發(fā)布時(shí)間：2018-03-03 02:18

  本文選題：人免疫缺陷病毒　切入點(diǎn)：艾滋病　出處：《中國疾病預(yù)防控制中心》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：由人免疫缺陷病毒(HIV)感染導(dǎo)致的獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)已在全球范圍內(nèi)流行了超過30年,迄今尚未研制出安全有效的HIV疫苗。本課題組在前期的研究中,提出了使用多載體H1V疫苗進(jìn)行序貫和重復(fù)免疫的策略。動物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明,該策略能夠誘導(dǎo)持續(xù)時(shí)間較長、反應(yīng)強(qiáng)度較高的HIV特異性免疫應(yīng)答�；谶@一免疫策略,本研究中繼續(xù)開展了多載體HIV/SIV疫苗序貫和重復(fù)免疫的相關(guān)工作。我們首先在小鼠中進(jìn)行了表達(dá)SIVmac239-gag/env基因的三載體疫苗聯(lián)合免疫試驗(yàn),以評價(jià)疫苗免疫原性,為后續(xù)的恒河猴實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。其后,我們應(yīng)用前期構(gòu)建的四種載體 SIVmac239Gag 疫苗,包括 DNA 疫苗、rAd5-SIVgag、rMVA-SIVgag 和 rAd5F35-SIVgag在SIV感染恒河猴模型中對多載體疫苗預(yù)防或治療SIV感染的有效性進(jìn)行了評價(jià)。15只中國恒河猴被分為預(yù)防性免疫組、治療性免疫組和對照組,分別以上述四種載體疫苗免疫,并以500TCID50與疫苗同源的SIVmac239通過靜脈途徑進(jìn)行攻擊。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,通過四種載體序貫和重復(fù)免疫,能夠在部分受試動物中誘導(dǎo)強(qiáng)度較高、抗原表位識別范圍較廣以及維持有效應(yīng)答時(shí)間較長的SIV Gag特異性Elispot反應(yīng)。有效的免疫反應(yīng)強(qiáng)度與SIV感染后病毒載量變化呈負(fù)相關(guān)性,對被感染動物的免疫功能具有保護(hù)作用,具有改善疾病進(jìn)展和結(jié)局的能力。預(yù)防性免疫組中80%(4/5)的受試動物受疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生了有效的特異性免疫反應(yīng)。在受到SIV感染后,雖未能阻斷感染,但病毒載量峰值顯著低于對照組,提示疫苗對降低急性期病毒載量起到了保護(hù)作用。其中,40%(2/5)的受試動物病毒載量下降了2 log10copies/mL以上。治療性免疫組對疫苗的反應(yīng)顯示出較大的個體差異,40%(2/5)的受試動物受誘導(dǎo)產(chǎn)生了有效強(qiáng)度的免疫應(yīng)答,隨之病毒載量下降了約2 log10 copies/mL,下降水平優(yōu)于對照組,顯示多載體疫苗有能力修復(fù)或重建被SIV感染動物受損的免疫功能。在先前多載體HIV疫苗序貫免疫恒河猴研究工作的基礎(chǔ)上,我們分別使用Ad5載體疫苗和MVA載體疫苗,在恒河猴中進(jìn)行了多載體疫苗重復(fù)免疫策略的評價(jià)。結(jié)果顯示,受試動物接受rAd5-HIVgag疫苗重復(fù)免疫后,在疫苗的誘導(dǎo)作用下,高水平的HIV gag特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答被重新激活,并且高強(qiáng)度的特異性Elispot反應(yīng)分別持續(xù)了 52w和69w,免疫應(yīng)答的寬度亦得到了一定程度的增強(qiáng)。多載體HIV疫苗重復(fù)免疫的策略具有重新誘導(dǎo)并維持較長時(shí)間的高水平特異性免疫應(yīng)答的能力。Ad5-HIVgag是本課題組實(shí)施的多載體聯(lián)合免疫治療HIV感染者/AIDS病人臨床研究中繼DNA疫苗和rMVA疫苗后的第三個疫苗。在臨床研究實(shí)施之前,我們建立了基于HIV感染者PBMCs在體外對Ad5-HIVgag的免疫原性進(jìn)行評價(jià)的檢測方法。分別使用健康人和AIDS病人PBMCs對檢測模型中Ad5-HIVgag的使用劑量、刺激時(shí)間進(jìn)行了探索和優(yōu)化。根據(jù)優(yōu)化的檢測條件,我們采集了 24份HIV感染者的PBMCs,對Ad5-HIVgag的免疫原性進(jìn)行了評價(jià)。結(jié)果表明,Ad5-HIVgag能夠在體外有效的激活HIVgag特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答,并且,病人是否曾接受過藥物治療對Ad5-HIVgag的激活能力沒有影響。此外,由于我國近年來HIV-1優(yōu)勢流行株發(fā)生了顯著的變化,CRF_01 AE和CRF_07/08BC亞型逐漸成為了主要的流行毒株,我們構(gòu)建了表達(dá)HIV-1 AE/BC亞型gag基因的治療性DNA疫苗和重組MVA疫苗。以從HIV-1感染者中分離的病毒基因組為模板,分別對AE/BC亞型gag基因進(jìn)行表達(dá)優(yōu)化設(shè)計(jì)。使用經(jīng)優(yōu)化的AEgagi和BCgagi基因分別構(gòu)建了 DNA疫苗(pVR-HIVAEgagi/pVR-HIVBCgagi)和重組MVA 疫苗(rMVA-HIVAEgagi/rMVA-HIVBCgagi)。初步鑒定結(jié)果顯示,重組MVA能夠在允許細(xì)胞中攜帶外源基因進(jìn)行穩(wěn)定的傳代和復(fù)制;同時(shí),DNA疫苗和rMVA疫苗均能夠在細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)HIV-1 Gag抗原。我們將繼續(xù)對以上疫苗的免疫效果進(jìn)行評價(jià),并聯(lián)合同樣基于優(yōu)化AE/BC gagi基因構(gòu)建的重組Ad5疫苗開展多載體HIV疫苗序貫和重復(fù)免疫的相關(guān)研究。
[Abstract]:By the human immunodeficiency virus (HIV) infection causes acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) has been popular worldwide for more than 30 years, has yet to develop safe and effective HIV vaccines. This group in the previous study, proposed the use of multi carrier H1V vaccine and immune strategy of repeated sequential animal. The experiment results show that this strategy can induce longer duration, HIV specific immune response in high intensity. This immunization strategy based on this study, continue to carry out related work of multi carrier HIV/SIV vaccine and sequential repeated immunization. We first conducted three test vector vaccine combined with immune gene expression of SIVmac239-gag/env in mice to evaluate the immunogenicity of the vaccine, and provide the basis for the subsequent Ganges RIver monkeys. Subsequently, four kinds of SIVmac239Gag vaccine vector we constructed before application, including DNA vaccine, RAd5-SIVgag, rMVA-SIVgag and rAd5F35-SIVgag in SIV infected monkey model of Ganges RIver multi carrier vaccine for prevention or treatment of SIV infection effectiveness was evaluated.15 only China Ganges RIver monkey were divided into preventive immunization group, immunity treatment group and control group, respectively, the above four kinds of vector vaccine immunity, and are attacked by 500TCID50 and vaccine homologous SIVmac239 intravenously. The experimental results show that the four kinds of carrier sequential and repeated immunization, can induce high strength in some animal subjects, SIV Gag antigen specific Elispot response a wide range of recognition and maintain effective response time longer. There was a negative correlation between changes in viral load and immune response SIV infection effectively, has a protective effect on the immune function of infected animal, has the ability to improve disease progression and outcomes. Preventive immunization group (4/5) by 80% The vaccine induced specific immune response in animal test. Effective by SIV after infection, although failed to block the infection, but peak viral load was significantly lower than the control group, suggesting that the vaccine protection effect on reducing acute viral load. Among them, 40% (2/5) of the tested animal viral load decreased by more than 2 log10copies/mL. The treatment group of immune response to the vaccine showed large individual differences, 40% (2/5) was induced by the immune response of the effective strength of animal test, then viral load decreased by about 2 log10 copies/mL level than the control group, showing multi carrier vaccine have the ability to repair or reconstruction of the damaged immune function of animal SIV infection. Based on previous sequential vector HIV vaccine immunization in Ganges RIver monkey research work, we use Ad5 vector vaccine and MVA vaccine respectively, the carrier in Ganges RIver monkey disease Evaluation of seedling immunization strategies. The results showed that animal subjects underwent repeated immunization with rAd5-HIVgag vaccine after induction in vaccine, HIV gag specific cellular immune response level is reactivated, and the specificity of the Elispot high strength for 52w and 69w respectively, the width of the immune response also has been enhanced to a certain extent. The multi carrier HIV vaccine immunization strategy repeated with a high level of specific immune response to induce and maintain a longer period of time the ability of.Ad5-HIVgag to clinical researchers with /AIDS relay DNA vaccine and rMVA vaccine after the third vaccine vector combined with immunotherapy of HIV infection. The implementation of the research group before conducting clinical research, we established HIV method for detection of PBMCs infection in vitro immunogenicity of Ad5-HIVgag. Based on the evaluation of healthy individuals and patients with AIDS were used to test PBMCs The dose measurement model Ad5-HIVgag, stimulation time were explored and optimized. According to the optimization of detection conditions, we collected 24 HIV infected PBMCs, the immunogenicity of Ad5-HIVgag was evaluated. The results show that Ad5-HIVgag can activate HIVgag in cellular immune responses, specific and effective in vitro and patients have you had the ability to activate the drugs have no effect on Ad5-HIVgag. In addition, in recent years in China because of the advantages of HIV-1 strains has undergone significant changes, CRF_01 AE and CRF_07/08BC subtype has gradually become the main epidemic strains, we constructed the HIV-1 expression of AE/BC subtype gag gene therapeutic DNA vaccine and recombinant MVA vaccine to isolated from HIV-1 infected the virus genome as template, respectively for AE/BC subtype gag gene expression by AEgagi and optimization design. The optimization of the BCgagi gene were used. The DNA vaccine (pVR-HIVAEgagi/pVR-HIVBCgagi) and recombinant MVA vaccine (rMVA-HIVAEgagi/rMVA-HIVBCgagi). Preliminary identification results showed that recombinant MVA can allow cells carrying exogenous gene and replication were stable; at the same time, DNA vaccine and rMVA vaccine can be effective expression of HIV-1 antigen in Gag cells. We will continue on the above immune effect of vaccine for evaluation, and also combined with related research optimization construction of AE/BC gagi gene recombinant Ad5 vaccine to carry out multi carrier HIV vaccine based on sequential and repeated immunization.

【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

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本文編號：1559120