本文關(guān)鍵詞：三棱丸方對克羅恩病腸纖維化的影響及機制研究　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 克羅恩病 腸纖維化 三棱丸 TGF-β1/Smads 過氧化物酶體增殖物激活受體-γ

【摘要】：目的使用克羅恩病腸纖維化大鼠模型觀察三棱丸方對大鼠腸纖維化的影響,觀察三棱丸在轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)所誘導(dǎo)的腸上皮細胞(IEC-6)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程中對纖維化相關(guān)因子及PPAR-γ表達的影響,并探討三棱丸方通過TGFβ1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑干預(yù)腸纖維化的EMT的機制。方法 體內(nèi)實驗部分:將48只SD大鼠隨機均分為空白組、模型組、羅格列酮對照組、三棱丸方高、中、低劑量治療組,組除空白組外,后五組采每周一次給予5%的三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulphonic acid TNBS),1Omg 于第 1 天,15mg 于第 8 天,20mg 于第 15 天,25mg于第22天,30mg于第29天,分別配成50%乙醇溶液0.8ml 一一次性灌腸,逐漸增量灌腸法誘導(dǎo)腸纖維化模型;從造模開始,大鼠同時每日分別以10.Og/kg,5.0g/kg,2.5g/kg不同濃度的三棱丸方水煎劑灌胃,羅格列酮組以8mg/kg濃度羅格列酮灌胃,每天一次;模型組、正常組給予等量生理鹽水灌胃。期間觀察各組大鼠的一般情況,35天后收集結(jié)腸組織,用于病理學(xué)評價,并檢測結(jié)腸組織中TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、FN、CTGF及PPARy水平。體外實驗部分:以TGF-β1誘導(dǎo)IEC-6細胞形成的EMT模型為研究對象,用Western blot法檢測高、中、低劑量的三棱丸方含藥血清及羅格列酮作用于1EC-6細胞后PPARγ、Smad2/3及pSmad3蛋白的表達,RT-PCR法檢測E-cadherin、α-SMA的mRNA的表達;免疫熒光法觀察三棱丸含藥血清及羅格列酮對PPARγ、pSmad3入核水平的影響,并檢測加入PPARγ拮抗劑GW9662后,上述相關(guān)指標(biāo)發(fā)生的變化。結(jié)果體內(nèi)實驗研究:與模型組比較,三棱丸方中、高劑量組的疾病活動指數(shù)(DAI)評分、結(jié)腸大體評分、組織學(xué)纖維化評分均明顯低于模型組(P0.05),Masson染色顯示三棱丸方高劑量組膠原纖維含量明顯低于模型組;E-cadherin、PPARγ含量均較模型組明顯增加(P0.05),TGF-[β1、FN、α-SMA水平均明顯降低(P0.05)。體外實驗研究:與10%正常大鼠血清組比較,三棱丸含藥血清組能夠抑制α-SMA,促進E-cadherin、PPARγ的mRNA的表達;提高E-cadherin、PPAR-γ,降低pSmad3、α-SMA的蛋白水平;免疫熒光結(jié)果顯示三棱丸含藥血清組促進PPARγ入核,抑制pSmad3的入核;加入PPARy拮抗劑GW9662后,逆轉(zhuǎn)了上述指標(biāo)的變化趨勢。結(jié)論三棱丸方能改善大鼠CD腸纖維化模型的纖維化程度,對IEC-6細胞的EMT有抑制的作用;其治療克羅恩病腸纖維化的機制可能是和激活PPAR-γ來抑制TGF-β1/Smads的信號通路相關(guān)。
[Abstract]:The purpose of the use of Crohn's disease intestinal fibrosis rat model to observe the effect of sanlengwan Decoction on intestinal fibrosis in rats, observe the sanlengwan in transforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) induced by intestinal epithelial cells (IEC-6) of epithelial mesenchymal transition (EMT) process of fibrosis related factors and PPAR- expression. And to explore the mechanism of TGF beta sanlengwan through 1/Smads signal transduction pathway intervention of intestinal fibrosis in vivo EMT. Methods: 48 SD rats were randomly divided into control group, model group, rosiglitazone group, Sanleng pill high, low dose treatment group, group except the blank group, after five group each week for 5% three trinitrobenzene sulfonic acid (trinitrobenzene sulphonic acid TNBS 1Omg), on the first day, 15mg on the eighth day, 20mg on the fifteenth day, 25mg on the twenty-second day, 30mg on the twenty-ninth day, respectively, with 50% 0.8ml ethanol solution of a disposable enema, gradually increase The amount of enema induced intestinal fibrosis model; from the start of the model, the rats of the day were 10.Og/kg, 5.0g/kg, 2.5g/kg different concentrations of sanlengwan Decoction orally, rosiglitazone group with 8mg/kg concentration of rosiglitazone orally, once a day; the model group and normal group were given equal volume of saline. During the period of observation the situation of the rats were collected 35 days after colon tissue for pathological evaluation, and detection of colonic tissue TGF- beta 1, E-cadherin, FN, alpha -SMA, CTGF and PPARy. In vitro experiment: TGF- beta 1 induced IEC-6 cells to form EMT model as the research object, using the Western blot assay. In the low dose of sanlengwan medicated serum and rosiglitazone on 1EC-6 cell by PPAR, expression of Smad2/3 and pSmad3 protein, E-cadherin RT-PCR detection method, the expression of alpha -SMA mRNA; immunofluorescence observation of serum and Roger sanlengwan containing columns Ketone of PPAR gamma, pSmad3 effect into the level of the nucleus, and detected by PPAR gamma antagonist GW9662, change the relevant indicators. The experimental results of in vitro: compared with model group, three pills in high dose group disease activity index (DAI) score, colonic general score, histological fibrosis scores were significantly lower than the model group (P0.05), Masson staining showed that the three pill high dose group collagen fiber content was significantly lower than the model group; E-cadherin, PPAR gamma content increased than model group (P0.05), TGF-[beta 1, FN, alpha -SMA levels were decreased significantly (P0.05). In vitro study: compared with 10% normal rat serum group, sanlengwan medicated serum can inhibit alpha -SMA, promote the expression of PPAR E-cadherin and mRNA E-cadherin gamma; improve, reduce pSmad3, PPAR- gamma, alpha -SMA protein level; immunofluorescence results showed sanlengwan containing serum promote PPAR gamma nuclear entry, suppression PSmad3 into the nucleus; adding PPARy antagonist, GW9662, reversed the trend of the index. The degree of fibrosis conclusion sanlengwan decoction can improve the intestinal fibrosis in rats with CD model, on IEC-6 cell EMT has inhibiting effect; the treatment of Crohn's disease and intestinal fibrosis mechanism may be the activation of signal transduction pathways to PPAR- gamma inhibition of TGF- beta 1/Smads.

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 袁晨;陳維雄;歐洋肖;張靖;陳尼維;朱金水;;白細胞介素-10對抗增殖蛋白在小鼠腸纖維化中表達的影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年01期

2 任燕波;張翠紅;安彩萍;吳煥淦;洪玨;吳凌翔;劉婕;馬曉們;王臻;;隔藥灸和電針對大鼠克羅恩病腸纖維化血清學(xué)指標(biāo)的影響(英文)[J];Journal of Acupuncture and Tuina Science;2011年01期

3 景明;劉喜平;陳暉;李碩;陳垣;;藏藥濕生扁蕾提取物對實驗性大鼠潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化的影響[J];中國民族醫(yī)藥雜志;2011年12期

4 劉慧榮;譚琳鎣;吳煥淦;朱毅;趙粹英;崔云華;江彬;王曉梅;;艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化大鼠結(jié)腸成纖維細胞增殖影響的研究[J];上海針灸雜志;2008年07期

5 譚琳鎣;吳煥淦;劉慧榮;江彬;黃文燕;張必萌;施征;;IGF與腸纖維化的關(guān)系及針灸的調(diào)節(jié)作用研究進展[J];上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2006年01期

6 吳煥淦,張必萌,安廣青;隔藥灸調(diào)節(jié)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化TGF-β及其受體的研究[J];江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年01期

7 李輝;宋佳;張曉嵐;;轉(zhuǎn)化生長因子β與炎性反應(yīng)腸病相關(guān)腸纖維化的關(guān)系[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年11期

8 劉慧榮;譚琳鎣;吳煥淦;朱毅;趙粹英;崔云華;江彬;王曉梅;崔學(xué)軍;;Effect of Moxibustion on the Synthesis and Secretion of Collagen by Colonic Fibroblasts in Ulcerative Colitis Fibrosis Rats[J];Journal of Acupuncture and Tuina Science;2008年01期

9 譚琳鎣;劉慧榮;王莖;秦秀娣;黃文燕;趙天平;吳煥淦;;艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化大鼠CFB膠原合成的影響[J];上海針灸雜志;2009年02期

10 鄔萬新;溫曉偉;陸寧;張燕萍;唐正英;王振;張怡;王偉;楊宏杰;;人日本血吸蟲性大腸纖維化膠原蛋白和細胞因子觀察[J];中國血吸蟲病防治雜志;2008年04期

相關(guān)會議論文 前2條

1 劉慧榮;譚琳鎣;吳煥淦;朱毅;趙粹英;崔云華;江彬;王曉梅;;艾灸對潰瘍性結(jié)腸炎腸纖維化大鼠結(jié)腸成纖維細胞增殖影響的研究[A];第十三屆針灸對機體功能的調(diào)節(jié)機制及針灸臨床獨特經(jīng)驗學(xué)術(shù)研討會暨第三屆經(jīng)絡(luò)分會委員會會議論文集[C];2008年

2 譚琳鎣;劉慧榮;吳煥淦;江彬;黃文燕;張必萌;王曉梅;;IGF與腸纖維化的關(guān)系及針灸對其調(diào)節(jié)的研究[A];全國針法灸法臨床與科研學(xué)術(shù)研討會暨脊柱病研究新進展論文匯編[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李平;IGF-1和白藜蘆醇對克羅恩病大鼠腸纖維化的作用和機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

2 李輝;TL1A在實驗性結(jié)腸炎相關(guān)腸纖維化發(fā)生中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 丁曉春;克羅恩病患者中胰島素樣生長因子-1水平檢測的臨床觀察和實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

2 丁浩;同型半胱氨酸對實驗性結(jié)腸炎大鼠腸纖維化的影響及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

3 梁美蘭;辛伐他汀對大鼠克羅恩病結(jié)腸纖維化的作用和機制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號：1397933