本文選題：TIP30　切入點(diǎn)：抑癌基因　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和目的膀胱腫瘤(bladdercancer,BC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一,74%的膀胱腫瘤初診時(shí)都是淺表性膀胱腫瘤[1]。目前對(duì)于淺表性膀胱癌的治療主要包括手術(shù)加術(shù)后膀胱內(nèi)化療,但是大部分患者仍然出現(xiàn)復(fù)發(fā)及進(jìn)展,直至進(jìn)入腫瘤晚期,而對(duì)于晚期膀胱愛,目前缺乏有效的治療手段。因此尋找新的有用的膀胱腫瘤治療手段以提高治療效果具有非常重要的臨床意義。TIP30基因是一種抑癌基因[2]。文獻(xiàn)證實(shí)TIP30在多種惡性腫瘤中表達(dá)水平下降,如肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和肝細(xì)胞癌等[2-12]。上調(diào)TIP30可以抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤血管形成及轉(zhuǎn)移[3,4,13,14]。目前國(guó)內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn)TIP30蛋白在膀胱腫瘤中低表達(dá),但具體機(jī)制未有研究,且國(guó)內(nèi)外均無相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。因此探索TIP30在膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制,有望為膀胱腫瘤的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.用免疫組化檢測(cè)TIP30在膀胱腫瘤和正常膀胱黏膜中的表達(dá),分析TIP30表達(dá)強(qiáng)度與患者多項(xiàng)臨床病理參數(shù)的關(guān)系,分析TIP30的表達(dá)和無進(jìn)展生存期和總生存期的關(guān)系。2.構(gòu)建載體過表達(dá)T24細(xì)胞中TIP30基因,檢測(cè)過表達(dá)后腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞周期及膀胱腫瘤細(xì)胞遷移能力和侵襲能力。3.運(yùn)用WB檢測(cè)過表達(dá)TIP30后EGFR/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)蛋白表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,不同組間TIP30表達(dá)MOD值比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)和單因素方差分析(One-Way ANOVA),多個(gè)樣本均數(shù)兩兩比較采用Dunnett T3法。生存分析采用Kaplan-Meier法,差異性檢驗(yàn)采用log-rank法。采用多因素Cox回歸模型對(duì)影響患者預(yù)后的相關(guān)因素進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),和正常組織相比,TIP30在膀胱腫瘤組織中的表達(dá)明顯下降。低級(jí)別(G1)組膀胱腫瘤組織中TIP30表達(dá)較高級(jí)別(G2+G3)組明顯下降。非肌層浸潤(rùn)組TIP30的表達(dá)明顯高于肌層浸潤(rùn)組。2.進(jìn)展組患者TIP30的表達(dá)明顯低于非進(jìn)展組。TIP30高表達(dá)組的總生存時(shí)間明顯高于低表達(dá)組,但兩組患者的無瘤生存時(shí)間無明顯差異。3.TIP30過表達(dá)后T24細(xì)胞中TIP30mRNA及TIP30蛋白表達(dá)均明顯上升,進(jìn)而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1期阻滯、誘導(dǎo)凋亡。Transwell侵襲及遷移能力檢測(cè)提示過表達(dá)TIP30基因能夠抑制T24細(xì)胞的侵襲和遷移能力。4.TIP30過表達(dá)后抑制EGFR/AKT的表達(dá),促進(jìn)Bax和P21表達(dá)上調(diào)及抑制Bcl2,cyclinD1和cyclinE的表達(dá)抑制T24細(xì)胞增殖周期,通過激活caspase3引起T24細(xì)胞凋亡。通過下調(diào)MMP2,6,9表達(dá)抑制T24細(xì)胞轉(zhuǎn)移。結(jié)論TIP30可能參與了膀胱腫瘤發(fā)生、發(fā)展。TIP30作為抑癌基因,可作為膀胱腫瘤治療的一個(gè)靶基因。TIP30在T24細(xì)胞中可能通過EGFR/AKT信號(hào)通路發(fā)揮抑癌作用。
[Abstract]:Background and objective bladder cancer BCis one of the most common malignant tumors in the world.At present, the treatment of superficial bladder cancer mainly includes surgery and postoperative intravesical chemotherapy, but most of the patients still have recurrence and progress until the advanced stage of the tumor, but for the late bladder love, there is a lack of effective treatment.Therefore, it is very important to find a new and useful therapy for bladder cancer in order to improve the therapeutic effect. TIP30 gene is a tumor suppressor gene [2].The literature confirmed that the expression of TIP30 decreased in many malignant tumors, such as lung cancer, breast cancer, colon cancer and hepatocellular carcinoma [2-12].Upregulation of TIP30 can inhibit the growth of many kinds of tumor cells, promote the apoptosis of tumor cells, and inhibit the angiogenesis and metastasis of tumor cells.At present, low expression of TIP30 protein in bladder tumors has been found in China, but the specific mechanism has not been studied, and there is no related literature report at home and abroad.Therefore, to explore the role and mechanism of TIP30 in the occurrence and development of bladder tumors, it is expected to provide experimental evidence for gene therapy of bladder tumors.Method 1: 1.The expression of TIP30 in bladder tumor and normal bladder mucosa was detected by immunohistochemistry. The relationship between the expression of TIP30 and several clinicopathological parameters was analyzed, and the relationship between TIP30 expression and progressive survival and total survival was analyzed.The TIP30 gene was overexpressed in T24 cells. The growth ability, cell cycle, migration ability and invasion ability of bladder tumor cells were detected.WB was used to detect the expression of EGFR/AKT signal transduction pathway associated protein after overexpression of TIP30.The MOD of TIP30 expression in different groups was compared with that of two independent samples by t-test and one-way ANOVAN analysis of variance, and the Dunnett T3 method was used to compare the mean of multiple samples.Kaplan-Meier method was used for survival analysis and log-rank method was used for difference test.Multivariate Cox regression model was used to analyze the related factors affecting the prognosis of patients.The test level was 0.05%, and the difference was statistically significant.Result 1.Immunohistochemical results showed that the expression of TIP30 in bladder neoplasms was significantly lower than that in normal tissues.The expression of TIP30 in low grade G 1 group was significantly lower than that in high grade G 2 G 3 group.The expression of TIP30 in non-myometrial infiltrating group was significantly higher than that in myometrial infiltration group.The expression of TIP30 in the advanced group was significantly lower than that in the non-progressive group. The total survival time of the high expression group of TIP30 was significantly higher than that of the low expression group. However, there was no significant difference in the tumor-free survival time between the two groups. 3. After overexpression of TIP30, the expression of TIP30mRNA and TIP30 protein in T24 cells increased significantly.The results showed that overexpression of TIP30 gene could inhibit the invasion and migration of T24 cells. 4. Overexpression of TIP30 could inhibit the expression of EGFR/AKT.Promote the up-regulation of Bax and P21 expression and inhibit the expression of Bcl-2 cyclin D1 and cyclinE to inhibit the proliferation of T24 cells, and induce the apoptosis of T24 cells by activating caspase3.By down-regulating the expression of MMP2 + 6 + 9, the metastasis of T 24 cells was inhibited.Conclusion TIP30 may be involved in the development of bladder tumor. TIP30, as a tumor suppressor gene, can be used as a target gene for the treatment of bladder cancer. TIP30 may play an inhibitory role in T24 cells through EGFR/AKT signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.14

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本文編號(hào)：1700833