本文關鍵詞：結直腸癌中CYP24A1異常表達的臨床意義及調控機制的研究　出處：《吉林大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 1 25(OH)_2D_3 CYP24A1 VDR 結直腸腫瘤 DNA甲基化

【摘要】：目的:結直腸癌是人類常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率居全球惡性腫瘤第三位,每年約有136萬新發(fā)病例,病死率居第四位,每年約有69萬人死于結直腸癌。近年來,結直腸癌發(fā)病率在我國呈上升趨勢,成為影響公眾健康的重大疾病。流行病學及實驗研究均表明,維生素D與結直腸癌的發(fā)病密切相關。維生素D可通過抗增殖,促分化,促凋亡,抑制血管生成,免疫調節(jié)等途徑發(fā)揮抗結直腸癌的作用,維生素D及其代謝通路正成為結直腸癌防治研究領域中的熱點。維生素D_3是維生素D最重要的形式,其活性代謝產物為1,25(OH)_2D_3。1,25(OH)_2D_3通過與VDR結合,調控多個基因表達,發(fā)揮抗腫瘤生物活性。CYP24A1是維生素D代謝過程中的限速酶,將25(OH)D_3,1,25(OH)_2D_3分別羥化為24,25(OH)_2D_3和1α,24,25(OH)_3D_3而失去生物學活性,在1,25(OH)_2D_3抗腫瘤作用中發(fā)揮至關重要的調節(jié)作用。研究表明,CYP24A1是一個潛在的癌基因,在乳腺癌、肺癌、食管癌等組織中異常表達且與腫瘤惡性程度及患者不良預后相關,在某些類型腫瘤中CYP24A1異常表達受DNA甲基化的調控。目前,國內外關于結直腸癌組織中CYP24A1及VDR表達情況的研究較少,CYP24A1及VDR的表達與結直腸癌患者臨床病理學指標及預后之間的關聯(lián)性尚不明確,DNA甲基化是否能夠調控結直腸癌細胞中CYP24A1的表達也有待進一步闡明�；诖�,本研究擬通過實驗揭示在結直腸癌發(fā)病及進展過程中,VDR及CYP24A1表達與患者臨床病理學信息及預后的相關性,以及其表達的變化對1,25(OH)_2D_3抗結直腸癌功能的影響,同時,對CYP24A1在結直腸癌中表達的調控機制進行探討,闡明DNA甲基化在調控結直腸癌細胞CYP24A1表達中的作用。方法:(1)根據(jù)結直腸癌的自然演變過程,系統(tǒng)收集正常、癌前病變及癌組織,包括57例正常腸粘膜、12例腸腺瘤、99例腸癌組織,構建組織芯片,通過免疫組織化學技術檢測VDR及CYP24A1表達水平的變化,探討其與患者臨床信息包括年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、血管浸潤、神經浸潤以及預后信息的關聯(lián)性并進行統(tǒng)計分析;使用ELISA實驗方法對40例健康體檢者、12例腺瘤患者、46例結直腸癌患者的血清25(OH)D_3水平進行檢測;(2)在腸癌細胞系SW480、Caco2中,通過WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒分別檢測1,10,100,200n M四個劑量1,25(OH)_2D_3處理24h,48h,96h后,腫瘤細胞相對存活率的變化,通過RT-PCR檢測100n M 1,25(OH)_2D_3處理SW480、Caco2細胞系后VDR,CYP24A1 mRNA表達水平的變化;在Caco2細胞系中通過RNAi技術對CYP24A1基因表達進行干涉,通過WST-1試劑盒檢測干涉CYP24A1后1,25(OH)_2D_3對Caco2細胞增殖抑制作用的變化;(3)通過BSP實驗檢測5例結直腸癌組織及配對正常組織中CYP24A1啟動子區(qū)甲基化水平的差異,并通過5-氮雜-2-脫氧胞苷對結直腸癌細胞系SW480、Caco2進行去甲基化處理,通過RT-PCR比較處理前后細胞中CYP24A1基因mRNA表達水平的改變,此外,對Caco2細胞進行去甲基化處理后,通過RT-PCR檢測1,25(OH)_2D_3調控CYP24A1表達的變化,在組織和細胞層面研究DNA甲基化在CYP24A1基因表達中的調控作用。結果:(1)成功構建了結直腸癌組織芯片并與免疫組織化學技術相結合檢測CYP24A1和VDR的表達。CYP24A1在腸癌、腺瘤、正常組織中的高表達率分別為69.7%、66.7%、21.1%,CYP24A1在腸癌組織中和腺瘤組織的表達均顯著高于正常組織,而腸癌及腺瘤組織中的表達尚不存在差異;VDR在腸癌、腺瘤、正常組織中高表達率分別為27.3%、58.3%、64.9%,VDR在腸癌中的高表達率顯著低于腺瘤組織和正常組織,腺瘤組織和正常組織中VDR的表達暫未發(fā)現(xiàn)差異。CYP24A1表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及血管浸潤情況密切相關;VDR表達與腫瘤的浸潤深度相關;(2)CYP24A1高表達組結直腸癌患者的總生存期及無病生存期顯著低于低表達組,Cox比例風險回歸模型顯示,CYP24A1表達是結直腸癌無病生存期的獨立影響因素(HR=2.829,95%CI=(1.092-7.330),P=0.032)。VDR高表達組結直腸癌患者的總生存期及無病生存期與低表達組結直腸癌患者的總生存期及無病生存期無顯著性差異;(3)結直腸癌患者血清25(OH)D_3水平為非正態(tài)分布,其中位數(shù)為10.80ng/ml,四分位數(shù)間距為(4.58,28.21),腺瘤患者血清25(OH)D_3水平為63.29±32.95ng/ml,健康體檢者血清25(OH)D_3水平為67.91±33.26ng/ml。結直腸癌患者血清25(OH)D_3水平明顯低于健康對照組及腺瘤組,腺瘤組與健康對照組尚無差異。血清25(OH)D_3水平與CYP24A1的表達,在腺瘤患者中呈負相關(r=-0.614,P=0.034),在結直腸癌患者中暫無相關性。血清25(OH)D_3水平與VDR的表達,在結直腸癌及腸腺瘤患者中無相關性;(4)不同劑量1,25(OH)_2D_3作用于SW480細胞系、Caco2細胞系,在不同時間點觀察其抑制細胞增殖作用,結果發(fā)現(xiàn)100n M 1,25(OH)_2D_3作用于SW480細胞系,在48h時間點開始出現(xiàn)抑制增殖的作用,隨著作用時間的延長、劑量的增加,其抑制作用愈加明顯,而在各時間點Caco2細胞系中均未發(fā)現(xiàn)其抑制細胞增殖作用。經檢測,Caco2細胞系中CYP24A1表達顯著高于SW480細胞系,在Caco2細胞系中干涉CYP24A1的表達后,結果發(fā)現(xiàn)100n M 1,25(OH)_2D_3作用于Caco2細胞系,在48h時間點出現(xiàn)抑制增殖的作用,細胞相對存活率變?yōu)閷φ战M的76.23%,與對照組相比具有統(tǒng)計學差異;(5)CYP24A1 mRNA表達與其啟動子區(qū)甲基化水平在正常腸粘膜組織和結直腸癌組織中無相關性(r=-0.483,P=0.226);在Caco2細胞系中,使用不同劑量DAC進行去甲基化處理后,各組細胞與對照組比較,CYP24A1 mRNA表達均增高,差異具有統(tǒng)計學意義,而在SW480細胞系中未觀察到此作用。在Caco2細胞系中,經DAC去甲基化處理后1,25(OH)_2D_3誘導CYP24A1表達增高的程度高于未經DAC處理組,差異具有統(tǒng)計學意義。結論:(1)CYP24A1在腸癌及腺瘤組織中表達升高,VDR在腸癌組織中的表達量低于腺瘤組織以及正常組織;CYP24A1高表達率在T3-T4期高于Tis-T2期,在淋巴結轉移組高于未轉移組,血管浸潤組高于未發(fā)生浸潤組。VDR高表達率在Tis-T2期高于T3-T4期。(2)CYP24A1高表達與結直腸癌患者不良預后相關,CYP24A1高表達者總生存期及無病生存期低于低表達者,Cox比例風險回歸模型顯示,CYP24A1是無病生存期的獨立影響因素。(3)結直腸癌患者血清25(OH)D_3水平低于健康人群和腺瘤患者,在腺瘤患者中,CYP24A1的表達與血清25(OH)D_3水平呈負相關。(4)腸癌細胞中CYP24A1表達上調會影響1,25(OH)_2D_3的抗腫瘤活性,在Caco2細胞系中,抑制CYP24A1的表達將增強1,25(OH)_2D_3的抗腫瘤活性。(5)結直腸癌組織中CYP24A1 mRNA表達與CYP24A1啟動子區(qū)甲基化水平無相關性。但在特定細胞系中,DNA甲基化參與了CYP24A1表達的調控。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸漢明,邵正才;青年人結直腸癌83例臨床分析[J];中國胃腸外科雜志;2000年04期

2 王漢濤 ,Kraemer M.;隨訪危險因素分析:復發(fā)和非復發(fā)結直腸癌的比較[J];中國實用外科雜志;2001年12期

3 蘇森;患結直腸癌婦女后代癌癥的危險性增加[J];中國腫瘤;2001年06期

4 汪一虹;在確定的法國人群中年齡<45歲結直腸癌病人與≥45歲結直腸癌病人的比較[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

5 李會晨;結直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2003年03期

6 李志霞;結直腸癌復發(fā)及轉移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

7 何建苗,蒲永東,曹志宇,劉衛(wèi)平;老年人結直腸癌186例的外科治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年05期

8 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結直腸癌臨床病理分析[J];中國普外基礎與臨床雜志;2004年01期

9 章江;;監(jiān)測結直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學情報;2004年04期

10 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結直腸癌中的表達及預后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭樹;;結直腸癌預后與轉移相關因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術會議全國大腸癌轉移與復發(fā)的診治研討會學術論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結直腸癌免疫治療新進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結合大腸肛門病學術會議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結直腸癌治療的進展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學術年會論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉移學術大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結直腸癌預防[A];貴州省中西醫(yī)結合學會肛腸學會第五屆學術交流會暨新技術新進展學習班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結直腸癌診療體會(附42例報告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術年會論文集[C];2011年

7 王啟遠;周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內皮生長因子與結直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結直腸癌靶向治療進展[A];第三屆中國腫瘤內科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學術年會暨腫瘤外科規(guī)范化診治學習班論文匯編[C];2009年

10 萬德森;;進一步提高結直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中華醫(yī)學會腫瘤學分會主任委員 顧晉;分期不精確 致結直腸癌過度治療[N];健康報;2012年

2 本報記者 賈巖;跨線治療成結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

3 本報記者 賈巖;跨線治療構筑結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

4 本報記者 林琳;結直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經濟報;2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結直腸癌發(fā)病高于全國[N];深圳商報;2013年

6 本報記者 孫剛;預防結直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習生 陰浩;專家呼吁：結直腸癌應多學科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結直腸癌復發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結直腸癌[N];健康報;2007年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫鴻燕;結直腸癌中CYP24A1異常表達的臨床意義及調控機制的研究[D];吉林大學;2017年

2 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調控關系在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];復旦大學;2014年

3 任翡;MYBL2基因在結直腸癌的表達及機制的初步探討[D];復旦大學;2014年

4 吳朋;結直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學特性探究[D];復旦大學;2014年

5 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調控結直腸癌生物學行為的研究[D];山東大學;2015年

6 徐興遠;低分子肝素對結直腸癌患者預后的影響及相關機制的研究[D];復旦大學;2014年

7 梁洪亮;miR-454在結直腸癌中的功能及其作用機制[D];山東大學;2015年

8 金鵬;MMR蛋白在雌激素致結腸癌細胞凋亡中的作用及SEPT9檢測結直腸癌的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標志物研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

10 周智航;SEMA3F通過下調ASCL2-CXCR4軸而抑制結直腸癌轉移的分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 顏斐斐;術后結直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學;2009年

2 李斌;結直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學;2009年

3 葉建杰;慈溪市結直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學;2008年

4 趙波;結直腸癌危險因素及臨床流行病學特征的調查與分析[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

5 宋艷敏;PAQR3基因甲基化水平與結直腸癌關系的研究[D];河北大學;2015年

6 黎江;Oct4B1在結直腸癌干細胞中的表達及其與Twist的相關性研究[D];遵義醫(yī)學院;2015年

7 楊文婷;PD-L1、SIRT1在結直腸癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學;2015年

8 羅佳;二代測序分析散發(fā)性結直腸癌和息肉的基因突變[D];福建醫(yī)科大學;2015年

9 崔慧鵬;精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1）高表達與結直腸癌惡性進展的相關性研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

10 崔娟娟;p53和nm23在結直腸癌中的表達及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學;2014年

，

本文編號：1317536