【摘要】：目的:干細胞旁分泌與干細胞分化成血管內(nèi)皮細胞或平滑肌細胞一樣,對于干細胞血管再生治療來說都是一種非常重要的機制。細胞分泌的微泡已經(jīng)被證實能在細胞間相互作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本項研究的目的是探討脂肪干細胞釋放的微泡在促進血管再生治療中的潛在機制,探討微泡miRNA是否參與其中發(fā)揮作用。方法:內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細胞,提取微泡及微泡中的小RNA,微泡、微泡小RNA或miR-31刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞、小鼠動脈環(huán)等,評估微泡、微泡小RNA及miR-31對血管再生的作用。實驗從細胞水平及動物水平分組進行。大致分為以下幾組:1、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細胞微泡(MV),2、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細胞微泡(MV-P),3、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細胞微泡小RNA,4、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細胞微泡小RNA,5、anti-miR31陰性對照組(anti-miR31-cont.),6、anti-miR31組(anti-miR31),7、mimic-miR31陰性對照組(mimic-miR31-cont.),8、mimic-miR31組(mimic-miR31),9、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細胞微泡小RNA+anti-miR31陰性對照組(GM-MV-RNA/antimiR31-cont.),10、普通培養(yǎng)液培養(yǎng)的脂肪干細胞微泡小RNA+anti-miR31組(GM-MV-RNA/anti-miR31),11、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細胞微泡小RNA+anti-miR-31陰性對照組(EDM-MV-RNA/anti-miR31-cont.),12、內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理的脂肪干細胞微泡小RNA+anti-miR31組(EDM-MV-RNA/antimiR31)。分別進行管樣結(jié)構(gòu)形成、細胞遷移及增殖等血管再生相關(guān)實驗,動物實驗方面進行小鼠主動脈環(huán)實驗及Mitrigel Plug實驗等。同時檢測miR-31多種靶基因水平的變化,評估靶基因水平的變化是否在微泡miR-31促血管再生中發(fā)揮一定的作用。結(jié)果:1.脂肪干細胞微泡促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細胞遷移,內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細胞能上調(diào)脂肪干細胞微泡的促血管再生作用;2.脂肪干細胞微泡小RNA促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細胞遷移,內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細胞能上調(diào)脂肪干細胞微泡小RNA的促血管再生作用;3.MiR-31促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細胞遷移,下調(diào)miR-31水平抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細胞遷移;4.抑制脂肪干細胞微泡小RNA的miR-31能逆轉(zhuǎn)脂肪干細胞微泡小RNA的促進細胞管樣結(jié)構(gòu)形成及細胞遷移作用;5.脂肪干細胞微泡促進小鼠主動脈環(huán)管樣結(jié)構(gòu)形成,促進小鼠Mitrigel Plug管樣結(jié)構(gòu)形成,內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細胞能上調(diào)脂肪干細胞微泡的促血管再生作用;6.抑制脂肪干細胞微泡小RNA的miR-31能逆轉(zhuǎn)脂肪干細胞微泡小RNA的促小鼠主動脈環(huán)及Mitrigel Plug管樣結(jié)構(gòu)形成;7.MiR-31作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞后,缺氧誘導(dǎo)因子-1的抑制因子(FIH1)水平下降,實驗證明FIH1是miR-31的靶基因。結(jié)論:1.脂肪干細胞能分泌微泡,這種微泡能夠促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞的遷移及管樣結(jié)構(gòu)形成。內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪干細胞能增加微泡的分泌,促進微泡的血管再生能力。2.RNA分析結(jié)果顯示脂肪干細胞分泌的微泡富含microRNA,而且內(nèi)皮分化培養(yǎng)液預(yù)處理脂肪源性干細胞能顯著上調(diào)微泡中miR-31的水平。進一步研究顯示微泡中的miR-31能促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞的遷移及管樣結(jié)構(gòu)形成,而且還能促進小鼠主動脈環(huán)及Matrigel Plug的血管再生。3.FIH1有抗血管再生的作用,更進一步地,本研究發(fā)現(xiàn)它是miR-31的靶基因。結(jié)果表明miR-31可能在脂肪干細胞微泡小RNA促血管再生作用中發(fā)揮一定的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R45

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本文編號：2281790