本文關鍵詞：離斷下牙槽神經(jīng)對大鼠實驗性牙周炎的影響研究

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【摘要】：牙周炎是有著廣泛罹患人群的口腔疾病,是成人失牙的主要原因。牙周致病菌是牙周炎發(fā)生的始動因素,沒有牙周致病菌不會發(fā)生牙周炎,然而在牙周致病菌普遍存在、口腔衛(wèi)生狀況相似的情況下,不同個體牙周病損的發(fā)生和進展存在很大差異,這就提示宿主因素在牙周炎的發(fā)生發(fā)展過程中同樣發(fā)揮重要作用。致病菌的存在是牙周炎發(fā)生的必要條件,宿主易感性則影響宿主在應對細菌免疫應答過程中的強度,從而導致不同程度的牙周組織破壞。牙周組織炎癥進展及組織破壞的范圍很大程度上取決于宿主對牙周致病菌及其代謝產(chǎn)物的免疫炎癥反應。神經(jīng)因素是宿主因素的重要組成部分,神經(jīng)可以通過分布在組織器官中的疼痛感受器、刺激感受器來感受疼痛、壓力,發(fā)揮感知功能。神經(jīng)也可以通過分泌神經(jīng)遞質和神經(jīng)肽來調(diào)控組織損傷后的局部炎癥反應,影響損傷組織的修復愈合。神經(jīng)因素其在牙周炎發(fā)生進展中是否發(fā)揮重要調(diào)控作用及相關機制值得進一步的研究證實。重度牙周病程中,牙周支持組織大量破壞,其中的神經(jīng)束亦會受累,導致部分病變組織區(qū)域會處于失神經(jīng)支配的情況,失神經(jīng)支配后病變區(qū)的炎癥進程如何發(fā)展,神經(jīng)及其分泌的功能性神經(jīng)肽在牙周組織炎癥進程中發(fā)揮何種作用亟待深入研究和闡釋。失神經(jīng)支配亦是神經(jīng)支配研究的有力補充。絲線誘導的大鼠實驗性牙周炎在牙周炎研究中應用廣泛。單純使用絲線或者正畸結扎絲結扎誘導的牙周炎一般需要較長的試驗周期才能觀察到明顯牙槽骨吸收。絲線配合牙周致病菌則能夠更快的觀察到牙周炎癥和骨質吸收的發(fā)生,但是細菌的培養(yǎng)或購買又會增加實驗成本和操作的難度,不同批次給藥又會存在一致性問題。我們使用縫合絲線嚴密纏繞包裹正畸結扎絲改良結扎誘導的大鼠牙周炎模型。本研究建立離斷下牙槽神經(jīng)的失神經(jīng)支配和結扎誘導的大鼠牙周炎的聯(lián)合模型。觀察失下牙槽神經(jīng)支配對大鼠牙周炎的發(fā)生、進展的影響,并探討其可能機制。方法:將縫合絲線嚴密纏繞包裹4-0正畸結扎絲,分離牙齦之后牢固結扎于下頜第一磨牙牙頸部誘導大鼠實驗性牙周炎同時離斷同側下牙槽神經(jīng)。選擇成年雄性Wistar大鼠,隨機分為4組:絲線加鋼絲結扎組(L),單純離斷神經(jīng)組(D),絲線加鋼絲結扎+離斷神經(jīng)組(LD),正常鼠(N)作為對照(n=8)。絲線加鋼絲結扎組(L)和絲線加鋼絲結扎+離斷神經(jīng)組(LD)的大鼠行側下頜第一磨牙絲線加鋼絲結扎誘導實驗性牙周炎;單純離斷神經(jīng)組(D)和絲線加鋼絲結扎+離斷神經(jīng)組(LD)的大鼠同時行右側下牙槽神經(jīng)離斷術。術后4周取材,分離下頜骨行Micro-CT檢查,定量評價牙槽骨吸收情況,分析骨組織面積百分比(percent bone area)、骨小梁厚度(trabecular thickness),骨小梁數(shù)量(trabecular number),骨礦化密度(bone mineral density)等骨生物學參數(shù)。10%EDTA脫鈣后制備石蠟切片,組織學觀察牙周組織破壞情況;TRAP染色觀察破骨細胞并計數(shù);天狼星紅染色觀察牙齦組織膠原纖維的走向和破壞情況。分離新鮮下頜第一磨牙的牙齦組織,放射免疫法檢測牙齦組織中IL-1β、TNF-α、OPG和sRANKL表達,計算OPG/sRANKL比例;提取牙齦組織核蛋白Western bloting檢測NF-κB p65和I κ B α磷酸化。結果:使用縫合絲線嚴密纏繞包裹4-0正畸結扎絲,實驗周期內(nèi)可以牢固結扎于下頜第一磨牙牙頸部,在術后4周即可誘發(fā)牙齦組織的炎癥和牙槽骨的少量吸收。離斷下牙槽神經(jīng)可以顯著加重結扎誘導的大鼠實驗性牙周炎。絲線加鋼絲結扎+離斷神經(jīng)組(LD)下頜第一磨牙的牙槽骨吸收顯著高于絲線加鋼絲結扎組。離斷神經(jīng)組和正常組均未觀察到牙槽骨的吸收。Micro-CT分析骨特異性參數(shù)顯示:絲線加鋼絲結扎+離斷神經(jīng)組(LD)的骨組織面積百分比(percent bone area)、骨小梁厚度(trabecular thickness),骨礦化密度(bone mineral density),較絲線結扎組均顯著降低。絲線加鋼絲結扎+離斷神經(jīng)組(LD)中TRAP染色陽性細胞顯著增加,牙齦組織中IL-1β and TNF-α的表達顯著增加,膠原纖維破壞更加明顯。機制研究發(fā)現(xiàn),離斷下牙槽神經(jīng)可以加劇絲線加鋼絲結扎誘導的NF-κ B p65和I κ B α的磷酸化,并下調(diào)OPG/sRANKL比值。單純離斷下牙槽神經(jīng)組較正常組亦可以觀察到下調(diào)的OPG/sRANKL比值。結論:離斷下槽神經(jīng)神經(jīng)顯著加劇結扎誘導的大鼠實驗性牙周炎。NF-κB信號通路和OPG/RANKL通路均參與這一過程。大鼠離斷下牙槽神經(jīng)和絲線加鋼絲結扎誘導牙周炎的聯(lián)合實驗模型,可以提供一個良好的實驗平臺,進一步觀察神經(jīng)支配及其分泌的各類功能肽在牙周炎的發(fā)生、進展過程中表達變化,從而遴選神經(jīng)相關因子來調(diào)控牙周炎癥,促進牙周組織再生。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R781.4

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