治療藥物本身也有副作用,此外還增加了患者的經(jīng)濟負擔等問題和不足。因此,從中西醫(yī)的研究領(lǐng)域?qū)SAIDs相關(guān)性胃病的發(fā)病機制進行深入研究有著重要的意義。祖國醫(yī)學在治脾胃疾病有豐富的經(jīng)驗。本病屬于中醫(yī)學中"胃脘痛病"的范疇。中醫(yī)學認為,胃為空腔之腑,以通為用,其氣主降濁,胃與脾臟相表里,脾為后天之本,主升清,脾升胃降,斡旋中焦氣機,氣機暢達則脾胃功能正常,若氣機升降失和,氣機不暢,不暢則痛;脾胃主運化水谷精微,為氣血化生之源,脾虛胃弱,氣血化生乏源,氣虛血虧,不榮則痛;氣虛無力推動血行,氣虛血停,胃絡(luò)瘀阻,不通則痛。本病病位在脾胃,病因多為素體虧虛,加之外邪入侵,外實內(nèi)虛,病機虛實夾雜,故治療上需在扶正補虛的基礎(chǔ)上輔以祛邪。此外,嶺南地區(qū)獨特的氣候環(huán)境,因此嶺南地區(qū)的NSAIDs相關(guān)性胃病也具有其獨特性。但目前尚缺乏對NSAIDs相關(guān)性胃病以及該病在嶺南地區(qū)中醫(yī)證候規(guī)律的深入研究。近年來大量研究表明,MicroRNA參與細胞的各項生理變化,同時與胃黏膜損傷有密切相關(guān)。MicroRNA-21(miR-21)的高表達與細胞核轉(zhuǎn)運因子(NF-κB)相關(guān)。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn),非甾體類抗炎藥能抑制前列腺素E,同時激活NF-κB通路,NF-κB通路的激活可導致IL-6、IL-8、TNF-α等炎癥因子大量釋放,從而導致胃黏膜的急性炎癥;MicroRNA-21作為上游通路,miR-21的表達與NF-κ B蛋白的表達存在內(nèi)在相關(guān)性,可能也與胃黏膜粘蛋白的表達相關(guān),粘蛋白則與幽門螺旋桿菌感染具有密切相關(guān)性�；谏鲜鰧τ贜SAIDs相關(guān)性胃病的中西醫(yī)認識,本研究提出miR-21表達可能與非甾體類抗炎藥相關(guān)性胃病、幽門螺旋桿菌感染及中醫(yī)證型可能具有相關(guān)性的科學假說。本研究在中醫(yī)辨證論治的理論指導下,以非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病的中醫(yī)證型為切入點,與西醫(yī)基礎(chǔ)實驗研究相結(jié)合,深入探討該病的中醫(yī)臨床證型分布規(guī)律,并首次探索非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病胃黏膜組織miR-21表達情況與中醫(yī)證型可能存在的相關(guān)性,以深入揭示中醫(yī)證型的實質(zhì)和科學內(nèi)涵,為NSAIDs相關(guān)性胃病中醫(yī)辨證論治提供客觀參考,從而更好地指導中醫(yī)臨床實踐的開展。研究方法:(1)研究對象:2016年至2017年間,廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院脾胃病門診及病房等科室就診的"胃脘痛"患者作為研究對象,根據(jù)納入標準及排除標準納入研究;(2)所有符合條件的"胃脘痛"患者均于廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院內(nèi)鏡室行胃鏡檢查,并取活檢,留取胃黏膜標本,同時排除萎縮性胃炎、早癌等病變;(3)所有符合條件患者均行13碳呼氣試驗檢測,明確HP感染情況;(4)所有符合條件患者均在副主任醫(yī)師及以上職稱的醫(yī)生指導下,采取雙人對照的形式,通過中醫(yī)四診進行辨證分型,以明確非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者的中醫(yī)證型;(5)采用qRT-PCR(實時熒光定量PCR)檢測胃黏膜標本中的miR-21相對表達量;(6)采用流式細胞學方法,檢測胃黏膜標本組織中的粘蛋白相對表達量,采用免疫印跡實驗(Western Blot)檢測胃黏膜標本組織中NF-κ B相對表達水平;(7)運用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測胃黏膜組織中細胞炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α表達水平;(8)通過頻數(shù)分析總結(jié)高頻癥狀及證型,探討NSAIDs相關(guān)性胃病的中醫(yī)證型及發(fā)病特點;(9)對中醫(yī)證型與miR-21、NF-κB表達水平的相關(guān)性進行分析;(10)采用pearson相關(guān)系數(shù)分析方法對幽門螺旋桿菌感染與miR-21及NF-κ B相關(guān)性進行分析;(11)對miR-21表達水平與NF-κ B、IL-6、IL-8及TNF-α表達水平的相關(guān)性進行可行性分析。研究結(jié)果:(1)120例研究者中,舌質(zhì)的分布特點為:舌邊有齒痕頻數(shù)最高(56例),舌淡紅次之(46例),其次依次為紅(40例)、胖大(34例)、嫩舌(23例);舌苔方面的分布情況為:苔白頻數(shù)最高(56例),其次是黃苔(36例)、苔黃膩(34例)、苔薄(28例)。因不同證型之間舌像存在重疊現(xiàn)象,故統(tǒng)計時例數(shù)超過120例。(2)120例研究者中,有58名患者脈象為"脈細",所占比例為58.3%;有50名患者脈象為"弱脈",所占比例為41.7%;有36名患者脈象為"滑脈",所占比例為30.0%;有26名患者脈象為"脈無力",所占比例為21.7%;有20名患者脈象為"沉脈",所占比例為16.7%;有18名患者脈象為"數(shù)脈",所占比例為15.0%;有10名患者脈象為"澀脈",所占比例為8.3%。(3)120例研究者中,有36名患者中醫(yī)臨床證型為"脾胃濕熱證",所占比例為30%;有15名患者中醫(yī)臨床證型為"肝脾不和證",所占比例為12.50%;有10名患者中醫(yī)臨床證型為"瘀血內(nèi)阻證",所占比例為8.3%;有36名患者中醫(yī)臨床證型為"脾胃氣虛證",所占比例為30%;有20名患者中醫(yī)臨床證型為"脾胃虛寒",所占比例為16.7%;有3名患者中醫(yī)臨床證型為"胃陰虧虛",所占比例為3%;肝脾不和、瘀血內(nèi)阻證及胃陰虧虛證的比例較少,為方便實驗統(tǒng)計,將胃陰虧虛證予以剔除。從NSAIDs相關(guān)性胃病證型與西醫(yī)臨床分型的分布頻數(shù)表中可大體看出,脾胃濕熱證及脾胃氣虛證以糜爛性胃炎居多,其中,脾胃濕熱證中糜爛性胃炎為27例,所占比例為75%,脾胃氣虛證中糜爛性胃炎為26例,所占比例為72%。(4)中醫(yī)證型與西醫(yī)臨床分型分布情況分析發(fā)現(xiàn):各證型的西醫(yī)臨床分型均以糜爛性胃炎為主,其中脾胃濕熱證和脾胃氣虛證患者中糜爛性胃炎占70%以上,其余3種證型在40%左右,fisher精確概率法結(jié)果顯示組間差異有統(tǒng)計學意義,P=0.024,表明不同中醫(yī)證型的西醫(yī)臨床分型不完全一致,存在差異。(5)非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者的幽門螺旋桿菌感染情況:陽性(+)或(++)患者所占比例87.5%;陰性(-)患者占所有患者比例12.5%。不同證型非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病合并HP感染的情況:脾胃氣虛證患者感染HP陽性率為89.47%;肝胃不和證患者感染HP陽性率為66.67%;瘀血內(nèi)阻感染HP陽性率為83.33%;脾胃濕熱證感染HP陽性率為90%;胃陰虧虛證患者感染HP陽性率為50%;脾胃虛寒證患者感染HP陽性率為78.57%。除脾胃虛寒證外,脾胃濕熱證與其它證型的幽門螺桿菌感染情況存在統(tǒng)計學差異(調(diào)整后檢驗水準a=0.05/10=0.005),此外,脾胃氣虛證與脾胄虛寒證存在統(tǒng)計學差異,其余證型間的幽門螺桿菌感染情況差異無統(tǒng)計學意義。(6)非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者胃黏膜組織表達miR-21量為43.50±10.02,對照組的胃黏膜組織mmiR-21相對表達量為17.83±1.99,兩者比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001),表明非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者胃黏膜表達較高水平的mmiR-21;幽門螺旋桿菌感染陰性患者的胃黏膜組織miR-21相對表達量為34.90±7.05;幽門螺旋桿菌陽性患者的胃黏膜組織表達miR-21的相對量為49.90±6.26;對照組的胃黏膜表達miR-21的相對量為18.28±2.33;HP陰性/陽性兩組胃黏膜組織miR-21相對表達量與對照組的miR-21相對表達量具有統(tǒng)計學差異,結(jié)果顯示,非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病無論有無幽門螺旋桿菌感染,其病變胃黏膜組織的miR-21具有較高的表達。(7)脾胃氣弱證患者的病變胃黏膜組織miR-21相對表達量為48.39±8.36;脾胃虛寒證患者病變胃黏膜組織miR-21相對表達量為33.19±10.67;脾胃濕熱證患者病變胃黏膜組織miR-21相對表達量為45.14± 12.31;胃陰虧虛的miR-21相對表達量極少,為方便統(tǒng)計比較,將其剔除,肝脾不和證組的患者病變胃黏膜組織miR-21相對表達量為17.69±11.67,瘀血內(nèi)阻證的患者病變胃黏膜組織miR-21相對表達量為18.19±10.67。通過脾胃氣虛組、脾胃濕熱組及其他證型組兩兩對比,可以看出,脾胃濕熱組、脾胃虛弱組的miR-21相對表達量均較其他證型組高,差異具有統(tǒng)計學意義,而脾胃氣虛組與脾胃濕熱組患者胃黏膜病變組織miR-21相對表達量相比較,對比無明顯統(tǒng)計學差異。(8)非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者胃黏膜組織NF-κB表達量為0.63±0.15,正�？瞻讓φ战M的病變胃黏膜組織NF-κ B表達量為0.22±0.08,兩者對比差異具有統(tǒng)計學意義,提示非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織的NF-κB具高表達。在幽門螺旋桿菌方面,HP陰性的患者胃黏膜病變組織的NF-κB相對表達量為0.70±0.92;幽門螺旋桿菌HP陽性的患者,胃黏膜病變組織NF-κ B相對表達量為0.57±0.21;正常對照組胃黏膜組織的NF-κB相對表達量為0.24±0.09;非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病病變的兩組患者胃黏膜NF-κB的表達量與對照組相比具有統(tǒng)計學差異;而病變組中HP(-)與HP(+)的病變胃黏膜組織的NF-κ B的相對表達量沒有明顯統(tǒng)計學差異。(9)"脾胃氣虛證"患者胃黏膜病變組織NF-κ B相對表達量為0.65±0.13;"脾胃虛寒證"組NF-κ B相對表達量為0.62±0.12;"脾胃濕熱證"組患者胃黏膜病變組織NF-κ B相對表達量為0.70±0.11;"肝脾不和證"組及"瘀血內(nèi)阻證"組患者胃黏膜病變組織NF-κB相對表達量分別為0.25±0.11、0.11±0.12。進一步兩兩比較(Bonfferoni)法結(jié)果顯示,除脾胃虛寒證、脾胃氣虛證外,脾胃濕熱證與其它證型NF-κ B表達存在統(tǒng)計學差異,其余證型間NF-κ B的表達差異無統(tǒng)計學意義,結(jié)果如表3-16所示。(10)非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織內(nèi)炎癥因子IL-8表達平均為38.66± 10.86,對照組胃黏膜組織的炎癥細胞因子IL-8表達水平為2.11 ± 1.36,差別具有統(tǒng)計學意義;非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織內(nèi)炎癥因子IL-6表達水平為17.94±9.74,對照組胃黏膜組織的炎癥細胞因子IL-6表達水平為5.23±1.48,差別具有統(tǒng)計學意義;非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織內(nèi)炎癥細胞因子TNF-α表達水平為19.68±5.55,對照組胃黏膜組織的炎癥細胞因子TNF-α表達水平為1.15±1.79,差別具有統(tǒng)計學意義;結(jié)果顯示,非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者,病變胃黏膜組織中的相關(guān)炎癥細胞因子IL-8、IL-6及TNF-α的表達均增加,表明非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織具有明顯的炎癥反應。(11)本研究采用相關(guān)系數(shù)對比的方法,以相對表達量作為原始數(shù)據(jù)比較,通過量的比較的方法表達,胃黏膜組織內(nèi)miR-21相對表達量與NF-1κB蛋白胃黏膜組織內(nèi)相對表達量兩者之間的相關(guān)程度,用相關(guān)系數(shù)r來表示,相關(guān)系數(shù)r的取值范圍限于-1與+1之間,相關(guān)系數(shù)r越接近0表示偏離相關(guān)及相關(guān)性越小,相關(guān)系數(shù)r越接近+1表示正性相關(guān)性越大,反之相關(guān)系數(shù)r越接近-1表示負性相關(guān)性越大。統(tǒng)計結(jié)果表明,非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織MiR-21與病變胃黏膜組織內(nèi)NF-κB表達水平存在正相關(guān),其相關(guān)系數(shù)r為0.91,P=0.02。研究結(jié)論:(1)非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病的外因為感受寒邪(性味寒涼之NSAIDs藥物),內(nèi)因為正氣不足,脾虛是本病發(fā)病之根本,濕熱是嶺南地區(qū)NSAIDs相關(guān)性胃病的主要病機特點,其病位在脾胃,與肝腎有關(guān),其病性屬本虛標實,虛當以脾氣虧虛為主,亦有脾胃陽虛之證;實則以脾胃濕熱為主,亦有兼夾肝脾不和、瘀血內(nèi)阻的情況。(2)本研究對象中,與空白組相比,非甾體抗炎藥相關(guān)性胃病患者病變胃黏膜組織miR-21、NF-κB蛋具有較高水平表達;與其他證型相比,脾胃濕熱證和脾胃氣虛證患者的miR-21、NF-κ B蛋白以及IL-8、IL-6及TNF-α等指標上有較高的表達水平,反映了這兩個證型患者的發(fā)病機制與miR-21及NF-κ B蛋白的高表達相關(guān),而miR-21通路上調(diào)表達可能激活NF-κB通路,從而導致IL-8、IL-6及TNF-α等大量的細胞因子的釋放增加,出現(xiàn)組織炎癥改變,從而導致NSAIDs相關(guān)性胃病的發(fā)生與發(fā)展。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R259

【參考文獻】

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本文編號：2377139