本文選題：中藥注射劑 + 丹紅注射液��； 參考：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：中藥注射劑是幾千年來中藥劑型的創(chuàng)新,在治療急危重癥方面具有特色和優(yōu)勢。為全面提高中藥注射劑的安全性、有效性和質(zhì)量可控性,國家食品藥品監(jiān)督管理總局組織開展了多項(xiàng)中藥注射劑安全性和有效性再評價(jià)工作。丹紅注射液由丹參和紅花兩味中藥組成,主要功效為活血化瘀、通脈舒絡(luò),臨床廣泛用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、腦血栓等疾病。丹紅注射液是中藥注射劑大品種,具有良好的臨床安全性和有效性,但是丹紅注射液臨床聯(lián)合用藥情況較為復(fù)雜,復(fù)雜的聯(lián)合用藥伴隨著未知的藥物相互作用,未知的藥物相互作用會產(chǎn)生未知的效益或者風(fēng)險(xiǎn),給丹紅注射液的臨床安全有效用藥帶來挑戰(zhàn)。本論文在國家科技重大專項(xiàng)課題"符合中藥特點(diǎn)的安全用藥風(fēng)險(xiǎn)評控關(guān)鍵技術(shù)"與步長制藥集團(tuán)重大科研項(xiàng)目"丹紅注射液臨床聯(lián)合用藥不良反應(yīng)及其配伍禁忌研究"的支持下,基于丹紅注射液與阿司匹林臨床高頻次聯(lián)用的臨床應(yīng)用實(shí)際,選擇丹紅注射液與阿司匹林作為代表性聯(lián)合用藥組合,從藥動學(xué)相互作用和藥效學(xué)相互作用等不同角度,系統(tǒng)評價(jià)丹紅注射液與阿司匹林藥物相互作用的作用特征及作用機(jī)制,綜合分析丹紅注射液與阿司匹林藥物相互作用的效益與風(fēng)險(xiǎn),為丹紅注射液與阿司匹林臨床聯(lián)合用藥提供科研基礎(chǔ),為后期構(gòu)建丹紅注射液安全風(fēng)險(xiǎn)調(diào)控體系提供數(shù)據(jù)支撐,為中藥注射劑藥物相互作用評價(jià)及安全風(fēng)險(xiǎn)早期控制提供示范性研究。一、文獻(xiàn)研究本章系統(tǒng)歸納了活血化瘀類中藥注射劑的臨床常用聯(lián)合用藥類型及規(guī)律,并基于臨床數(shù)據(jù)和藥物組成多角度分析了丹紅注射液的臨床聯(lián)合用藥規(guī)律,發(fā)現(xiàn)丹紅注射液與阿司匹林是臨床聯(lián)合用藥頻率最高的藥物組合,為設(shè)計(jì)藥物相互作用方案,建立藥物相互作用評價(jià)體系,發(fā)現(xiàn)藥物相互作用特征提供基礎(chǔ)。二、基于藥動學(xué)的丹紅注射液與阿司匹林相互作用特征與機(jī)制與研究藥動學(xué)相互作用是藥物安全性評價(jià)的重要部分,其中藥物代謝和藥物排泄過程是藥動學(xué)相互作用的研究重點(diǎn)。本章基于藥物代謝和藥物排泄過程,建立丹紅注射液與阿司匹林藥動學(xué)相互作用評價(jià)體系,研究丹紅注射液與阿司匹林藥動學(xué)相互作用特征及作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),丹紅注射液能顯著增加阿司匹林體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物水楊酸的血藥濃度,但是阿司匹林對丹紅注射液中主要酚酸類成分的體內(nèi)代謝過程無顯著影響。丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥過程中水楊酸血藥濃度增加與丹紅注射液抑制腎臟有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OAT的基因表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)功能,減少水楊酸腎小管分泌,導(dǎo)致水楊酸尿液排泄減少有關(guān),與阿司匹林酯酶活性介導(dǎo)的阿司匹林代謝過程以及尿液pH介導(dǎo)的水楊酸腎小管重吸收過程無關(guān)。此外,血液循環(huán)中增加的水楊酸會通過轉(zhuǎn)化為其他代謝產(chǎn)物(龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸葡萄糖醛酸苷)進(jìn)行代償性排泄。(一)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥對藥物動力學(xué)過程的影響1.單次聯(lián)合用藥對藥物動力學(xué)過程的影響為了評價(jià)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥對藥物動力學(xué)過程的影響,建立了能同時(shí)測定血漿樣品中水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素含量的UHPLC-MS/MS方法。結(jié)果顯示,單次聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸血藥濃度顯著增加(阿司匹林單用 Cmax=39.57μg/ml;聯(lián)合用藥 Cmax=50.33μg/ml;P0.05);對丹紅注射液中主要酚酸類成分的體內(nèi)代謝動力學(xué)過程無顯著影響。2.多次聯(lián)合用藥對藥物動力學(xué)過程的影響采用建立的能同時(shí)測定血漿樣品中水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素含量的UHPLC-MS/MS方法,進(jìn)一步評價(jià)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥14天對藥物動力學(xué)的影響。結(jié)果顯示,多次聯(lián)合用藥對藥物動力學(xué)過程的影響與單次聯(lián)合用藥相同,表現(xiàn)為多次聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸血藥濃度顯著增加(阿司匹林單用 Cmax=16.33μg/ml;聯(lián)合用藥Cmax=38.79μg/ml;P0.01);對丹紅注射液中主要酚酸類成分的體內(nèi)代謝動力學(xué)過程無顯著影響。3.基于水楊酸血藥濃度增加的丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥效益/風(fēng)險(xiǎn)分析丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸血藥濃度顯著增加,血液循環(huán)中增加的水楊酸會濃度依賴性地拮抗阿司匹林的抗血小板作用(風(fēng)險(xiǎn)信號)。同時(shí),水楊酸血藥濃度增加將導(dǎo)致水楊酸發(fā)生一般不良反應(yīng)、心臟不良反應(yīng)或肝臟不良反應(yīng)的概率增加(風(fēng)險(xiǎn)信號)。此外,水楊酸通過抑制NF-κB活化發(fā)揮抗炎作用,聯(lián)合用藥過程中水楊酸血藥濃度增加,可能會導(dǎo)致水楊酸對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥疾病的治療作用增強(qiáng)(效益信號)。綜上所述,在丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥過程中必須根據(jù)患者的實(shí)際情況,進(jìn)行系統(tǒng)全面的效益/風(fēng)險(xiǎn)評價(jià),權(quán)衡利弊判斷聯(lián)合用藥效益是否超過了聯(lián)合用藥風(fēng)險(xiǎn),實(shí)現(xiàn)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥的效益最大化。(二)基于藥物代謝的丹紅注射液與阿司匹林相互作用研究1.聯(lián)合用藥對阿司匹林酯酶體內(nèi)活性的影響為了分析丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥增加水楊酸血藥濃度的可能途徑"聯(lián)合用藥導(dǎo)致阿司匹林水解為水楊酸的速率加快,水楊酸血藥濃度增加",建立了評價(jià)阿司匹林酯酶活性的反應(yīng)體系和分析方法。結(jié)果顯示,丹紅注射液單次用藥或者多次用藥后均會顯著抑制阿司匹林酯酶活性(P0.05)。丹紅注射液單次用藥時(shí)對阿司匹林酯酶活性的抑制作用與丹紅注射液的血藥濃度相關(guān),丹紅注射液的血藥濃度越高,對阿司匹林酯酶活性的抑制程度越大。2.聯(lián)合用藥對阿司匹林酯酶體外活性的影響為了進(jìn)一步驗(yàn)證丹紅注射液對阿司匹林酯酶活性的抑制作用,建立了體外評價(jià)阿司匹林酯酶活性的方法。結(jié)果顯示,丹紅注射液濃度依賴性地抑制阿司匹林酯酶活性(P0.05),其中丹紅注射液對肝微粒體阿司匹林酯酶的抑制作用要強(qiáng)于對血漿阿司匹林酯酶。3.基于阿司匹林酯酶活性的丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥效益/風(fēng)險(xiǎn)分析丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥顯著抑制阿司匹林酯酶活性,提示阿司匹林酯酶不是聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸血藥濃度增加的作用位點(diǎn)。此外,丹紅注射液抑制阿司匹林酯酶活性,將導(dǎo)致阿司匹林水解為水楊酸的速率減慢,阿司匹林的抗血小板作用增強(qiáng)(效益信號)。(三)基于藥物排泄的丹紅注射液與阿司匹林相互作用研究1.聯(lián)合用藥對阿司匹林主要代謝產(chǎn)物水楊酸尿液排泄的影響為了分析丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥增加水楊酸血藥濃度的可能途徑"聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸尿液排泄減少,水楊酸血藥濃度增加",建立了測定尿液樣品中水楊酸含量的UHPLC-MS/MS方法。結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥會導(dǎo)致水楊酸的尿液排泄量顯著減少(P0.05),特別是對水楊酸排泄高峰期(阿司匹林給藥后0-5 h)的影響最大,水楊酸的尿液排泄量從阿司匹林單用時(shí)的2.43 ±0.49 mg下降到了 1.35±0.20mg(P0.001)。結(jié)果提示,丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥過程中水楊酸尿液排泄量減少可能是聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸血藥濃度增加的作用途徑之一。2.聯(lián)合用藥對水楊酸腎小管重吸收的影響為了分析丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥減少水楊酸尿液排泄的可能途徑"聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸腎小管重吸收增加,水楊酸尿液排泄減少",測定了聯(lián)合用藥對大鼠尿液pH值的影響,并計(jì)算了不同pH值尿液樣品中分子型水楊酸的分布系數(shù)。結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥導(dǎo)致尿液pH值下降0.08,但是這下降的0.08不足以干擾水楊酸的腎小管重吸收。結(jié)果提示,水楊酸腎小管重吸收可能不是聯(lián)合用藥減少水楊酸尿液排泄的作用途徑。3.聯(lián)合用藥對轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的水楊酸腎小管分泌的影響為了分析丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥減少水楊酸尿液排泄的可能途徑"聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸腎小管分泌減少,水楊酸尿液排泄減少",進(jìn)一步評價(jià)了聯(lián)合用藥對腎小管轉(zhuǎn)運(yùn)基因表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。采用Real-Time qPCR方法評價(jià)聯(lián)合用藥對腎臟攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體(OAT1、OAT2、OAT3)和排出轉(zhuǎn)運(yùn)體(MCT1、MDR1、MRP4)基因表達(dá)的影響,采用穩(wěn)定表達(dá)人源OAT1/OAT3的轉(zhuǎn)基因HEK293細(xì)胞系評價(jià)丹紅注射液對攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體(OAT1和OAT3)轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥顯著降低腎臟中攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體OAT1的基因表達(dá)(P0.05),對腎臟中其他攝取轉(zhuǎn)運(yùn)體(OAT2和OAT3)以及排出轉(zhuǎn)運(yùn)體(MCT1、MRP4和MDR1)的基因表達(dá)無顯著影響。丹紅注射液可濃度依賴性地抑制OAT1和OAT3的轉(zhuǎn)運(yùn)功能(P0.05),其中丹紅注射液對OAT3的抑制作用要強(qiáng)于對OAT1的作用。結(jié)果提示,丹紅注射液通過抑制腎臟轉(zhuǎn)運(yùn)體OAT的基因表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)功能,降低腎小管從血液循環(huán)中攝取水楊酸的速率,減少水楊酸的腎小管分泌,最終導(dǎo)致水楊酸尿液排泄減少,血藥濃度增加。4.聯(lián)合用藥對阿司匹林其他代謝產(chǎn)物尿液排泄的影響為了分析聯(lián)合用藥導(dǎo)致水楊酸血藥濃度增加后機(jī)體清除阿司匹林的途徑,建立了能同時(shí)測定尿液樣品中龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸葡萄糖醛酸苷含量的UHPLC-MS/M方法,評價(jià)聯(lián)合用藥對阿司匹林其他代謝產(chǎn)物尿液排泄的影響。結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥導(dǎo)致龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸葡萄糖醛酸苷的尿液排泄總量從66.92 ±16.44μmol增加到了 86.65±5.76μmol。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,血液循環(huán)中增加的水楊酸通過轉(zhuǎn)化為其他代謝產(chǎn)物(龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸葡萄糖醛酸苷)進(jìn)行代償性排泄。三、基于藥效學(xué)的丹紅注射液與阿司匹林相互作用特征與機(jī)制研究藥效學(xué)相互作用是藥動學(xué)相互作用的最終結(jié)果,對藥物的治療作用和副作用均會產(chǎn)生影響。本章以阿司匹林胃腸道不良反應(yīng)和抗血小板治療作用為切入點(diǎn),建立丹紅注射液與阿司匹林藥效學(xué)相互作用評價(jià)體系,評價(jià)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥的藥效學(xué)相互作用特征及機(jī)制,為評價(jià)丹紅注射液與其他藥物的藥物相互作用提供示范性研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),聯(lián)合用藥增強(qiáng)抗血小板作用,同時(shí)減輕阿司匹林引起的胃黏膜損傷。聯(lián)合用藥增強(qiáng)抗血小板作用的具體機(jī)制為降低阿司匹林酯酶活性,同時(shí)增強(qiáng)對環(huán)加氧酶COX-1的抑制作用。聯(lián)合用藥減輕阿司匹林引起的胃黏膜損傷的作用機(jī)制為聯(lián)合用藥促進(jìn)胃黏液分泌,降低胃蛋白酶活性,維持胃黏膜屏障結(jié)構(gòu)的完整性;同時(shí)修復(fù)機(jī)體抗氧化能力,降低活性氧簇水平,破壞活性氧簇水平升高與胃黏膜血流量降低之間的惡性循環(huán)。(一)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥對阿司匹林胃黏膜損傷的影響1.聯(lián)合用藥對阿司匹林胃黏膜損傷的保護(hù)作用研究為了明確丹紅注射液與阿司匹林藥效學(xué)相互作用的靶器官,采用組織學(xué)分析方法系統(tǒng)評價(jià)聯(lián)合用藥對胃、肺、心、肝和腎組織的影響。結(jié)果顯示,丹紅注射液與阿司匹林藥效學(xué)相互作用的靶器官是胃組織,對肺、心、肝和腎等器官的影響不顯著。阿司匹林連續(xù)用藥14天可導(dǎo)致腺胃出現(xiàn)多處淤血和糜爛,當(dāng)?shù)ぜt注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥后,腺胃的淤血和糜爛點(diǎn)顯著減少,胃黏膜損傷評分顯著下降55.8%。調(diào)整丹紅注射液與阿司匹林的給藥順序和時(shí)間間隔,或者在阿司匹林長期用藥過程中加入丹紅注射液的短期治療,均不會影響丹紅注射液對阿司匹林胃黏膜損傷的保護(hù)作用。2.聯(lián)合用藥保護(hù)阿司匹林胃黏膜損傷的作用機(jī)制研究為了分析聯(lián)合用藥保護(hù)阿司匹林胃黏膜損傷的作用機(jī)制,采用PAS染色方法評價(jià)聯(lián)合用藥對胃黏液分泌的影響,采用流式細(xì)胞術(shù)評價(jià)聯(lián)合用藥對機(jī)體活性氧簇水平(ROS)的影響,并通過測定聯(lián)合用藥對腺胃和胃液中胃蛋白酶活力,對腺胃和血漿中抗氧化酶活力(CAT、GSH-Px、SOD、MDA)的影響,綜合分析聯(lián)合用藥保護(hù)阿司匹林胃黏膜損傷的作用機(jī)制。結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥能促進(jìn)胃黏液分泌,降低胃蛋白酶活性,維持胃黏膜屏障結(jié)構(gòu)的完整性;同時(shí)修復(fù)機(jī)體抗氧化能力,降低活性氧簇水平,破壞活性氧簇與胃黏膜血流量之間的惡性循環(huán),最終形成對阿司匹林胃黏膜損傷的保護(hù)作用。3.聯(lián)合用藥對COX酶活性的影響基于COX-1和COX-2酶在阿司匹林胃黏膜損傷中的關(guān)鍵作用,我們假設(shè)丹紅注射液可能是通過拮抗阿司匹林對胃黏膜COX-1和COX-2酶活性的抑制作用發(fā)揮保護(hù)作用的。但是,結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥后對COX-1和COX-2酶活性的抑制作用分別增加了 62.7%(阿司匹林單用38.6%;聯(lián)合用藥62.8%)和34.2%(阿司匹林單用28.9%;聯(lián)合用藥38.8%)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,聯(lián)合用藥增強(qiáng)對COX-1和COX-2酶活性的抑制作用,COX酶可能不是聯(lián)合用藥保護(hù)阿司匹林胃黏膜損傷的作用位點(diǎn)。此外,丹紅注射液可顯著抑制COX-1酶活性(抑制率為61.4%),提示抑制COX-1酶活性可能是丹紅注射液發(fā)揮活血化瘀的作用機(jī)制之一,與阿司匹林聯(lián)合用藥將增強(qiáng)抗血小板作用(效益信號)。(二)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥對抗血小板作用的影響1.聯(lián)合用藥對抗血小板作用的影響增強(qiáng)抗血小板作用是丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥的出發(fā)點(diǎn)和落腳點(diǎn),通過測定血漿TXB2和6 keto-PGF1α水平綜合評價(jià)聯(lián)合用藥對抗血小板作用的影響。結(jié)果顯示,丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥會顯著降低血漿TXB2水平降,與丹紅注射液單用相比下降29.5%(P0.001),與阿司匹林單用相比下降30.4%(P0.001)。但是,無論是丹紅注射液或者阿司匹林單獨(dú)用藥,還是丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥,均對血漿6keto-PGF1α水平無顯著影響。結(jié)果提示,丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥能顯著增強(qiáng)抗血小板作用。2.聯(lián)合用藥增強(qiáng)抗血小板作用的機(jī)制分析丹紅注射液對阿司匹林酯酶以及COX-1酶活性的抑制作用是聯(lián)合用藥增強(qiáng)抗血小板作用的作用機(jī)制。上一章研究也發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥導(dǎo)致的水楊酸血藥濃度增加會拮抗阿司匹林的抗血小板作用,但是藥物相互作用對抗血小板作用的影響最終是以效益作用為主,表現(xiàn)為聯(lián)合用藥增強(qiáng)抗血小板作用。(三)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥對內(nèi)源性代謝產(chǎn)物及代謝通路的影響1.聯(lián)合用藥對內(nèi)源性代謝產(chǎn)物及代謝通路的影響為了確定能表征丹紅注射液與阿司匹林藥物相互作用的生物標(biāo)記物和代謝通路,采用代謝組學(xué)和多變量數(shù)據(jù)分析方法綜合評價(jià)聯(lián)合用藥對內(nèi)源性代謝產(chǎn)物及代謝通路的影響。最終我們確定了能有效表征丹紅注射液與阿司匹林藥物相互作用的三類生物標(biāo)記物(聯(lián)合用藥后消失的標(biāo)記物、聯(lián)合用藥后增加的標(biāo)記物、聯(lián)合用藥后減少的標(biāo)記物)和三條代謝通路(核黃素代謝、戊糖-葡萄糖轉(zhuǎn)化代謝、色氨酸代謝)。2.聯(lián)合用藥對內(nèi)源性尿毒素硫酸吲哚酚尿液排泄的影響代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥會導(dǎo)致內(nèi)源性代謝產(chǎn)物硫酸吲哚酚的尿液排泄顯著減少(P0.05),可能機(jī)制是聯(lián)合用藥抑制OAT的基因表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)功能(藥動學(xué)相互作用),導(dǎo)致OAT介導(dǎo)的的硫酸吲哚酚腎小管分泌減少。硫酸吲哚酚是引起腎臟損傷的關(guān)鍵性尿毒素,如果丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥,則可能會減少硫酸吲哚酚在腎臟的蓄積,減輕硫酸吲哚酚對腎臟的損傷(效益信號)。四、丹紅注射液與稀釋溶媒相互作用特征及穩(wěn)定性評價(jià)中藥注射劑與稀釋溶媒的相互作用是廣義上的相互作用,是指藥物與稀釋溶媒配伍時(shí)發(fā)生物理-化學(xué)反應(yīng)對藥物的安全性和有效性產(chǎn)生的影響。丹紅注射液使用說明書規(guī)定配伍的稀釋溶媒是5%葡萄糖注射液和0.9%氯化鈉注射液,但實(shí)際用藥過程中,與丹紅注射液配伍使用的稀釋溶媒要比說明書規(guī)定復(fù)雜得多,而目前為止還沒有研究丹紅注射液與稀釋溶媒配伍穩(wěn)定性的系統(tǒng)報(bào)道。本章選擇臨床上常與丹紅注射液配伍的六種稀釋溶媒,采用化學(xué)分析和生物效應(yīng)評價(jià)方法,綜合評價(jià)丹紅注射液與稀釋溶媒的配伍穩(wěn)定性�；谥笜�(biāo)性化學(xué)成分和整體化學(xué)成分的穩(wěn)定性評價(jià)結(jié)果顯示,與丹紅注射液配伍最穩(wěn)定的稀釋溶媒是5%葡萄糖注射液,配伍穩(wěn)定性最差的是5%木糖醇注射液和6%右旋糖酐40-5%葡萄糖注射液�；谏镄�(yīng)的穩(wěn)定性評價(jià)結(jié)果顯示,丹紅注射液與5%葡萄糖注射液最為穩(wěn)定。綜合分析結(jié)果提示,5%葡萄糖注射液是丹紅注射液的最佳稀釋溶媒。丹紅注射液與不同稀釋溶媒配伍應(yīng)該盡快使用,因?yàn)橹笜?biāo)性成分、整體成分和抗氧化活性均會隨著配伍時(shí)間的延長而不斷降低。(一)基于化學(xué)成分的丹紅注射液與稀釋溶媒配伍穩(wěn)定性評價(jià)1.基于指標(biāo)性化學(xué)成分的丹紅注射液與稀釋溶媒配伍穩(wěn)定性評價(jià)為了評價(jià)丹紅注射液與稀釋溶媒配伍對丹紅注射液中指標(biāo)性化學(xué)成分含量的影響,建立了能同時(shí)測定丹紅注射液中丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹參素、原兒茶醛、咖啡酸和紫丁香苷含量的UHPLC-TQ/MS分析方法。結(jié)果顯示,丹紅注射液與5%葡萄糖注射液(GS)配伍最為穩(wěn)定,與5%木糖醇注射液(XI)和6%右旋糖酐40-5%葡萄糖注射液(DGI)的配伍穩(wěn)定性最差。2.基于整體化學(xué)成分的丹紅注射液與稀釋溶媒配伍穩(wěn)定性評價(jià)為了評價(jià)丹紅注射液與稀釋溶媒配伍對丹紅注射液中整體化學(xué)成分含量的影響,建立了能反映丹紅注射液中所有化學(xué)成分(分子量80-1000Da)相對含量變化的UHPLC-QTOF/MS分析方法和偏移距離計(jì)算方法。結(jié)果顯示,丹紅注射液與5%葡萄糖-0.9%氯化鈉注射液(GNS)配伍最為穩(wěn)定,與5%木糖醇注射液(XI)和6%右旋糖酐40-5%葡萄糖注射液(DGI)的配伍穩(wěn)定性最差。(二)基于生物效應(yīng)的丹紅注射液與稀釋溶媒配伍穩(wěn)定性評價(jià)為了評價(jià)丹紅注射液與稀釋溶媒配伍對丹紅注射液生物效應(yīng)的影響,建立了HUVEC氧化性損傷模型和Vc當(dāng)量抗氧化能力(VCEAC)分析方法。結(jié)果顯示,丹紅注射液與5%葡萄糖注射液(GS)配伍最為穩(wěn)定,與5%木糖醇注射液(XI)和5%葡萄糖-0.9%氯化鈉注射液(GNS)的配伍穩(wěn)定性最差。五、丹紅注射液對糖尿病心肌病保護(hù)作用及作用機(jī)制研究基于丹紅注射液治療糖尿病心肌病的臨床實(shí)際,本章建立了糖尿病心肌病小鼠模型和高糖高脂誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷模型,發(fā)現(xiàn)HBP異常、UPR異常以及脂質(zhì)代謝異常與糖尿病心肌病密切相關(guān),明確了丹紅注射液對糖尿病心肌病的保護(hù)作用,以及XBP1在丹紅注射液保護(hù)糖尿病心肌病過程中的關(guān)鍵作用。(一)丹紅注射液對糖尿病心肌病的保護(hù)作用1.丹紅注射液對糖尿病心肌病小鼠心臟功能障礙的保護(hù)作用建立糖尿病心肌病小鼠模型,采用心臟超聲技術(shù)評價(jià)丹紅注射液對糖尿病心肌病小鼠心臟功能障礙的保護(hù)作用。結(jié)果顯示,丹紅注射液對健康小鼠的心臟功能無顯著影響,但是可以顯著改善糖尿病心肌病小鼠的心臟收縮功能障礙(FS%增加20.5%;P0.05),對舒張功能障礙有改善的趨勢,但不具有顯著性差異(MV E/A降低12%)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,丹紅注射液對糖尿病心肌病小鼠的心臟收縮功能障礙具有顯著的保護(hù)作用。。2.丹紅注射液對高糖高脂誘導(dǎo)的乳鼠心室肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用為了進(jìn)一步評價(jià)丹紅注射液對糖尿病心肌病的保護(hù)作用,我們體外模擬糖尿病狀態(tài)下心肌細(xì)胞所處的高糖高脂環(huán)境,通過葡萄糖和棕櫚酸鈉誘導(dǎo)乳鼠心室肌細(xì)胞損傷模型,評價(jià)丹紅注射液對心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。結(jié)果顯示,丹紅注射液對高糖條件下低濃度(62.5 μM)和高濃度(250 μM)棕櫚酸鈉引起的NRVM細(xì)胞損傷均具有顯著的保護(hù)作用。丹紅注射液導(dǎo)致低濃度棕櫚酸鈉引起的細(xì)胞死亡率下降了 44.5%(P0.001),對高濃度棕櫚酸鈉引起的細(xì)胞損傷降低保護(hù)作用較弱,細(xì)胞死亡率僅降低了 12.0%(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,丹紅注射液對高糖高脂誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞死亡具有顯著的保護(hù)作用。(二)丹紅注射液對糖尿病心肌病的保護(hù)作用機(jī)制研究為了分析丹紅注射液對糖尿病心肌病的保護(hù)作用機(jī)制,首先采用分子方法研究了 HBP異常、UPR異常以及脂質(zhì)代謝異常與糖尿病心肌的關(guān)聯(lián)系。結(jié)果顯示,糖尿病心肌病會導(dǎo)致心臟GNPNAT1蛋白表達(dá)和基因表達(dá)顯著抑制(HBP異常),ATF6、GRP94、GRP44、ATF4、CHOP、ERO1、XBP1、ERDJ4 和 IRE1 基因表達(dá)顯著抑制以及GRP78和GRP94蛋白表達(dá)顯著抑制(UPR異常),此外,糖尿病心肌病小鼠的左心室會出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)堆積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,HBP異常、UPR異常以及脂質(zhì)代謝異常與糖尿病心肌病密切相關(guān)。為了評價(jià)XBP1在丹紅注射液保護(hù)糖尿病心肌病過程中的作用,采用XBP1基因敲除小鼠誘導(dǎo)糖尿病心肌病,評價(jià)丹紅注射液的保護(hù)作用。結(jié)果顯示,丹紅注射液能顯著改善野生型糖尿病心肌病小鼠的心臟收縮功能障礙,如果將XBP1基因敲除,丹紅注射液對心臟收縮功能的保護(hù)作用將被顯著削弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,XBP1可能參與了丹紅注射液對糖尿病心肌病的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2072305