本文關(guān)鍵詞：蟲草益腎顆粒對高糖培養(yǎng)下人腎小球系膜細胞增殖及氧化應(yīng)激的影響

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【摘要】：目的:觀察蟲草益腎顆粒對高糖培養(yǎng)下人腎小球系膜細胞(Human mesangial cells,HMCs)增殖和氧化應(yīng)激的影響,探討蟲草益腎顆粒對人腎小球系膜細胞的作用機制。方法:依據(jù)血清藥理學,制備蟲草益腎顆粒和福辛普利的含藥血清,然后進行藥物血清干預HMCs的研究。體外培養(yǎng)HMCs,隨機分為正常組、高糖組、福辛普利組及蟲草益腎顆粒低、中、高劑量組6組。培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后收集細胞和細胞上清液。采用CCK-8法檢測24 h、48 h、72 h時HMCs增殖情況;采用流式細胞術(shù)檢測48 h、72 h時細胞內(nèi)活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)水平;采用比色法檢測 48 h、72 h 時 HMCs上清液中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、過氧化氫酶(Catalase,CAT)活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量的變化;Real-time PCR 檢測48 h、72 h時NADPH氧化酶亞型p22 phox和p47 phox的mRNA表達;Western Blot檢測48 h、72 h時p22 phox和p47 phox的蛋白表達情況。結(jié)果:1.CCK-8法檢測細胞增殖情況:與正常組比較,高糖(30 mmol/L)條件下,HMCs在24 h、48 h、72 h三個時間點均有細胞增殖的效應(yīng),差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。48h和72h時,與高糖組比較,福辛普利組與蟲草益腎顆粒低、中、高劑量組均出現(xiàn)了對HMCs增殖的抑制作用,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。2.各組HMCs ROS表達情況比較:流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,同時間,與正常組比較,高糖組的HMCs內(nèi)ROS生成量明顯增多(P0.05);與高糖組比較,經(jīng)藥物干預后的福辛普利組、蟲草低、中、高劑量組細胞內(nèi)ROS生成量明顯減少,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),提示各治療組均有療效。3.各組細胞上清液中的SOD、GSH-PX、CAT活力和MDA含量的變化:同時間比較,高糖刺激后SOD、GSH-PX、CAT活力顯著下降,MDA含量明顯升高(P0.01或P0.05),經(jīng)福辛普利和蟲草益腎顆粒含藥血清干預后,同時間,與高糖組比較,SOD、GSH-PX、CAT活力不同程度升高,MDA含量下降(P0.01或P0.05)。4.各組人腎小球系膜細胞p22 phox和p47 phox mRNA表達情況比較:同時間,與正常組比較,高糖組p22 phox和p47 phox mRNA表達水平明顯升高(P0.01);同時間,與高糖組比較,各治療組均可不同程度地下調(diào) p22 phox 和 p47 phox mRNA 表達(P0.01)。5.各組人腎小球系膜細胞p22 phox和p47 phox蛋白表達量的比較:正常組HMCs中可低水平地表達p22 phox和p47 phox蛋白,與同時間點的正常組比較,高糖組中的p22 phox和p47 phox蛋白表達量明顯增多(P0.01);同時間,與高糖組比較,各治療組的p22 phox和p47 phox的蛋白表達量均下調(diào)(P0.01)。結(jié)論:1.高糖刺激下,可促進HMCs的增殖,使活性氧簇ROS生成增多,降低SOD、GSH-PX、CAT活力、提高MDA含量,上調(diào)p22phox和p47phox mRNA及蛋白表達水平,從而加劇氧化應(yīng)激反應(yīng)。2.蟲草益腎顆粒對高糖培養(yǎng)下HMCs的增殖有抑制作用。3.蟲草益腎顆�？赡芡ㄟ^降低活性氧簇ROS的生成、提高酶抗氧化系統(tǒng)中SOD、GSH-PX、CAT活力、降低MDA的含量、下調(diào)p22phox和p47 phox mRNA及蛋白表達水平等途徑來干預腎小球系膜細胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)。4.抑制HMCs的增殖和氧化應(yīng)激反應(yīng)可能是蟲草益腎顆粒防治DKD,保護腎臟,延緩疾病進展的作用機制之一,同時該中藥復方的治療作用具有一定時間和劑量效應(yīng)依賴性。
【學位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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