本文關鍵詞： 腹腔高壓癥 緊密連接 褪黑素 p38 MAPK　出處：《第三軍醫(yī)大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景與目的:正常人的腹腔內(nèi)壓力(Intra-Abdominal Pressure,IAP)為0-5mm Hg,當IAP達到或者超過12mm Hg時,定義為腹腔高壓癥(Intra-Abdominal Hypertension,IAH)。繼發(fā)性IAH是指由非起源于盆腹腔的病變所導致的IAP的升高,通常見于創(chuàng)傷、燒傷、膿毒癥、休克等需要大量補液的患者。繼發(fā)性IAH發(fā)生的病理生理過程主要表現(xiàn)為缺血再灌注損傷,在此過程中大量炎癥因子釋放、腸道通透性增高、液體滲漏、腸管缺血水腫并最終導致繼發(fā)性IAH。繼發(fā)性IAH病情危重,死亡率高。因此,如何在對患者實施復蘇時降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生是防治的重點。褪黑素(Melatonin,MT)是由松果體合成并分泌的一種激素,在體內(nèi)具有強大的抗氧化的作用,可通過清除自由基、增強抗氧化酶活性等作用來對抗氧化應激損傷。近年來,MT對炎癥反應的調(diào)控作用也受到人們的關注,且外源性MT被證實可通過抑制炎癥反應來發(fā)揮其臟器保護作用。因此,能否通過在復蘇時使用外源性MT來抑制炎癥反應、降低腸道的缺血再灌注損傷而減少腸道損害、降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生?本課題通過對SD大鼠實施失血性休克后過量液體復蘇來構(gòu)建繼發(fā)性IAH的大鼠模型,并在此模型的基礎上對比使用MT、7.5%高滲鹽溶液(Hypertonic Saline,HS)和羥乙基淀粉(Hydroxyethyl Starch,HES)聯(lián)合LR來實施復蘇的方案對繼發(fā)性IAH的治療、預防作用的優(yōu)劣,明確各類復蘇方案對腸屏障功能的保護效能。最后通過篩選分析信號通路研究,明確這些復蘇方案發(fā)揮保護作用所調(diào)控的信號通路的具體情況。主要實驗方法與實驗步驟:1.繼發(fā)性IAH大鼠模型的建立及其發(fā)生機制通過對SD大鼠制作門靜脈恒定縮窄、股動脈放血導致失血性休克、腹部放置束縛裝置后,再使用乳酸林格氏液(Lactated Ringer's Solution,LR)(30ml/h×6h)進行復蘇,能成功構(gòu)建SD大鼠的繼發(fā)性IAH模型,并通過酶聯(lián)免疫吸附實驗,高效液相色譜檢測,蛋白質(zhì)免疫印跡實驗,免疫熒光組織化學染色和電鏡等方法來論證在構(gòu)建繼發(fā)性IAH過程中腸道通透性及緊密連接蛋白的變化情況。2.不同復蘇方案對繼發(fā)性IAH復蘇效果的對比研究在先前構(gòu)建的繼發(fā)性IAH的大鼠模型的基礎上,通過在復蘇開始階段使用MT、HS、HES對實驗動物進行治療,然后再使用LR進行液體復蘇,我們通過酶聯(lián)免疫吸附實驗,高效液相色譜檢測,蛋白質(zhì)免疫印跡實驗,免疫熒光組織化學染色和電鏡等方法對比觀察這些方案在預防繼發(fā)性IAH中對腸道通透性、緊密連接的保護效果。3.MT對繼發(fā)性IAH腸道損害保護作用及其機制研究為進一步探明褪黑素保護效果的潛在機制,我們采用免疫印跡實驗來分別檢測信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子(Signal Transducers and Activators of Transcription,STAT)信號通路和核因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-кB)和絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinase,MAPK)信號通路,這三個信號通路的變化情況。同時,我們還通過在復蘇開始階段使用p38 MAPK的阻滯劑(SB203580)來觀察腸道損害的情況,明確MT是否通過影響p38 MAPK來發(fā)揮其對腸道的保護作用。主要研究結(jié)果:1.成功建立繼發(fā)性IAH的大鼠模型立通過對SD大鼠采用恒定的門靜脈縮窄,腹部使用束縛帶,失血性休克2h后實施LR復蘇6h,復蘇結(jié)束后的IVCP為(20.99±3.50)mm Hg,均達到繼發(fā)性IAH的診斷標準。同時在繼發(fā)性IAH的發(fā)生過程中,腸道炎癥反應、氧化損傷加劇,通透性增高,緊密連接被破壞,緊密連接蛋白表達下降。2.MT對繼發(fā)性IAH腸道損害的保護作用顯著通過通過對比使用MT+LR、HS+LR和HES+LR進行復蘇,我們發(fā)現(xiàn),這些方案與單獨應用LR相比均能夠降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生率,同時還能降低腸道通透性、保護腸道上皮細胞間的緊密連接、抑制炎癥反應和氧化損傷。而在這三類方案中,MT+LR的效果則更為顯著,在復蘇結(jié)束時無一動物達到繼發(fā)性IAH的診斷標準。3.MT發(fā)揮繼發(fā)性IAH腸道損害后的保護作用的機制研究本部分實驗通過檢測并對比MAPKs,STATs和NF-кB這三類信號通路,發(fā)現(xiàn)STAT-1、STAT-3信號通路,ERK1/2、JNK信號通路雖然有改變,但是不具有統(tǒng)計學意義。NF-кB p65和p38 MAPK信號通路的變化顯著,但是p38 MAPK信號通路的變化趨勢更加明顯,揭示了MT可能通過調(diào)控p38 MAPK信號通路來發(fā)揮其保護作用。通過應用p38 MAPK信號通路的阻滯劑SB203580進一步發(fā)現(xiàn),MT對繼發(fā)性IAH的保護效應可能依賴于抑制p38 MAPK信號通路來實現(xiàn)。結(jié)論:1.通過制作門靜脈恒定縮窄、腹部放置束縛裝置后,股動脈放血導致失血性休克(40mm Hg×2h),再使用LR進行復蘇,能成功構(gòu)建大鼠的繼發(fā)性IAH模型。同時還證實在繼發(fā)性IAH過程中,缺血再灌注損傷所誘發(fā)的炎癥反應和氧化應激并由此導致的腸屏障緊密連接的破壞、腸道通透性增高為基本的病理生理變化。2.與單獨應用LR復蘇相比,在復蘇階段使用MT+LR、HS+LR和HES+LR進行復蘇,可以抑制腸上皮細胞的炎癥反應,降低其氧化損傷,從而降低腸道通透性,減輕腸道水腫,降低繼發(fā)性IAH的發(fā)生,而其中MT的保護效果則更為顯著。3.褪黑素可能通過阻滯p38 MAPK信號通路來發(fā)揮對繼發(fā)性IAH過程中腸道損害的保護作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R459.7

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本文編號：1552776