發(fā)布時間：2018-06-03 04:41

  本文選題：腫瘤相關巨噬細胞 + 卵巢癌��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2017年博士論文

【摘要】：研究背景及目的巨噬細胞根據(jù)其功能與表達細胞因子的不同,可以分為兩個極化方向:能夠殺死病原體與腫瘤的M1,以及促進腫瘤細胞的生長、遷移甚至侵襲能力的M2。后者在免疫組化或流式細胞檢測中常用CD68+CD206或CD68+CD163進行M2細胞的特異標記以進行識別與分選。此外,M2細胞還可以細分為若干亞群,這些亞群之間在細胞因子及細胞表面分子的表達上均有所差異。近來多個實驗證實,腫瘤組織的微環(huán)境內(nèi)有大量巨噬細胞,我們稱之為腫瘤相關巨噬細胞(TAM),TAM在細胞表型上可能與M2更為相似;此外,腫瘤細胞也可以誘導巨噬細胞向M2方向極化,IL-6、LIF、IFN-γ等細胞因子可能在這一誘導過程中起了重要作用。另一方面,關于腫瘤細胞異質性的研究一直是腫瘤學的重點,除了腫瘤細胞本身的異質性,腫瘤相關巨噬細胞是否也具有異質性即是本實驗所討論的重點。通過不同類型的卵巢癌細胞系與單一來源的巨噬細胞進行相互作用,以期找到其中的差異性及其背后的原因。研究方法1.利用聚酯透明膜transwell使卵巢癌細胞與巨噬細胞系進行非接觸性共培養(yǎng),誘導巨噬細胞極化;2.利用流式細胞術對誘導后的巨噬細胞進行分群分析,計算CD68+CD206雙陽性細胞(即M2細胞)占全部CD68陽性細胞(即巨噬細胞)的比例,比較不同誘導條件下M2細胞極化比例的差異,及其隨時間的變化;3.收集經(jīng)不同條件誘導極化的巨噬細胞的上清,利用ELISA對細胞上清中的細胞因子濃度進行測定與分析;4.將經(jīng)過不同誘導條件極化的巨噬細胞與A2780反向共培養(yǎng)一定時間后,測定不同組A2780生長速率的變化以及細胞因子表達上的差異;研究結果1.不同卵巢癌誘導巨噬細胞向M2極化的能力不一樣,且群體中M2比例隨時間變化的規(guī)律也不同。2.不同卵巢癌細胞誘導出的M2細胞分泌的細胞因子、對腫瘤細胞的生長促進作用也具有異質性,即不同腫瘤細胞誘導出的M2細胞本身也具備異質性。3.反向誘導72h后,平均IL-10濃度與相應腫瘤細胞生長速率呈現(xiàn)顯著正相關關系,提示IL-10可能通過巨噬細胞-卵巢癌的相互關系影響卵巢癌的增殖與發(fā)展。4.永生化卵巢上皮細胞在誘導巨噬細胞向M2極化方面表現(xiàn)出了與卵巢癌相似的特性,若比較永生化卵巢上皮細胞基因結構與正常卵巢上皮細胞之間的差異,或許可提示巨噬細胞極化過程中有重要作用的基因。結論卵巢癌細胞在誘導巨噬細胞向M2極化方面具有異質性,此種差異不僅存在于透明細胞癌與腺癌這樣不同組織類型的卵巢癌之間,也存在于同樣是腺癌但是來源不同的腫瘤之間;卵巢癌誘導出的M2在細胞因子的表達、對腫瘤細胞生長的促進作用方面均具有異質性,這種異質性本身即是腫瘤異質性的體現(xiàn)。
[Abstract]:Background and objective macrophages can be divided into two polarized directions according to their function and expression of cytokines: M1, which can kill pathogens and tumors, and M2, which can promote the growth, migration and even invasion of tumor cells. The latter used CD68 CD206 or CD68 CD163 as specific markers to identify and select M2 cells in immunohistochemistry or flow cytometry. In addition, M 2 cells can be subdivided into several subsets, which have different expression of cytokines and molecules on cell surface. A number of recent experiments have confirmed that there are a large number of macrophages in the microenvironment of tumor tissues, which we call tumor-associated macrophages Tam Tam TAM may be more similar to M2 in cell phenotype; in addition, Tumor cells can also induce macrophages to polarize to M2 direction. Cytokines such as IL-6, LIFN- 緯 and IFN- 緯 may play an important role in this induction. On the other hand, the study of tumor cell heterogeneity has always been the focus of oncology. Besides the heterogeneity of tumor cells, whether tumor related macrophages have heterogeneity is the focus of this study. Different types of ovarian cancer cell lines interact with macrophages from a single source in order to find out the differences and the underlying causes. Method 1. The ovarian cancer cell line and macrophage cell line were co-cultured by polyester hyaline membrane (transwell), and the macrophage polarization was induced. The percentage of CD68 CD206 double positive cells (M2 cells) in all CD68 positive cells (i.e. macrophages) was calculated by flow cytometry, and the polarization ratio of M2 cells under different induction conditions was compared. And its change with time. The supernatants of macrophages induced by different conditions were collected and the concentration of cytokines in the supernatants was determined and analyzed by ELISA. After the macrophages with different induced conditions were co-cultured with A2780 for a certain time, the growth rate of A2780 and the difference of cytokine expression in different groups were measured. The ability of different ovarian cancer to induce macrophage polarization to M2 is different, and the rule of M2 ratio changing with time is also different. The cytokines secreted by M2 cells induced by different ovarian cancer cells have heterogeneity in promoting the growth of tumor cells, that is, M2 cells induced by different tumor cells have heterogeneity. 3. After 72 hours of reverse induction, the average concentration of IL-10 was positively correlated with the growth rate of tumor cells, suggesting that IL-10 may influence the proliferation and development of ovarian cancer through the interaction of macrophages and ovarian cancer. Immortalized ovarian epithelial cells showed similar characteristics to ovarian cancer in inducing macrophage polarization to M2. The difference between gene structure of immortalized ovarian epithelial cells and normal ovarian epithelial cells was compared. It may suggest that macrophages play an important role in the process of polarization of genes. Conclusion Ovarian cancer cells have heterogeneity in inducing macrophage polarization to M2. This difference exists not only between ovarian carcinoma with clear cell carcinoma and adenocarcinoma, but also with ovarian carcinoma. The expression of M2 induced by ovarian cancer has heterogeneity in promoting the growth of tumor cells, and this heterogeneity is the manifestation of heterogeneity of tumor.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

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本文編號：1971503