本文關(guān)鍵詞：茶病靈芝、樹靈芝和無柄紫靈芝化學(xué)成分及生物活性研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：靈芝屬真菌屬于多孔菌目(Polyporales),靈芝科(Ganodermataceae),主要分布在中國、朝鮮半島和日本,國內(nèi)分布于福建、海南、安徽、山東、浙江、江西、湖南、廣東等地。含有多糖、三萜、甾體類、核苷類、生物堿、氨基酸及微量元素化合物等成分。其中,起主要作用的是多糖和三萜類化合物。具有抗腫瘤作用,保肝護肝作用,抗氧化、抗衰老作用,心臟保護作用,改善記憶作用,抗病毒、抑制細菌作用等。本文運用多種色譜技術(shù)和波譜技術(shù),對茶病靈芝,樹靈芝和無柄紫靈芝進行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究,并對其粗提物及單體成分進行了藥理活性篩選。從茶病靈芝Ganoderma theacolum乙醇提取物的氯仿部分和乙酸乙酯部分共分離得到48個化合物,包括36個三萜,3個甾體,5個生物堿,1個混源萜類,3個其它類化合物。結(jié)構(gòu)鑒定為:靈芝酸XL1(ganodericacidXL1,1*),靈芝酸 XL2(ganoderic acid XL2,2*),20-羥基-靈芝酸 AM1(20-hydroxy-ganoderic acid AM1,3*),靈芝烯酸 AM1(ganoderenicacidAM1,4*),ganoderesinC(5*),靈芝酸 XL3(ganoderic acid XL3,6*),靈芝酸 XL4(ganoderic acid XL4,7*),靈芝酸XL5(ganoderic acid XL5,8*),靈芝酸 XL6(ganoderic acid XL6,9*),赤芝酮 A(lucidoneA,10),赤芝酮 B(lucidoneB,11),赤芝酮 C(lucidoneC,12),赤芝酮 D(lucidoneD,13),赤芝酮 F(lucidoneF,14),靈芝酸 B 甲酯(methylganoderate B,15),靈芝烯酸 H(ganoderenicacidH,16),靈芝酸 C2(ganodericacidC2,17),靈芝酸 C2 甲酯(methylganoderateC2,18),靈芝酸 AP3(ganodericacidAP3,19),靈芝酸C2乙酯(ethylganoderateC2,20*),3β，，155α-二羥基-11-羰基-5α-羊毛甾-8,24-二烯-26-酸(3β,15α-dihydroxy-11-oxo-5α-lanosta-8,24-dien-26-oicacid,21),3β,7β-二羥基-11,15,23-三酮-羊毛甾-8,16-二烯-26-酸(3β,7β-diydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oicacid,22),3ββ,7β-二羥基-11,15,23-三酮-羊毛甾-8,16-二烯-26-酸甲酯(3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid methyl ester,23),靈芝赤芝酸 B(ganolucidic acid B,24),ganolucidate F(25),靈芝烯酸B(ganoderenicacidB,26),靈芝烯酸 B 甲酯(ganoderenicacidBmethyl ester,27*),靈芝酸 ζ(ganoderic acid ζ，28),7-羰基-靈芝酸 Z(7-oxo-ganoderic acidZ,29),7-羰基-靈芝酸 Z2(7-oxo-ganodericacidZ2,30),靈芝酸 Y(ganoderic acid Y,31),7-羰基-靈芝酸 Z3(7-oxo-ganoderic acid Z3,32),polycarpol(33),ganodermadiol(34),3β3,21-dihydroxy-lanost-7,9(11),24-trien-26-oic acid(35),ganoderon B(36),3β,5α,6β-trihydroxy-ergosta-7,22-diene(37),ergosta-7,22-dien-2β,3α,9α-triol(38),ergosterol D(39),(E)-p-acetoxy coumaryl alcohol(40),protocatechuic acid(41),iso vanillic acid(42),spirolingzhine D(43),2-oxo-1,2-dihydroquinoline-6-carboxylic acid(44),1-oxo-1,2-dihydroisoquinoline-3-carboxylic acid(45),尿嘧啶(uracil,46),sinensine(47),維生素 B2(vitamin B2,48)。其中,化合物1-9,20,27為新化合物(帶*的化合物),已知化合物均為首次從茶病靈芝子實體中分離得到。從樹靈芝Ganodermasessile乙醇提取物的氯仿部分和乙酸乙酯部分共分離得到45個化合物,包括25個三萜,10個甾體,4個生物堿,2個混源萜類化合物,4個其它類化合物。結(jié)構(gòu)鑒定為:靈芝酸LM2(ganodericacidLM2,49),靈芝孢子酸A(ganosporeric acid A,50),靈芝酸J(ganoderie acid J,51),靈芝酸C((ganoderic acid C1,52),靈芝酸 A(ganoderic acid A,53),靈芝酸 B(ganoderic acid B,54),靈芝酸M(ganoderic acid M,55),靈芝酸C6(ganoderic acid C6,56),靈芝酸 AM1(ganodericacidAM1,57),靈芝酸 G(ganodericacidG,58),靈芝酸I(ganoderic acid I,59),靈芝赤芝酸 A(ganolucidic acid A,60),靈芝酸 ε(ganoderic acidε,61),靈芝酸H(ganodericacidH,62),靈芝酸 E(ganoderic acidE,63),靈芝酸 D2(ganoderic acid D2,64),靈芝酸 TR(ganoderic acid TR,65),赤芝酸 A(lucidenic acid A,66),赤芝酸 C(lucidenic acid C,67),赤芝酸 C 甲酯(methyl lucidenate C,68),赤芝酸 LM1(lucidenic acid LM1,69),赤芝D(lucidone D,70),靈芝烯酸A(ganoderenie acid A,71),靈芝烯酸C(ganodenic acid C,72),靈芝烯酸 D(ganoderenicacidD,73),麥角甾-7,22-二烯-2β,4α-二醇(ergosta-7,22-dien-2β,4α-diol,74),星魚甾醇(ergosta-7,22-dien-3β-ol,75),ergosta-7,22-dien-3-one(76),3 β,5α,6β-trihydroxy-ergosta-7,22-diene(77),3 β,5α,9α-trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one(78),ergosterolD(79),麥角甾醇(ergosterol,80),過氧麥角甾醇(5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol,81),ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β,9α-tetraol(82),β-谷甾醇(β-sitosterol,83),尿嘧啶(uracil,84),維生素 B3(vitamin B3,85),ribitol(86),4-hydroxybenzeneacetic acid(87),mannitol(88),histidine(89),spirolingzhineD ethyl ester(90*),hepatacosanoic acid(91),維生素 B2(vitamin B2,92),spirolingzhineD(93)。其中,化合物90為新化合物,已知化合物均為首次從樹靈芝子實體中分離得到。從無柄紫靈芝Ganodderma mastoporum乙醇提取物的氯仿部分共分離鑒定了9個化合物,包括8個三萜和1個生物堿。結(jié)構(gòu)鑒定為:靈芝酸E(ganoderic acidE,94),靈.芝靈酸H(ganoderic acid H,95),靈烯G(ganoderenic acid G,96),靈芝烯酸 K(ganoderenic acid K,97),7α,15α-二羥基-3,11,23-三羰基-5α-羊毛甾-8-烯-26-酸(7α,15α-dihydroxy-3,11,23-trioxo-5α-lanosta-8-en-26-oic acid,98),3β-hydroxy-12β-acetoxy-7,l 1,15,23-tetraoxo-lanost-8,20(22)-dien-26-oic acid(99),7β,15α-dihydroxy-4,4,14-trimethyl-3,l 1-dioxochol-8-en-24-oic acid(100),3β,7β-dihydroxy-11,12,15,23-tetraoxo-lanost-8-en-26-oic acid(101),對氨基苯甲酸甲酯(4-aminobenzoic acid methyl ester,102)�；衔� 94-102 均為首次從無柄紫靈芝子實體中分離得到�；钚院Y選結(jié)果顯示:1.保肝活性:采用MTT法觀察茶病靈芝粗提物,茶病靈芝單體化合物和樹靈芝單體化合物對人肝細胞HL-7702細胞成活率的影響。結(jié)果顯示茶病靈芝95%乙醇提取物50%乙醇大孔樹脂洗脫部分在10-5M時表現(xiàn)出一定的保肝活性,新化合物1,4和5在10-5M時表現(xiàn)出一定的保肝活性;同時,化合物11和26在10-5M時也表現(xiàn)出一定的保肝活性。樹靈芝單體化合物50,53,54,59,63和64在10-5M時也表現(xiàn)出一定的保肝活性。2.細胞毒活性:采用MTT法測定了茶病靈芝部分化合物對五種人癌細胞的抑制作用。結(jié)果顯示樣品濃度10-6 M時,化合物30對癌細胞H460表現(xiàn)出一定的細胞毒活性;化合物31對癌細胞H460,BGC823和HCT116表現(xiàn)出一定的細胞毒活性。3.多囊腎抑制作用方面,在MDCK囊泡模型中,化合物2,6和7能夠抑制囊泡的形成和增大。其中化合物2和7能夠顯著抑制囊泡的增大,化合物6有抑制作用但僅僅在第12天有統(tǒng)計學(xué)意義,并且沒有化合物2和7的抑制作用顯著;濃度均為12.5 μ時化合物2,6和7不影響MDCK細胞的細胞生存率;濃度均為12.5 μM時化合物2,6和7不影響總細胞集落數(shù);化合物7能夠顯著抑制MDCK囊的形成。對Ras/MAPK信號通路的作用結(jié)果顯示:化合物7在不同濃度時(3.125,12.5和50μM)均能夠顯著降低H-Ras蛋白,B-raf蛋白,p-]MEK蛋白,p-ERK蛋白,Egr-1蛋白和c-fos蛋白的表達水平,Raf-1蛋白的表達水平呈劑量依賴的關(guān)系。4.抑制蛋白酪氨酸激酶活性:采用MTT法觀察茶病靈芝粗提物和部分單體化合物對蛋白酪氨酸激酶的抑制活性,結(jié)果顯示茶病靈芝95%乙醇提取物50%乙醇大孔樹脂洗脫部分在10-5M時表現(xiàn)出一定的蛋白酪氨酸激酶的抑制活性(抑制率為78.11%),各化合物均無明顯的蛋白酪氨酸激酶抑制活性(IC5010μmol·L/1)。本論文從三種靈芝中共分得102個化合物(其中有6個為茶病靈芝和樹靈芝共有,有2個為樹靈芝和無柄紫靈芝共有)。從茶病靈芝乙醇提取物中共分離鑒定了 48個化合物,從樹靈芝乙醇提取物中共分離鑒定了 45個化合物,從無柄紫靈芝乙醇提取物中共分離鑒定了 9個化合物。其中,茶病靈芝95%乙醇提取物50%乙醇大孔樹脂洗脫部分在10-5M時表現(xiàn)出一定的保肝活性和蛋白酪氨酸激酶抑制活性;化合物 1,4,5,11,26,50,53,54,59,63 和 64 在 10-5M時表現(xiàn)出一定的保肝活性;樣品濃度10-6 M時,化合物30對癌細胞H460表現(xiàn)出一定的細胞毒活性,化合物31對癌細胞H460,BGC823和HCT116表現(xiàn)出一定的細胞毒活性;在MDCK囊泡模型中,化合物2,6和7能夠抑制囊泡的形成和增大。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1


本文編號：1379945