本文選題：穩(wěn)定同位素　切入點(diǎn)：鋅的吸收率　出處：《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心》2017年博士論文

【摘要】：目的利用穩(wěn)定同位素示蹤技術(shù),研究中國(guó)老年人膳食鋅的吸收率,為建議中國(guó)老年人鋅的膳食參考攝入量提供重要的科學(xué)依據(jù);同時(shí)通過建立動(dòng)物模型,觀察邊緣性鋅缺乏對(duì)大鼠肥胖的影響,為鋅營(yíng)養(yǎng)狀況與慢性病關(guān)系的研究提供依據(jù)。此外,利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)獲得初步評(píng)價(jià)個(gè)體鋅營(yíng)養(yǎng)狀況的特異表達(dá)蛋白,為發(fā)展新的檢測(cè)靶標(biāo)或方法奠定基礎(chǔ)。方法第一部分,選擇河北行唐60～70歲健康老年人24人進(jìn)行人體代謝試驗(yàn),共13天。所有受試者在第4天時(shí)每人早、中、晚餐各給予穩(wěn)定同位素示蹤鋅劑1mg,稀土元素鏑0.4mg,并分別于實(shí)驗(yàn)開始后的第4天、第11天的早餐前,口服2�？t膠囊,糞便首次紅染后開始收集,第二次服用卡紅后紅染時(shí)停止收集,收集樣品包括兩次紅染間的全部糞便。選擇任一個(gè)三天循環(huán)期按雙份飯法收集所有的膳食樣品,用勻漿器將膳食樣品勻漿化后留樣。干燥后的糞便樣品經(jīng)過微波消解,其總鋅含量以原子吸收法測(cè)定,糞便中鏑的濃度以ICP-MS測(cè)定,糞便樣品中鋅的同位素64Zn/67Zn豐度比以MC-ICP-MS測(cè)定,膳食中主要的營(yíng)養(yǎng)素及植酸含量以國(guó)標(biāo)法測(cè)定。計(jì)算鋅的表觀吸收率,根據(jù)鏑的回收率對(duì)其校正;計(jì)算鋅的推薦攝入量(RNI)。第二部分,成年雄性SD大鼠32只,隨機(jī)分為4組,低鋅組喂飼含6mg/kg鋅的邊緣性缺鋅飼料,中鋅組喂飼含1Omg/kg鋅的邊緣性缺鋅飼料,低鋅對(duì)飼組和對(duì)照組喂飼正常鋅含量的AIN-93M基礎(chǔ)飼料。喂養(yǎng)6周后,處死動(dòng)物,留取血清、心臟、肝臟、腎臟、睪丸、脂肪等組織。測(cè)量血鋅、血脂、血清瘦素含量,測(cè)定組織中總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。第三部分,雄性SD大鼠102只,體重120g,隨機(jī)分為3組,低鋅組喂飼含5mg/kg鋅的邊緣性缺鋅飼料,低鋅對(duì)飼組和對(duì)照組喂飼正常鋅含量的AIN-93G基礎(chǔ)飼料。連續(xù)喂養(yǎng)15周,處死動(dòng)物,留取血清,白細(xì)胞。測(cè)量血清鋅含量,根據(jù)血鋅含量,分別從第15周、第7周低鋅組中選擇3個(gè)血清樣品作為低鋅組和中鋅組的血清樣品,從第15周對(duì)照組中選擇3個(gè)血清樣品作為高鋅組的血清樣品;從第15周低鋅組和對(duì)照組中分別選擇3個(gè)分離的白細(xì)胞作為各組的白細(xì)胞樣品。血清樣品去除高豐度蛋白后,與白細(xì)胞樣品經(jīng)蛋白定量、酶切、iTRAQ試劑標(biāo)記后,經(jīng)LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定并利用生物信息學(xué)軟件分析獲得邊緣性鋅缺乏情況下大鼠血清和白細(xì)胞蛋白質(zhì)組的全組信息。結(jié)果1.膳食中鋅的平均攝入量為10.6±1.5mg/d,植酸與鋅的摩爾比為6.4。以同位素示蹤法計(jì)算得出老年人中男、女性受試者鋅表觀吸收率分別為26.65±6.81%和22.52±7.33%,老年人中男、女性受試者稀土元素鏑的回收率分別為86.96±4.98%和89.45±6.61%,用鏑的回收率對(duì)鋅的吸收率校正后結(jié)果分別為30.84±8.35%和25.55±9.14%。根據(jù)WHO判定鋅吸收率的標(biāo)準(zhǔn),老年男性膳食鋅為高度吸收,老年女性為中度吸收。以本實(shí)驗(yàn)獲得的鋅的吸收率計(jì)算得到老年男、女性RNI分別為 10.4 mg/d 和 9.2 mg/d。2.低鋅組大鼠第5周起血鋅含量明顯低于低鋅對(duì)飼組和對(duì)照組(P0.05),低鋅組大鼠出現(xiàn)缺鋅癥狀,且隨著時(shí)間延長(zhǎng)癥狀加重,成功建立邊緣性缺鋅模型。第6周時(shí),低鋅組大鼠脂體比明顯高于低鋅對(duì)飼組和對(duì)照組(P0.05),中鋅組大鼠脂體比明顯高于低鋅對(duì)飼組(P0.05);低鋅組大鼠肝臟、腎臟的T-AOC、SOD顯著下降(P0.05),MDA含量顯著升高(P0.05);中鋅組大鼠肝臟的T-AOC、SOD顯著下降(P0.05),MDA含量顯著升高(P0.05);中鋅組大鼠腎臟SOD顯著下降(P0.05),提示低鋅組和中鋅組大鼠體內(nèi)出現(xiàn)氧化應(yīng)激狀態(tài),但不同臟器氧化和抗氧化酶系統(tǒng)的變化特點(diǎn)不盡相同。3.低鋅組大鼠第1周開始血鋅含量開始下降,在實(shí)驗(yàn)期間低鋅組大鼠血鋅含量均明顯低于低鋅對(duì)飼組和對(duì)照組(P0.05),低鋅組大鼠出現(xiàn)缺鋅癥狀,且隨著時(shí)間延長(zhǎng)癥狀加重,成功建立邊緣性缺鋅模型。在本研究中,血清和白細(xì)胞樣品中分別發(fā)現(xiàn)205個(gè)和3816個(gè)蛋白,其中血清樣品有64種為差異蛋白、白細(xì)胞樣品有137種為差異蛋白,29種蛋白在低鋅組的血清中表達(dá)升高,16種蛋白在低鋅組的白細(xì)胞中表達(dá)升高;21種蛋白在低鋅組的血清中表達(dá)降低,121種蛋白在低鋅組的白細(xì)胞中表達(dá)降低;通路及網(wǎng)絡(luò)分析可知,血清樣品中的差異蛋白共參與9條代謝通路涉及5個(gè)代謝網(wǎng)絡(luò),白細(xì)胞樣品中的差異蛋白參與17條代謝通路涉及15個(gè)代謝網(wǎng)絡(luò)。結(jié)論1.在本研究中我們使用穩(wěn)定同位素技術(shù)首次得到中國(guó)老年人膳食鋅的吸收率,我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)中國(guó)老年人群膳食鋅的吸收率為27.86%,男性和女性分別為30.84%和25.55%,男性高于女性。目前使用的老年女性的膳食鋅推薦攝入量低于我們得到的結(jié)果,當(dāng)使用目前的RNI指導(dǎo)老年女性膳食鋅的攝入時(shí),老年女性可能存在鋅缺乏的風(fēng)險(xiǎn)。在未來的研究中需要更加注意老年女性的鋅營(yíng)養(yǎng)狀況和健康。2.邊緣性鋅缺乏可導(dǎo)致體脂異常,體重及血脂在本實(shí)驗(yàn)中有異常趨勢(shì),提示邊緣性缺鋅可能增加肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn);缺鋅組大鼠體內(nèi)已出現(xiàn)氧化應(yīng)激,但不同臟器氧化損傷特點(diǎn)不盡相同,肝臟氧化損傷最重,腎臟次之,心臟和睪丸的損傷較晚發(fā)生,大鼠體內(nèi)升高的氧化損傷可能是邊緣性鋅缺乏增加肥胖風(fēng)險(xiǎn)的主要原因;缺鋅大鼠體內(nèi)瘦素含量有降低趨勢(shì),瘦素降低可導(dǎo)致攝食增加、能量消耗減少,脂肪在體內(nèi)堆積,這可能是邊緣性鋅缺乏增加肥胖風(fēng)險(xiǎn)的另一個(gè)原因。由于本實(shí)驗(yàn)時(shí)間所限邊緣性鋅缺乏對(duì)肥胖的影響及其機(jī)制還有待更進(jìn)一步的研究;對(duì)邊緣性缺鋅人群補(bǔ)充鋅對(duì)防治肥胖可能具有重要的意義。3.本實(shí)驗(yàn)采用iTRAQ標(biāo)記技術(shù)研究邊緣性鋅缺乏情況下大鼠血清和白細(xì)胞的比較蛋白質(zhì)組學(xué),結(jié)合多維液相色譜分離及Q-Exactive質(zhì)譜檢測(cè),在蛋白質(zhì)組的整體范圍內(nèi)進(jìn)行高通量的蛋白質(zhì)鑒定,得到邊緣性鋅缺乏情況下大鼠血清和白細(xì)胞蛋白質(zhì)組的全組信息,在鑒定蛋白的同時(shí),對(duì)不同鋅營(yíng)養(yǎng)狀況下蛋白質(zhì)組進(jìn)行比較和相對(duì)定量分析,篩選出評(píng)價(jià)邊緣性鋅缺乏過程中的特異表達(dá)蛋白,建立相應(yīng)的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫,為發(fā)展新的檢測(cè)靶標(biāo)或方法奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R153.3

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本文編號(hào)：1683617