本文選題：肺腺癌 + GGPPS��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和目的盡管近年來在肺癌的診斷方法及治療策略上取得了重大進(jìn)展,但是肺癌仍是全球范圍內(nèi)最主要的腫瘤相關(guān)的死亡原因。肺癌分為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC),其中NSCLC約占肺癌的80-85%。NSCLC進(jìn)一步分為三種主要類型:腺癌、鱗癌及大細(xì)胞癌,其中腺癌約占肺癌的40%,是最常見的肺癌類型。NSCLC患者在外科術(shù)后、分子靶向治療、化療和/或放療后常復(fù)發(fā)或發(fā)生轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致五年生存率仍低于18%。因此,闡明NSCLC進(jìn)展的分子機(jī)制、尋找新的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)是改善NSCLC預(yù)后的關(guān)鍵。香葉基香葉基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS)是甲羥戊酸代謝途徑中重要的分支酶,催化法尼基焦磷酸(Farnesyl pyro-phosphate,FPP)合成香葉基香葉基焦磷酸(Geranylgeranyl pyrophosphate,GGPP)。FPP及GGPP可以分別使羧基端含有CAAX基序的蛋白質(zhì)發(fā)生法尼基化及香葉基香葉基化。法尼基化及香葉基香葉基化是重要的蛋白質(zhì)異戊二烯化修飾,是一種重要的翻譯后修飾。發(fā)生異戊二烯化修飾的蛋白主要是小G蛋白超家族,這些蛋白只有發(fā)生異戊二烯化修飾后才能定位到細(xì)胞膜上,進(jìn)而促發(fā)下游信號通路的激活,廣泛地參與細(xì)胞的生理及病理功能。GGPPS表達(dá)異常會影響FPP、GGPP相對含量,進(jìn)而破壞蛋白質(zhì)法尼基化及香葉基香葉基化的平衡,進(jìn)而會參與調(diào)控許多疾病的發(fā)生,包括腫瘤、心血管疾病及代謝性疾病等。研究發(fā)現(xiàn)GGPPS在肝腫瘤中表達(dá)高,并與腫瘤分期、血管侵犯及早期復(fù)發(fā)相關(guān)。抑制GGPPS能夠減少乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。但是目前尚無關(guān)于GGPPS在肺癌中的相關(guān)研究。本課題首次研究GGPPS在肺腺癌中的表達(dá)情況,并分析其與臨床病理特征、生存預(yù)后之間的相關(guān)性;探討GGPPS對肺腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移侵襲等生物學(xué)功能的影響及其可能的機(jī)制。以期為肺腺癌的發(fā)病機(jī)制及治療靶點(diǎn)提供新的理論基礎(chǔ)。研究方法1.肺腺癌組織中GGPPS表達(dá)的檢測及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系首先在oncomine(www.oncomine.org)公共數(shù)據(jù)庫中檢測GGPPS在肺腺癌中的mRRNA表達(dá)情況;其次,檢測臨床肺腺癌組織及配對的正常組織,提取RNA及蛋白,運(yùn)用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-RCR)檢測 GGPPS 的 mRNA 水平,采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(Western blotting,WB)的方法檢測GGPPS蛋白表達(dá)情況。再次,在組織微陣列芯片(tissue microarrays,TMA)中應(yīng)用免疫組化(immunohistochemistry,IHC)的方法檢測GGPPS的表達(dá)。在TMA中,根據(jù)GGPPS的免疫組化評分,分析GGPPS表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期的關(guān)系,并分析GGPPS與肺腺癌預(yù)后的關(guān)系。2.GGPPS在肺腺癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能及初步機(jī)制探討采用MTT、平板克隆、Transwell及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測GGPPS異常表達(dá)對細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移侵襲等的影響。通過流式細(xì)胞儀檢測GGPPS異常表達(dá)對細(xì)胞凋亡的影響。并初步探討其分子機(jī)制。結(jié)果1.腺癌組織中GGPPS高表達(dá)及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系Oncomine數(shù)據(jù)庫,臨床切除的肺腺癌組織,組織微陣列芯片(TMA)中,GGPPS在肺腺癌組織中的表達(dá)均高于配對正常肺組織。GGPPS高表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān),GGPPS在腫瘤體積較大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性及晚期肺腺癌患者的組織中表達(dá)水平升高更明顯。GGPPS高表達(dá)與患者預(yù)后差有關(guān)。2.GGPPS在肺腺癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能及初步機(jī)制探討GGPPS異常表達(dá)通過調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transi-tion,EMT)影響肺腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲能力,對肺腺癌細(xì)胞增殖及凋亡無影響。結(jié)論我們的研究首次發(fā)現(xiàn)GGPPS在肺腺癌中高表達(dá),在腫瘤體積較大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性及晚期肺腺癌患者的組織中表達(dá)水平升高更明顯,高表達(dá)與預(yù)后差相關(guān)。GGPPS可能通過調(diào)控EMT影響肺腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲過程。GGPPS異常表達(dá)對肺腺癌細(xì)胞增殖及凋亡無影響。
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本文編號：1756393