本文關(guān)鍵詞：FXR上調(diào)miR-122的分子機制及在抗HCC中的作用研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 微小RNA-122 法尼醇X受體 肝細胞癌 細胞生長 基因調(diào)控

【摘要】：肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范圍內(nèi)最普遍的惡性腫瘤之一。其誘發(fā)因素有多個,包括病毒感染、原癌基因激活、抑癌基因表達異常等。目前關(guān)于肝細胞癌的發(fā)病機制有待深入研究,而進一步闡明與肝細胞癌發(fā)病過程中密切相關(guān)的基因及其相互作用無疑將有助于加深對HCC發(fā)病機制的理解以及發(fā)現(xiàn)靶向治療HCC的新靶點。近年來,與HCC密切相關(guān)的法尼醇X受體(farnesoid X receptor,FXR)和microRNA日益受到重視。FXR屬于核受體超家族成員,主要在肝臟、小腸、腎臟和腎上腺中表達,密切參與膽汁酸代謝、糖脂代謝,進而調(diào)節(jié)肝臟再生、肝纖維化等。大量的研究發(fā)現(xiàn),FXR與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。FXR作為一種多功能的轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)節(jié)多種腫瘤相關(guān)靶基因的表達和功能,進而發(fā)揮重要的抗HCC作用,但FXR的抗HCC機制尚不十分清楚,有待進一步的深入研究。mi R-122是一種在肝臟中特異性高表達的microRNA。在正常生理狀態(tài)下,miR-122可以調(diào)控肝臟的細胞發(fā)育和細胞代謝,誘導(dǎo)細胞分化,并參與肝細胞應(yīng)激應(yīng)答等多種生命活動;而在病理狀態(tài)下,mi R-122與HCC密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),在HCC發(fā)生、發(fā)展過程中,mi R-122發(fā)揮著類似抑癌基因的作用,其主要通過抑制腫瘤相關(guān)基因的表達而發(fā)揮其抗腫瘤的功能。鑒于miR-122在抗HCC方面的重要作用,那么設(shè)法上調(diào)miR-122的表達,無疑將有助于肝癌的防治。目前的研究多集中在miR-122通過調(diào)節(jié)靶基因發(fā)揮抗腫瘤作用的機制方面,而關(guān)于miR-122自身的表達調(diào)控少有報道,最近的研究發(fā)現(xiàn),一些轉(zhuǎn)錄因子(HNF4α、C/EBPα)可以促進miR-122的表達,但關(guān)于核受體FXR是否上調(diào)miR-122的表達,并通過此通路發(fā)揮抗HCC作用,目前未見報道。因此,結(jié)合相關(guān)文獻和我們初步的研究結(jié)果,本課題率先鑒定了miR-122是FXR的一個新靶基因,揭示FXR促進mi R-122表達的具體分子機制;進而闡明“FXR-miR-122通路”在抗HCC作用中的新機制,為進一步深入而全面地揭示FXR的抗肝細胞癌機制以及miR-122自身的表達調(diào)控積累新的理論資料,為探索以“FXR-miR-122通路”為靶標的抗腫瘤治療提供新的科學(xué)依據(jù)。目的:本研究從體內(nèi)外探討FXR上調(diào)miR-122的分子機制及“FXR-miR-122通路在抗HCC中的重要作用方法:1.收集20例hcc病人的腫瘤組織及癌旁組織,和7種hcc細胞系,經(jīng)real-timepcr和westernblot實驗,檢測fxr與mir-122的表達,并通過相關(guān)性統(tǒng)計,分析fxr與mir-122表達的相關(guān)性。2.不同濃度fxr激動劑處理hcc細胞,以及采用rna干擾(rnainterference,rnai),通過real-timepcr和westernblot實驗檢測mir-122以及mir-122靶基因igf-1r和cycling1的表達,研究fxr對mir-122表達的影響。3.應(yīng)用生物信息學(xué)分析,預(yù)測人mir-122的5'調(diào)控區(qū)fxr的可能結(jié)合位點,構(gòu)建含可能結(jié)合位點報告基因質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染細胞經(jīng)luc報告基因檢測實驗,初步確定fxr可能結(jié)合位點的所在區(qū)域。進一步采用凝膠遷移率實驗(emsa)和染色質(zhì)免疫沉淀實驗(chip),探討fxr調(diào)節(jié)mir-122表達的具體分子機制。4.hcc細胞轉(zhuǎn)染antagomir-122抑制mir-122功能后,采用cck-8法檢測細胞的增殖情況。5.hcc細胞接種裸鼠成瘤后,以fxr的配體灌胃處理小鼠,一定時間后,在肝癌荷瘤鼠上觀察腫瘤的生長情況,然后處死小鼠,切取腫瘤組織,real-timepcr和westernblot實驗檢測mir-122,igf-1r和cycling1的表達情況。免疫組化測定增殖標志物ki67的表達,在體內(nèi)探討“fxr-mir-122通路”的抗hcc作用。結(jié)果:1.fxr和mir-122在20例hcc病人腫瘤組織中的表達均顯著低于癌旁組織,且相關(guān)性分析顯示,fxr與mir-122的表達呈顯著正相關(guān);同樣,相對于正常人肝細胞系l02,7種hcc細胞系中fxr和mir-122的表達也呈顯著正相關(guān)。2.fxr激動劑處理hcc細胞活化fxr后,可顯著增加mir-122的表達,并減弱其靶基因和igf-1r和cycling1的表達,同時,hcc細胞轉(zhuǎn)染fxrsirna抑制fxr后,顯著抑制了fxr激動劑誘導(dǎo)mir-122的表達。3.通過報告基因檢測、emsa和chip實驗證實了,fxr可通過直接結(jié)合于mir-122啟動子區(qū)-338到-325的dr2反應(yīng)元件,增強mir-122的啟動子活性,進而促進mir-122的表達。4.細胞增殖檢測實驗顯示,抑制mir-122后可顯著減弱fxr對hcc細胞增殖的抑制作用。5.肝癌荷瘤鼠模型上,fxr可顯著誘導(dǎo)mir-122的表達,并抑制其靶基igf-1r和cycling1的表達,進而抑制腫瘤生長。結(jié)論:FXR通過直接結(jié)合于miR-122啟動子區(qū)的DR2(-338到-325)反應(yīng)元件,促進mi R-122的表達,進而抑制腫瘤的生長,提示FXR/miR-122通路可能是防治HCC的新靶點。
[Abstract]:Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant tumors in the world. There are many inducing factors, including viral infection, activation of proto oncogene and abnormal expression of tumor suppressor genes. At present, the pathogenesis of hepatocellular carcinoma needs to be further studied. Further elucidation of the genes and their interactions closely related to the pathogenesis of hepatocellular carcinoma will undoubtedly help to further understand the pathogenesis of HCC and find new targets for targeted therapy of HCC. In recent years, farnesoid X receptor is closely related with HCC (farnesoid X receptor, FXR and microRNA) has been paid more and more attention. FXR is a member of the nuclear receptor superfamily. It is mainly expressed in liver, small intestine, kidney and adrenal gland, and closely participates in bile acid metabolism, glucose and lipid metabolism, and then regulates liver regeneration, liver fibrosis and so on. A large number of studies have found that FXR is closely related to the development of HCC. As a multifunctional transcription factor, FXR can regulate the expression and function of multiple tumor related target genes, and play an important role in anti HCC. However, the mechanism of FXR against HCC is not yet clear, and needs further study. Mi R-122 is a highly expressed microRNA in the liver. Under normal physiological condition, miR-122 can regulate liver cell development and cell metabolism, induce cell differentiation and participate in various kinds of life activities such as liver cell stress response, while in pathological state, MI R-122 is closely related to HCC. It is found that in the process of HCC occurrence and development, MI R-122 acts as a tumor suppressor gene, and its anti-tumor function is mainly achieved by inhibiting the expression of tumor related genes. In view of the important role of miR-122 in anti HCC, it will undoubtedly contribute to the prevention and treatment of liver cancer by trying to increase the expression of miR-122. The present study focused on miR-122 regulated target genes through the mechanism of the antitumor effect, and regulate the expression of miR-122 on its own is rarely reported, a recent study found that some transcription factors (HNF4 and C/EBP alpha) could promote the expression of miR-122, but the expression of nuclear receptor FXR is up-regulated the expression of miR-122, and play the role of anti HCC through this pathway has not been reported. Therefore, combined with relevant literature and our preliminary research results, this study first identified miR-122 as a new target gene of FXR, to reveal the molecular mechanism of MI R-122 FXR to promote specific expression; and then clarify the "FXR-miR-122 pathway" new mechanism in anti HCC effects, for further in-depth and comprehensive reveal the regulation of the expression of anti liver cell carcinoma mechanism of FXR and miR-122's own accumulation theory for exploring new data, provide new scientific basis for anti-tumor therapeutic targets in the "FXR-miR-122 pathway". Objective: the purpose of this study was to explore the molecular mechanism of FXR upregulation of miR-122 and FXR-miR-122 pathway plays an important role in the anti HCC method from the in vivo tumor tissue and cancer: 1. of 20 cases were collected with HCC tissues and 7 HCC cell lines by real-timepcr and Westernblot experiments, the expression of FXR and miR-122, and through the correlation statistical analysis of correlation between the expression of FXR and mir-122. 2. different concentrations of FXR agonists were used to treat HCC cells, and RNA interference (rnainterference, RNAi) was used to detect miR-122 and miR-122 target gene IGF-1R and cycling1 expression by real-timepcr and Westernblot experiments. 3. bioinformatics analysis was used to predict the possible binding sites of FXR in the 5'regulatory region of human miR-122, and construct a reporter plasmid containing the possible binding sites. The transfected cells were detected by Luc reporter gene assay, and the location of the possible binding sites of FXR was preliminarily determined. The gel mobility test (EMSA) and chromatin immunoprecipitation assay (chip) were used to explore the specific molecular mechanism of FXR to regulate the expression of miR-122. After transfection of 4.hcc cells with antagomir-122 to inhibit miR-122 function, the proliferation of cells was detected by CCK-8. 5.hcc cells were inoculated in nude mice after intragastric administration with FXR ligand treated mice, after a certain period of time, to observe the growth of tumor in tumor bearing mice, then the mice were killed, cut the tumor tissue, real-timepcr and Westernblot test miR-122, IGF-1R and cycling1 respectively. The expression of the proliferation marker Ki67 was determined by immunohistochemistry, and the anti HCC effect of the "fxr-mir-122 pathway" was discussed in the body. Results: the expression of 1.fxr and miR-122 in 20 cases of HCC patients were significantly lower than that in tumor tissue and paracancerous tissue, and the correlation analysis showed that there was a positive correlation between FXR and miR-122; also, compared with the positive correlation of normal human liver cell line l02,7 FXR and miR-122 HCC cell lines also. 2.fxr agonist treated HCC cells activated FXR, significantly increased the expression of miR-122, and reduced the expression of target genes and IGF-1R and cycling1. Meanwhile, HCC cells transfected fxrsirna inhibited FXR expression, and significantly inhibited the expression of miR-122 induced by FXR agonist. 3., by means of reporter gene detection, EMSA and chip experiments, it is confirmed that FXR can enhance the activity of miR-122 promoter and directly promote the expression of miR-122 through directly combining DR2 reaction element from miR-122 promoter -338 to -325. 4. cell proliferation assay showed that inhibition of miR-122 could significantly reduce the inhibitory effect of FXR on the proliferation of HCC cells. 5. FXR could significantly induce the expression of miR-122 and inhibit the expression of IGF-1R and cycling1, and then inhibit the growth of tumor. Conclusion: FXR can directly promote the expression of MI R-122 by inhibiting the expression of MI R-122 and directly inhibiting the growth of tumor by combining DR2 (-338 to -325) in miR-122 promoter region, suggesting that FXR/miR-122 pathway may be a new target for the prevention and treatment of HCC.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐衛(wèi)東,張春平,王桂榮;肝細胞癌的變化模式[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);2000年10期

2 ;早期發(fā)現(xiàn)肝細胞癌可增加治療機會[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2000年02期

3 Schafer DF,潘朝法,李蘇云;肝細胞癌[J];第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年01期

4 中沼安二,林淑蘭,姚楨;有關(guān)小肝細胞癌病理學(xué)的最新認識[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年05期

5 靜雨;;美國肝細胞癌發(fā)病率增高[J];國外醫(yī)學(xué)情報;2000年01期

6 張玉勛;;肝細胞癌的非手術(shù)治療[J];國外醫(yī)學(xué)情報;2000年05期

7 徐宏勇,李開宗,付由池,竇科峰,李景夢,何揚舉;bcl-x,bax基因表達與肝細胞癌臨床病理特征的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2001年14期

8 蔡端;多中心源肝細胞癌的特征:與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的比較[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2002年02期

9 張春平;與白介素-18水平升高有關(guān)的肝細胞癌自發(fā)性消退[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);2003年03期

10 薛海鷗,岳莉;兒童肝細胞癌1例報告[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 卞讀軍;;肝細胞癌經(jīng)導(dǎo)管動脈化療栓塞前后磁共振波譜研究[A];2009中華醫(yī)學(xué)會影像技術(shù)分會第十七次全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

2 賈建偉;趙潔;;肝細胞癌領(lǐng)域研究現(xiàn)狀與進展[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會論文集[C];2009年

3 陳孝平;;肝細胞癌外科治療進展[A];湖北省第21屆腫瘤學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2011年

4 張杰;劉軍建;韓云;張寧;芮靜安;金城;周柔麗;;用熒光差異顯示法篩選肝細胞癌相關(guān)新基因[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

5 馮仕庭;李子平;譚國勝;孫燦輝;彭振鵬;;中晚期肝細胞癌的多層螺旋CT血管造影表現(xiàn)及臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

6 張法標;方哲平;王義;董輝;叢文銘;;上皮鈣粘素和β-連接素在兒童肝細胞癌中的表達及其臨床意義[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

7 陳鐘杰;;螺旋CT診斷原發(fā)型肝細胞癌28例[A];2008年浙江省放射學(xué)年會論文匯編[C];2008年

8 賈克東;;肝細胞癌的診斷進展及治療現(xiàn)狀[A];全國中西醫(yī)結(jié)合肝病新進展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2010年

9 李秋萍;龍順欽;楊小兵;鄧宏;蔡姣芝;潘宗奇;河文峰;周宇姝;歐陽育樹;廖桂雅;吳萬垠;;癌服靈治療晚期肝細胞癌的臨床研究[A];2012·中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會第三次會議論文集[C];2012年

10 朱明華;祝峙;劉曉紅;林靜;曲建慧;陳穎;曹曉哲;王力;倪燦榮;;乙型肝炎病毒感染與肝細胞癌發(fā)生關(guān)系的分子病理學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 中國抗癌協(xié)會臨床腫瘤學(xué)協(xié)作專業(yè)委員會主任委員 秦叔逵;治療肝細胞癌 別只盯著靶向藥[N];健康報;2013年

2 記者 王丹 管九蘋;肝細胞癌標志物研究獲新進展[N];健康報;2013年

3 吳一福;四軍醫(yī)大唐都醫(yī)院發(fā)現(xiàn)硒蛋白P與肝細胞癌發(fā)生有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報;2007年

4 黎彬;肝癌研究重要進展——預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移成為可能[N];中國醫(yī)藥報;2004年

5 錢文彩;α2δ1陽性細胞為新的肝細胞癌干細胞[N];中國醫(yī)藥報;2013年

6 新美;基礎(chǔ)研究進展推動肝臟病學(xué)進步[N];中國醫(yī)藥報;2008年

7 周金蓮;MIB-1和bcl-2表達預(yù)測肝癌發(fā)生[N];中國醫(yī)藥報;2004年

8 張金山;要靈活運用影像學(xué)提供的方法和手段[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

9 李杰;不能手術(shù)切除肝細胞癌的治療[N];科技日報;2006年

10 ;修復(fù)肝細胞 改善肝功能[N];人民日報海外版;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 何家琳;FXR上調(diào)miR-122的分子機制及在抗HCC中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2017年

2 白蘭;乙肝病毒捕獲細胞因子和信號級聯(lián)以逃避宿主免疫并維持持續(xù)感染[D];武漢大學(xué);2014年

3 何洪衛(wèi);肝細胞癌內(nèi)γδT細胞浸潤減少及功能缺陷的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 蔡曉燕;淋巴細胞在肝細胞癌和癌旁組織中的差異性表達研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 向?qū)?細胞周期因子FoxM1促進肝臟再殖的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 康富標;共刺激分子B7-H3在肝細胞癌的表達及相關(guān)機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

7 楊純;Gankyrin正反饋調(diào)控Nrf2在肝細胞癌中發(fā)揮抗氧化作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 高霞;PNPLA3基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達與乙肝病毒感染易感性及乙肝相關(guān)肝細胞癌的關(guān)聯(lián)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 彭晨星;microRNA結(jié)合位點單核苷酸多態(tài)性對肝細胞癌預(yù)后影響的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

10 田偉;γδT細胞免疫治療肝細胞癌的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王飛;CDH17調(diào)控肝細胞癌的生物學(xué)機制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳中博;咖啡攝入與肝細胞癌發(fā)病風(fēng)險的Meta分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張華鵬;核受體輔激活蛋白5在肝細胞癌組織中的表達及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

4 郭慧敏;血清sCD25測定在肝細胞癌診斷中的意義[D];鄭州大學(xué);2015年

5 凌青霞;雙氧化酶1（Duox1）在肝細胞癌中的表達調(diào)控及作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 李會芬;血清Talin-1在肝細胞癌診斷中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

7 蒙錦瑩;血管生長相關(guān)因子的血清濃度與肝細胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 戰(zhàn)勇;肝細胞癌術(shù)前造影參數(shù)與生物學(xué)表現(xiàn)相關(guān)性及術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素討論[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

9 姚樂;microRNA-32在肝細胞癌中的表達及其臨床預(yù)后意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 吳華;MACC1在肝細胞癌中的表達與臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1338182