【摘要】：目的建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型,采用中藥復(fù)方“益氣化瘀方”進(jìn)行干預(yù)。從功能學(xué)角度觀察益氣化瘀方對模型大鼠妊娠功能的影響,從組織病理學(xué)和分子生物學(xué)角度觀察益氣化瘀方對模型大鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響及對異位內(nèi)膜生長的影響。探討益氣化瘀方治療子宮內(nèi)膜異位癥同時改善子宮內(nèi)膜容受性,提高妊娠功能的作用機(jī)制,為進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法通過手術(shù)切除大鼠右側(cè)子宮,剪取內(nèi)膜組織塊移植到腸系膜建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為益氣化瘀方組、孕三烯酮組、模型組,另設(shè)假手術(shù)組。各組給藥方法如下:益氣化瘀方組予益氣化瘀方混懸液(相當(dāng)于生藥3.55g/ml),按4ml/(Kg·d)連續(xù)灌胃6周;孕三烯酮組予孕三烯酮混懸液(0.1mg/ml),按4ml/(Kg·d)連續(xù)灌胃4周后以等體積滅菌蒸餾水連續(xù)灌胃2周;模型組及假手術(shù)組均予滅菌蒸餾水,按4ml/(Kg·d)連續(xù)灌胃6周。實(shí)驗(yàn)研究分為三個部分。第一部分實(shí)驗(yàn)觀察益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能的影響。在藥物干預(yù)結(jié)束后于動情期將雌雄大鼠以2:1比例合籠,以發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道脫落細(xì)胞涂片發(fā)現(xiàn)精子當(dāng)日記為妊娠第1天,于雌鼠妊娠第16天采集標(biāo)本。統(tǒng)計(jì)各組妊娠雌鼠數(shù)、妊娠雌鼠單側(cè)子宮著床數(shù),電子天平稱量各胚胎及胎盤重量,平行切片法計(jì)數(shù)左側(cè)卵巢妊娠黃體數(shù),計(jì)算大鼠妊娠率、著床率。第二部分實(shí)驗(yàn)探討益氣化瘀方改善子宮內(nèi)膜容受性,促進(jìn)胚胎著床的作用機(jī)制。在藥物干預(yù)結(jié)束后于動情期將雌雄大鼠以2:1比例合籠,于雌鼠妊娠第4天采集標(biāo)本。ELISA法檢測大鼠血清雌二醇(E2)與孕酮(P)水平,免疫組化SP法和蛋白質(zhì)免疫印跡法分別檢測大鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、白血病抑制因子(lif)、整合素αυβ3(αυβ3)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp-9)的表達(dá)。第三部分實(shí)驗(yàn)探討益氣化瘀方抑制異位內(nèi)膜生長的作用機(jī)制。用游標(biāo)卡尺測量大鼠干預(yù)前、后異位囊腫直徑,免疫組化sp法檢測大鼠異位內(nèi)膜er、pr、αυβ3、mmp-9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1(timp-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(casepase-9)表達(dá)。免疫組化切片放大400倍,采用image-proplus6.0軟件進(jìn)行圖像分析,測量特異蛋白表達(dá)陽性區(qū)域的累計(jì)光密度(iod)值及區(qū)域面積(area),以平均光密度(iod/area)代表蛋白表達(dá)強(qiáng)度,結(jié)果記錄為平均光密度值。westernblot采用bio-radxrs+成像儀采集圖像,測定目標(biāo)條帶灰度值,選擇β-actin為蛋白內(nèi)參,結(jié)果記錄為目標(biāo)條帶灰度值/β-actin條帶灰度值。應(yīng)用spss19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(`x±s)表示。計(jì)量資料經(jīng)參數(shù)檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析或秩和檢驗(yàn),兩兩組間比較采用lsd或kruskal-wallis檢驗(yàn),組內(nèi)差異采用配對樣本t檢驗(yàn)或wilcoxonsigned-rank檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或fisher精確檢驗(yàn)。設(shè)定檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,p0.05即為差異有顯著性意義。結(jié)果1.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能的影響模型組排卵數(shù)、著床數(shù)、著床率、胚胎重量及胎盤重量均低于假手術(shù)組,益氣化瘀方組排卵數(shù)、著床數(shù)、著床率、胚胎重量及胎盤重量均高于模型組和孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05);而孕三烯酮組排卵數(shù)、著床數(shù)、著床率、胚胎重量及胎盤重量與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。2.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠圍著床期血清e2、p水平的影響益氣化瘀方組e2水平高于模型組和孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05);而孕三烯酮組e2水平與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。模型組p水平低于假手術(shù)組,益氣化瘀方組p水平高于模型組和孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05);但孕三烯酮組p水平與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。3.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響模型組圍著床期子宮內(nèi)膜er表達(dá)高于假手術(shù)組,益氣化瘀方組和孕三烯酮組er表達(dá)均低于模型組,益氣化瘀方組er表達(dá)高于孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05)。模型組圍著床期子宮內(nèi)膜pr表達(dá)高于假手術(shù)組,益氣化瘀方組和孕三烯酮組pr表達(dá)均低于模型組,益氣化瘀方組pr表達(dá)低于孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05)。模型組圍著床期子宮內(nèi)膜lif、αυβ3、mmp-9表達(dá)均低于假手術(shù)組,益氣化瘀方組lif、αυβ3、mmp-9表達(dá)均高于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);但孕三烯酮組lif、αυβ3、mmp-9表達(dá)與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。4.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠異位內(nèi)膜的影響益氣化瘀方組和孕三烯酮組干預(yù)后異位囊腫直徑均較干預(yù)前減小,差異有顯著性意義(p0.05);模型組干預(yù)前后異位囊腫直徑比較差異無顯著性意義(p0.05)。益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜er、pr表達(dá)均低于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);而益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜er、pr表達(dá)差異均無顯著性意義(p0.05)。益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜αυβ3、mmp-9表達(dá)均低于模型組,而timp-1表達(dá)均高于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);但益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜αυβ3、mmp-9、timp-1表達(dá)均差異無顯著性意義(p0.05)。益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜casepase-9表達(dá)均高于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);但益氣化瘀方組和孕三烯酮組casepase-9表達(dá)差異無顯著性意義(p0.05)。結(jié)論1.子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能偏低,益氣化瘀方能有效提高其排卵數(shù)和著床率,并能促進(jìn)胚胎發(fā)育。2.益氣化瘀方能有效提升子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠圍著床期P水平,降調(diào)子宮內(nèi)膜上PR表達(dá),并能上調(diào)子宮內(nèi)膜中LIF、αυβ3、MMP-9的表達(dá),提示其可通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性,促進(jìn)胚胎著床而改善子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能。3.益氣化瘀方能有效抑制異位內(nèi)膜生長,其機(jī)制可能與降低異位內(nèi)膜ER、PR、αυβ3、MMP-9表達(dá),提升TIMP-1表達(dá)而抑制異位內(nèi)膜侵襲以及上調(diào)Casepase-9表達(dá)促進(jìn)異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 林素英;益氣化瘀法治盆腔子宮內(nèi)膜異位癥臨床研究[J];江西中醫(yī)藥;1999年04期
2 屈玉倩;益氣化瘀法為主治療老年病[J];陜西中醫(yī);2003年02期
3 范朝陽;益氣化瘀劑治療激素性股骨頭壞死的病理學(xué)研究[J];浙江中醫(yī)雜志;2004年02期
4 楊慶坤;;益氣化瘀方治療慢性乙型肝炎肝纖維化50例臨床觀察[J];山西中醫(yī);2006年05期
5 安輝;繆燦銘;李雪山;;益氣化瘀方對60例冠狀動脈介入治療后再狹窄的預(yù)防作用[J];中醫(yī)研究;2009年06期
6 蔣玉清;;益氣化瘀方劑治療慢性肺源性心臟病臨床觀察[J];四川醫(yī)學(xué);2010年06期
7 崔慶霞;;益氣化瘀方治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變50例[J];中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育;2011年04期
8 鄭永鈿;;益氣化瘀方治療糖尿病足療效觀察[J];中外醫(yī)療;2013年22期
9 張競;益氣化瘀排膿法治療急性闌尾周圍膿腫[J];青海醫(yī)藥雜志;1997年10期
10 宓志達(dá),李軍,諸寶康,董勇;益氣化瘀方治療急性硬腦膜外血腫46例[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;1998年01期
相關(guān)會議論文 前10條
1 馮霞;;益氣化瘀法在抗衰老上的應(yīng)用體會(摘要)[A];第三次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2002年
2 趙芰珍;;益氣化瘀法的臨床應(yīng)用[A];中國中醫(yī)藥學(xué)會中醫(yī)美容分會成立大會論文集[C];1997年
3 李建偉;劉學(xué)偉;陳紹斐;王剛;;益氣化瘀法中西醫(yī)結(jié)合治療皮膚黑病變的臨床分析[A];2014全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2014年
4 魏躍清;;滋陰清熱益氣化瘀法防治糖尿病的體會[A];第四屆全國糖尿病（消渴�。⿲W(xué)術(shù)研討會論文集[C];1997年
5 闕華發(fā);唐漢鈞;王云飛;張臻;向寰宇;劉曉鶇;徐杰男;邢捷;沈亮;單瑋;;益氣化瘀為主綜合方案治療糖尿病性足潰瘍的臨床研究[A];2009全國中西醫(yī)結(jié)合周圍血管疾病學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2009年
6 周重建;舒冰;段曉X;賈寬;王擁軍;施杞;;纖維連接蛋白在大鼠L5神經(jīng)根損傷后的表達(dá)及益氣化瘀方促進(jìn)神經(jīng)再生的機(jī)理研究[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會頸椎病專業(yè)委員會第十次學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年
7 舒冰;王擁軍;施杞;李晨光;盧盛;周重建;;益氣化瘀方對大鼠腰神經(jīng)根損傷后BDNF表達(dá)的影響[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會頸椎病專業(yè)委員會第十次學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年
8 王晶;董芳芳;李曉鋒;舒冰;施杞;王擁軍;周重建;;益氣化瘀方減輕HIF-1α條件性基因敲除小鼠椎間盤退變的研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2012年
9 王擁軍;孫鵬;周泉;劉梅;胡志俊;周重建;施杞;;益氣化瘀中藥對大鼠椎間盤軟骨細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會整脊分會成立大會文集[C];2004年
10 張燁;尤昭玲;;益氣化瘀法及其組方對PIH患者胎盤組織HIF-1α表達(dá)的影響[A];全國第八次中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年
相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條
1 周穎;益氣化瘀中藥防治椎間盤退變細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制闡明[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2008年
2 施杞 王擁軍;益氣化瘀法延緩頸椎間盤退變研究[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年
3 張洪軍;搓揉腳心益處多[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年
4 山東中醫(yī)藥大學(xué) 單康娜;活血化瘀治中風(fēng)[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2008年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條
1 桂玉然;益氣化瘀方改善子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠內(nèi)膜容受性的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2017年
2 王朝陽;益氣化瘀通絡(luò)法對心肌梗死大鼠血管新生影響的研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2008年
3 曾晶;益氣化瘀方對藥物流產(chǎn)及產(chǎn)后炎癥模型大鼠子宮復(fù)舊不全干預(yù)作用實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2011年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 陳沙沙;益氣化瘀藥對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞PDGF-BB的表達(dá)相關(guān)性分析[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年
2 李靖;益氣化瘀方治療功能失調(diào)性子宮出血的藥效作用及其機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年
3 趙永旺;益氣化瘀清熱方及其拆方對IgA腎病大鼠生化、腎組織病理及其表達(dá)Nephrin、Podocin蛋白的影響[D];河南中醫(yī)藥大學(xué);2016年
4 馬迎紅;益氣化瘀方預(yù)防子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2013年
5 楊萬勝;益氣化瘀膠囊對缺血性卒中(腦梗死)二級預(yù)防的臨床研究[D];華北煤炭醫(yī)學(xué)院;2009年
6 劉海青;益氣化瘀膠囊治療穩(wěn)定型心絞痛的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年
7 付靈梅;益氣化瘀法對置CU-IUD家兔子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)及相關(guān)因素影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南中醫(yī)學(xué)院;2001年
8 劉志輝;益氣化瘀法對EMT家兔異位內(nèi)膜形態(tài)學(xué)及相關(guān)指標(biāo)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南中醫(yī)學(xué)院;2001年
9 趙玉琴;益氣化瘀膠囊治療不穩(wěn)定型心絞痛及其對hs-CRP影響的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2013年
10 高洪雷;益氣化瘀膠囊治療室性期前收縮的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2014年
，
本文編號：
2267571
