【摘要】：研究背景椎間盤(pán)退變與下腰痛有很大的聯(lián)系。祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)早期治療與未病先防,對(duì)腰椎間盤(pán)退變等慢性病、難治病有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),其中補(bǔ)腎活血法是治療椎間盤(pán)退行性疾病的常用方法之一�；谘甸g盤(pán)退變機(jī)理,并結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn),以腎虛血瘀立法,根據(jù)古方青娥丸加減形成的青娥方,在臨床治療相關(guān)疾病中取得了較好的療效。但目前該方的作用機(jī)理還不明晰,對(duì)該方的臨床應(yīng)用尚缺乏基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的支持,故有必要對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行研究,為該方以及補(bǔ)腎活血法治療椎間盤(pán)退行性疾病提供依據(jù)。然而中醫(yī)藥成分眾多、作用復(fù)雜,再結(jié)合研究對(duì)象體內(nèi)代謝及環(huán)境差異等因素,使我們難以全方位的深入探明其機(jī)制,如何排除多種因素的干擾,明確中醫(yī)藥對(duì)該類疾病的作用,是我們面臨的挑戰(zhàn)；同時(shí)為了更好的防治該類疾病,還需詳細(xì)了解椎間盤(pán)的退變機(jī)理,其中生物力學(xué)與椎間盤(pán)退變關(guān)系密切,因此有必要探究生物力學(xué)與椎間盤(pán)之間的聯(lián)系及作用,而構(gòu)建理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)研究椎間盤(pán)退變的發(fā)病機(jī)制和臨床干預(yù)有著重要的意義。目前椎間盤(pán)退變模型主要分為體內(nèi)模型和體外模型兩大類,體外模型又分為離體培養(yǎng)的細(xì)胞和器官模型。將完整的椎間盤(pán)器官在體外進(jìn)行整體培養(yǎng),能夠在可控的條件下研究椎間盤(pán)代謝和退變的相關(guān)機(jī)制,為觀察椎間盤(pán)對(duì)外界刺激的反應(yīng)和正常與退變椎間盤(pán)的組織學(xué)變化創(chuàng)造了良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。在此基礎(chǔ)上,相關(guān)研究離體培養(yǎng)了脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段模型,包括整個(gè)椎間盤(pán)器官連同椎體,使模型一方面更接近體內(nèi)環(huán)境,另一方面為加載裝置提供了固定的施力處,為控制和研究生物力學(xué)對(duì)椎間盤(pán)的影響提供條件。本研究將脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段與生物力學(xué)相結(jié)合,為觀察生物力學(xué)與椎間盤(pán)的關(guān)系,以及研究中藥防治椎間盤(pán)退變的機(jī)制提供更好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。研究目的：1.觀察青娥方治療椎間盤(pán)源性腰痛的臨床療效;2.比較離體培養(yǎng)的兔椎間盤(pán)器官及脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段兩種模型椎間盤(pán)髓核組織的變化,為研究生物力學(xué)對(duì)椎間盤(pán)的影響提供條件；3.建立離體兔脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段壓力退變模型,研究靜態(tài)壓力負(fù)荷對(duì)椎間盤(pán)的影響,并為進(jìn)一步研究中藥防治椎間盤(pán)退變提供條件；4.觀察青娥方含藥血清對(duì)離體兔脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段壓力退變模型的影響,初步探討其作用機(jī)制,為補(bǔ)腎活血法治療椎間盤(pán)退行性疾病提供依據(jù)。研究方法：1.對(duì)43例椎間盤(pán)源性腰痛患者使用青娥方治療,日一劑,早晚口服,連續(xù)服用2周,于治療前、治療第1周、治療第2周、療程結(jié)束后1個(gè)月隨訪時(shí)進(jìn)行VAS與ODI評(píng)分,觀察臨床癥狀,判定療效；2.將21只新西蘭白兔隨機(jī)分為器官組8只,節(jié)段組13只,處死后在無(wú)菌條件下分別取出椎間盤(pán)器官和脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段各50個(gè),在高滲培養(yǎng)基中進(jìn)行整體培養(yǎng)(410mOsm/kg),于培養(yǎng)前及培養(yǎng)后第3、7、14、21天,兩組各取10個(gè)椎間盤(pán)分別進(jìn)行HE染色、蛋白多糖特染、II型膠原免疫組化和髓核細(xì)胞活力測(cè)定。3.將14只新西蘭白兔隨機(jī)分為對(duì)照組與壓力組各7只,處死后在無(wú)菌條件下分別取出脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段各28個(gè),對(duì)照組放入六孔板中,壓力組放入脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段離體加載和培養(yǎng)裝置中,在高滲培養(yǎng)基中進(jìn)行整體培養(yǎng),兩組培養(yǎng)液中均含有10%無(wú)藥血清,于培養(yǎng)前及培養(yǎng)后第3、7、14天,兩組各取7個(gè)椎間盤(pán)分別進(jìn)行HE染色、蛋白多糖特染、II型膠原免疫組化和Real-time PCR檢測(cè)。4.將14只新西蘭白兔隨機(jī)分為壓力組與含藥組各7只,處死后在無(wú)菌條件下分別取出脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段各28個(gè),均放入脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段離體加載和培養(yǎng)裝置中,在高滲培養(yǎng)基中進(jìn)行整體培養(yǎng),其中含藥組與壓力組培養(yǎng)液中分別含有10%青娥方含藥血清與10%無(wú)藥血清,于培養(yǎng)前及培養(yǎng)后第3、7、14天,兩組各取7個(gè)椎間盤(pán)分別進(jìn)行HE染色、蛋白多糖特染、I1型膠原免疫組化和Real-time PCR檢測(cè)。研究結(jié)果：1.43例患者治療第1周有效率為86.04%,治療第2周及隨訪時(shí)有效率為90.69%；治療第1周、第2周與隨訪時(shí)的VAS及ODI評(píng)分均與治療前有明顯差異(P0.001),治療第2周、隨訪時(shí)的VAS及ODI評(píng)分與治療第1周也有差異(P0.05),但治療第2周與隨訪時(shí)的VAS及ODI評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P0.05);2.培養(yǎng)21d器官組與培養(yǎng)14d節(jié)段組HE示椎間盤(pán)組織結(jié)構(gòu)基本保持完整,21d節(jié)段組椎間盤(pán)組織形態(tài)學(xué)破壞；蛋白多糖PAS/AB染色7d內(nèi)兩組強(qiáng)度無(wú)降低,14d兩組強(qiáng)度均有所減弱,21d節(jié)段組染色強(qiáng)度進(jìn)一步減弱,改變比器官組更為明顯；21d器官組與14d節(jié)段組Ⅱ型膠原免疫組化染色強(qiáng)度無(wú)顯著差異(P0-05),21d節(jié)段組染色變淺,與之前各時(shí)間點(diǎn)及器官組相比有顯著差異(P0.05);髓核細(xì)胞熒光檢測(cè)兩組7d時(shí)強(qiáng)度較培養(yǎng)前變化不明顯(P0.05),21d器官組與14d節(jié)段組強(qiáng)度略有降低,但與之前時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)顯著差異(P0.05),21d節(jié)段組髓核細(xì)胞熒光強(qiáng)度減弱,細(xì)胞活性降低,與之前各時(shí)間點(diǎn)及器官組比較差異明顯(P0.05)。3.對(duì)照組培養(yǎng)至14d形態(tài)基本維持良好,壓力組3d后形態(tài)完整性逐漸被破壞；蛋白多糖含量對(duì)照組7d時(shí)降低,壓力組3d時(shí)就顯著降低,并且分布不均勻；Ⅱ型膠原含量對(duì)照組始終較穩(wěn)定無(wú)明顯變化(P0.05),壓力組3d時(shí)出現(xiàn)明顯升高,與培養(yǎng)前及對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),7d時(shí)又明顯降低,與對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),14d時(shí)與7d無(wú)明顯差異(P0.05),與對(duì)照組差異顯著(P0.01);Real time-PCR檢測(cè)Agg的基因表達(dá)顯示,與培養(yǎng)前比對(duì)照組3d時(shí)無(wú)明顯變化(P0.05),7d與14d降低與培養(yǎng)前相比有明顯差異(P0.05),壓力組3d時(shí)便顯著下降(P0.05),7d與14d進(jìn)一步下降,與對(duì)照組差異明顯(P0.01);COL2a1的基因表達(dá)顯示對(duì)照組較培養(yǎng)前表達(dá)下降(P0.05),但培養(yǎng)期間表達(dá)水平較穩(wěn)定(P0.05),而壓力組3d時(shí)表達(dá)上調(diào)(P0.05),與對(duì)照組比有顯著差異(P0.01),7d時(shí)表達(dá)又明顯下調(diào)(P0.05),與培養(yǎng)前及對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),14d與7d相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但與對(duì)照組比有明顯差異(P0.01)。4.壓力組3d后形態(tài)完整性逐漸被破壞,含藥組培養(yǎng)至7d形態(tài)基本維持良好,14d時(shí)形態(tài)破壞與壓力組相似；蛋白多糖含量壓力組3d時(shí)就顯著降低,7d后下降更明顯,且分布不均勻,含藥組3d時(shí)著色強(qiáng)度部分減弱,7d與14d也均明顯減弱,提示蛋白多糖含量減少；Ⅱ型膠原含量壓力組與含藥組3d時(shí)均出現(xiàn)明顯升高(P0.05),且含藥組更加顯著(P0.05),7d時(shí)又均明顯降低(P0.05),但含藥組仍比壓力組含量高(P0.05),14d兩組則反應(yīng)均較弱無(wú)明顯差異(P0.05);Real time-PCR檢測(cè)Agg的基因表達(dá)顯示,與培養(yǎng)前比兩組3d時(shí)便顯著下降(P0.05),但與壓力組相比含藥組表達(dá)明顯(P0.01),7d與14d表達(dá)進(jìn)一步下降(P0.05),兩組之間無(wú)明顯差異(P0.05);COL2a1的基因表達(dá)顯示兩組3d時(shí)表達(dá)上調(diào)(P0.05),且含藥組更加顯著(P0.01),7d后均明顯下降(P0.05),但含藥組仍比壓力組表達(dá)水平高(P0.05),14d兩組表達(dá)水平均較低無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論青娥方能有效改善腎虛血瘀型椎間盤(pán)源性腰痛患者的臨床癥狀與功能活動(dòng),隨訪期療效穩(wěn)定；離體兔脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段可在短周期內(nèi)(14d)作為研究生物力學(xué)對(duì)椎間盤(pán)影響的離體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停唤⒘艘粋�(gè)針對(duì)離體兔脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段的壓力退變模型,該模型可作為研究生物力學(xué)與椎間盤(pán)退變的相關(guān)性,以及中藥防治椎間盤(pán)退變機(jī)制的離體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?青娥方含藥血清短期內(nèi)(7d)能一定程度上延緩椎間盤(pán)退變,為補(bǔ)腎活血法對(duì)椎間盤(pán)退變的早期防治作用提供了依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2322853