發(fā)布時(shí)間：2018-04-18 14:47

  本文選題：動(dòng)物模型 + 腦出血　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：腦室出血(intraventricular hemorrhage,IVH)是指腦室系統(tǒng)周圍或腦室內(nèi)出血,常繼發(fā)于物理性腦創(chuàng)傷、高血壓腦出血和動(dòng)脈瘤破裂蛛網(wǎng)膜下腔出血等疾病。IVH是腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)患者的最常見同時(shí)也是最嚴(yán)重并發(fā)癥之一,與ICH患者高死亡率和高致殘率密切相關(guān),嚴(yán)重危害著公眾健康。既往研究報(bào)道,約40%的成人自發(fā)性ICH患者會(huì)合并IVH的出現(xiàn),這部分病人罹患腦積水的幾率高達(dá)51%-89%。新近臨床研究已經(jīng)證實(shí),IVH及其誘發(fā)的繼發(fā)性腦積水是導(dǎo)致ICH患者預(yù)后的兩項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素,因此,如何緩解IVH后腦積水已經(jīng)逐漸成為ICH救治的重要干預(yù)靶點(diǎn)。然而,既往IVH動(dòng)物模型僅僅展示出了原發(fā)性IVH的特點(diǎn),而臨床IVH絕大多數(shù)為繼發(fā)性,尤其是繼發(fā)于腦出血破入腦室形成腦室積血。一些回顧性臨床分析提示,繼發(fā)性IVH出現(xiàn)遠(yuǎn)期分流依賴的腦積水的幾率要明顯高于原發(fā)性IVH,但這一臨床現(xiàn)象尚未得到證實(shí)�；诖�,課題組在國際上首次建立了繼發(fā)性IVH(腦出血破入腦室)大鼠模型,并對模型的可靠性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性進(jìn)行了評價(jià);此外,我們還比較了繼發(fā)性IVH大鼠模型和原發(fā)性IVH大鼠模型腦損傷和腦積水發(fā)生情況,進(jìn)一步驗(yàn)證上述臨床現(xiàn)象。越來越多的研究證據(jù)指出血液的分解代謝產(chǎn)物-鐵離子可能是導(dǎo)致出血后腦積水和腦損傷的關(guān)鍵因素。據(jù)此我們推測:ICH破入腦室會(huì)引起腦-腦脊液屏障結(jié)構(gòu)完整性破壞,腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的血腫可能成為持續(xù)的鐵離子來源,通過屏障缺口不斷的浸入到腦室系統(tǒng),造成腦實(shí)質(zhì)和腦脊液鐵離子蓄積,最終加重腦積水和腦損傷。他汀類藥物,即3-羥基-3-甲基戊二酸輔酶A(3-Hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A,HMG-Co A)還原酶抑制劑,是廣泛使用的降脂藥物,臨床上主要用于心腦血管疾病的一級和二級預(yù)防。大量研究報(bào)道,他汀類藥物除了具有較好的降低膽固醇的功效,還發(fā)揮了保護(hù)BBB、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和促血管再生等多種中樞神經(jīng)保護(hù)多效性。近年來,幾項(xiàng)大型回顧性隊(duì)列研究結(jié)果顯示:他汀類藥物的使用能夠有效地減少ICH患者死亡率,改善遠(yuǎn)期預(yù)后,可能具有良好的臨床應(yīng)用前景。然而,國際上尚無權(quán)威的隨機(jī)、對照臨床試驗(yàn)驗(yàn)證上述功效,尤其是在ICH合并IVH的患者中。辛伐他汀作為一種發(fā)酵來源的天然他汀類藥物,具有高度的親脂性和血腦屏障透過性。新近研究提示辛伐他汀可能有促進(jìn)血腫吸收的功效。但相關(guān)的機(jī)制不清,辛伐他汀對繼發(fā)性IVH的潛在治療效果有待進(jìn)一步的觀察。因此,基于上述發(fā)現(xiàn),我們推測:辛伐他汀有望通過加速腦內(nèi)血腫清除緩解繼發(fā)性IVH后腦損傷。綜上,本研究主要從以下三部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行展開:首先,建立并評估繼發(fā)性IVH大鼠模型的穩(wěn)定性、可靠性和可重復(fù)性。其次,將原發(fā)性IVH大鼠模型與繼發(fā)性IVH大鼠模型進(jìn)行比較,觀察繼發(fā)性IVH是否會(huì)出現(xiàn)更為嚴(yán)重的腦損傷和腦積水,以驗(yàn)證上述臨床觀點(diǎn);同時(shí)進(jìn)一步探討腦內(nèi)血腫在繼發(fā)性IVH后腦積水發(fā)生發(fā)展中的作用。最后,驗(yàn)證早期系統(tǒng)性辛伐他汀治療能否加速腦內(nèi)血腫清除緩解繼發(fā)性IVH后腦積水,改善神經(jīng)功能障礙。一、大鼠繼發(fā)性腦室出血新模型的建立和評估目的自發(fā)性腦出血合并腦室出血是一種嚴(yán)重的臨床疾病,但缺乏相應(yīng)的研究。到目前為止,尚無滿意、有效的動(dòng)物模型能夠模擬腦出血合并腦室出血的臨床特點(diǎn)。鑒于此,本實(shí)驗(yàn)擬建立實(shí)驗(yàn)性腦出血合并腦室出血大鼠模型,同時(shí)對出血后腦積水以及血腫周圍組織損傷進(jìn)行檢測以評估模型的穩(wěn)定性和可靠性。方法在課題組前期建立的IVH大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ突A(chǔ)上,通過調(diào)整血液注射坐標(biāo),利用立體定位儀將200μl自體血緩慢注入大鼠右側(cè)紋狀體區(qū)(坐標(biāo)為:前囟后0.2mm,旁開2.2mm,深5.0mm)。24h后,采用組織形態(tài)學(xué)等方法檢測血腫及血腫周圍組織損傷。損傷后第4周,利用小動(dòng)物MRI觀察腦室擴(kuò)張情況、腦組織丟失情況、海馬體積大小以及大腦皮層厚度;通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評價(jià)大鼠神經(jīng)認(rèn)知功能。結(jié)果1.自體血紋狀體注射后,大鼠形成了穩(wěn)定可重復(fù)的腦內(nèi)血腫和腦室擴(kuò)張,較好的模擬了ICH合并破入腦室患者的臨床特點(diǎn);2.模型大鼠在表現(xiàn)出了急性期的腦水腫、BBB破壞和典型的血腫周圍腦組織損傷的病理特征;3.術(shù)后第4周時(shí),T2WI掃描觀察到了顯著的腦積水和腦組織丟失,Morris水迷宮測試揭示了大鼠出現(xiàn)了嚴(yán)重的學(xué)習(xí)、記憶功能障礙。結(jié)論該模型成功地再現(xiàn)了ICH合并IVH患者的臨床病理生理特點(diǎn),可用于對出血后慢性腦積水及血腫周圍腦組織損傷發(fā)生的病理生理機(jī)制的進(jìn)一步探索。二、大鼠繼發(fā)性與原發(fā)性腦室出血模型腦損傷比較及機(jī)制研究目的有研究報(bào)道稱,腦出血合并腦室出血的患者發(fā)生腦積水的幾率較高,會(huì)進(jìn)一步加重腦出血患者的不良預(yù)后。但是,介導(dǎo)上述臨床現(xiàn)象的對應(yīng)機(jī)制仍然沒有得到合理的解答。鑒于此,本實(shí)驗(yàn)擬通過在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討繼發(fā)性腦室出血后腦積水發(fā)生發(fā)展機(jī)理,初步闡明上述臨床現(xiàn)象的潛在機(jī)制。方法本部分實(shí)驗(yàn)首先通過自體血注射法建立了腦出血合并腦室出血大鼠模型和原發(fā)性腦室出血大鼠模型兩種實(shí)驗(yàn)性腦室出血?jiǎng)游锬Ｐ�。然�?分別采用了小動(dòng)物磁共振掃描成像、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、腦含水量檢測、伊文思藍(lán)滲出檢測、免疫組化染色、免疫蛋白印跡、鐵離子定量檢測和電鏡等技術(shù)和手段對兩組模型大鼠進(jìn)行了評價(jià)和比較。最后,通過給予去鐵敏(一種鐵螯合劑)治療初步闡明鐵離子在繼發(fā)性腦室出血后腦積水發(fā)生中的作用。結(jié)果1.盡管兩組腦室出血模型接受了同等劑量的腦組織血液注射,與原發(fā)性腦室出血組相比,繼發(fā)性腦室出血大鼠出現(xiàn)了更為嚴(yán)重的腦室擴(kuò)張、室管膜纖毛損傷和鐵超載,以及更加異常的急性腦損傷和神經(jīng)功能障礙;2.系統(tǒng)性去鐵敏治療更加顯著、有效地緩解了繼發(fā)性腦室出血組大鼠所并發(fā)的腦積水。結(jié)論我們的研究結(jié)果提示,繼發(fā)性的腦室出血比原發(fā)性的腦室出血損傷更嚴(yán)重,主要表現(xiàn)為更加典型的慢性腦積水和腦鐵超載。腦內(nèi)血腫可能通過加劇鐵離子持續(xù)性的蓄積影響了繼發(fā)性腦室出血后慢性腦積水的進(jìn)展。三、辛伐他汀對大鼠繼發(fā)性腦室出血后腦損傷的干預(yù)效應(yīng)和機(jī)制研究目的我們在第二部分研究中發(fā)現(xiàn)了,腦內(nèi)血腫通過加劇鐵超載誘發(fā)室管膜纖毛損害,進(jìn)而加重腦室出血腦積水。因此,我們推測:加速腦內(nèi)血腫自吸收可能成為治療腦室出血的研究新靶點(diǎn)。新近文獻(xiàn)提示,辛伐他汀可能具有加速血腫吸收的功效,因此,本實(shí)驗(yàn)擬觀察辛伐他汀對腦室出血大鼠的治療效果。方法采用自體血注射法建立腦出血合并腦室出血SD大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。模型�?dòng)物在術(shù)后第1d隨機(jī)接受辛伐他汀或溶劑治療,然后連續(xù)給藥1周。利用小動(dòng)物磁共振成像技術(shù)于術(shù)后1天、3天、7天、14天和28天動(dòng)態(tài)觀察并計(jì)算大鼠側(cè)腦室體積。期間,在術(shù)后1-7天和術(shù)后23-28天分別進(jìn)行大鼠運(yùn)動(dòng)功能和神經(jīng)認(rèn)知功能的評估。然后剝離腦組織樣本,先后進(jìn)行鐵沉積檢測、鐵相關(guān)蛋白檢測以及室管膜損傷檢測等。最后,在腦室出血接受連續(xù)3d的辛伐他汀治療后,采用免疫蛋白印跡和免疫熒光技術(shù)檢測清道夫受體CD36(能夠加速細(xì)胞吞噬)在腦組織中的表達(dá)與分布;同時(shí),采用熒光素標(biāo)記紅細(xì)胞腦內(nèi)注射模擬腦出血,分別給予生理鹽水、辛伐他汀、辛伐他汀+CD36中和抗體治療,3d后采用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察和分析小膠質(zhì)細(xì)胞對紅細(xì)胞的吞噬情況。結(jié)果1.辛伐他汀顯著升高了血腫吸收速度,減小了腦室體積,并有效緩解了腦室出血大鼠的神經(jīng)功能障礙;2.與對照組相比,辛伐他汀組大鼠腦鐵蓄積更輕、室管膜纖毛存活率更高;3.辛伐他汀治療后上調(diào)了血腫周圍小膠質(zhì)細(xì)胞CD36表達(dá),并促進(jìn)了小膠質(zhì)細(xì)胞對紅細(xì)胞的吞噬。結(jié)論辛伐他汀有效增強(qiáng)了腦室出血后腦內(nèi)血腫的吸收,緩解了腦積水,同時(shí)促進(jìn)了大鼠神經(jīng)功能修復(fù);其可能機(jī)制是通過上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞CD36加速紅細(xì)胞吞噬實(shí)現(xiàn)。上述的研究結(jié)果提示,住院早期服用辛伐他汀有望成為腦室出血患者治療的新方法。
[Abstract]:IVH is one of the most common and most serious complications in ICH patients . It is concluded that IVH and its induced secondary hydrocephalus are the key factors leading to the prognosis of ICH patients . This study suggests that simvastatin is expected to improve the stability , reliability and repeatability of the secondary IVH rat model by accelerating the removal of intracerebral hematoma . In this paper , we have studied the mechanism of cerebral hemorrhage after secondary ventricular hemorrhage in rats with cerebral hemorrhage complicated with cerebral hemorrhage . Conclusion The results suggest that simvastatin is expected to be a new method for the treatment of cerebral hemorrhage patients .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.34

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：1768815