本文關(guān)鍵詞：丹紅注射液抗腦缺血作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： 丹紅注射液 蛋白網(wǎng)絡(luò) 氨基酸代謝 神經(jīng)凋亡 血腦屏障 腦缺血

【摘要】：研究背景腦卒中,屬于中醫(yī)“中風病”范疇,具有三高(高發(fā)病率、高致殘率、高致死率)特點。根據(jù)病因不同可分為缺血性與出血性,在我國以缺血性腦卒中為主,提高中風治療與預防水平,降低“三高”是其當務(wù)之急,也是國內(nèi)外研究的熱點和難點。缺血性腦卒中病理過程是一個多因素、多環(huán)節(jié)、多途徑損傷的酶促級聯(lián)反應(yīng),其具有復雜的網(wǎng)絡(luò)分子機制。中醫(yī)認為,腦卒中之證有風、火、痰、瘀、虛之別,但瘀阻腦絡(luò)是貫穿中風病始終的病理核心,故中醫(yī)常用活血化瘀法治療缺血性腦卒中。研究顯示,活血化瘀方可改善缺血瀑布級聯(lián)反應(yīng)的初始即缺血區(qū)的血液供應(yīng),但在臨床上缺血性腦卒中治療目標不僅在于對缺血區(qū)血液供應(yīng)的改善,同時也要阻斷腦缺血后“瀑布級聯(lián)反應(yīng)”分子鏈。揭示活血化瘀方在腦缺血瀑布級聯(lián)反應(yīng)中的作用及抗腦缺血分子網(wǎng)絡(luò)機制,不僅有助于中醫(yī)活血化瘀法科學內(nèi)涵的闡釋,亦為活血化瘀方在臨床防治腦缺血提供了理論依據(jù)�；诖�,本研究以活血化瘀代表方-丹紅方(丹紅注射液)作為切入點,從腦缺血病理反應(yīng)不同環(huán)節(jié)結(jié)合蛋白質(zhì)及代謝組學技術(shù),綜合闡釋丹紅注射液抗腦缺血的作用特點及相關(guān)機制,以期從分子層面闡釋活血化瘀方防治腦缺血作用機理。該研究方向獲得了國家自然基金重點項目的資助(No.81330086),本課題屬于該項目的研究內(nèi)容之一。研究內(nèi)容本研究分為兩個方面,文獻綜述與實驗研究。文獻綜述:系統(tǒng)回顧了腦缺血病理機制及與其相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路,并對丹紅注射液臨床療效、藥理作用及其相關(guān)機制進行了梳理,以期為后期實驗研究提供方向和參考。實驗研究:本研究在對丹參、紅花藥對配伍特點以及丹紅注射液抗腦缺血“量-效”,“時-效”研究的基礎(chǔ)上,從腦缺血病理過程中相關(guān)環(huán)節(jié)考察丹紅注射液抗腦缺血的作用,并采用組學技術(shù),從蛋白質(zhì)及氨基酸代謝層面,綜合闡釋丹紅注射液抗腦缺血作用機理,以期為腦缺血現(xiàn)代研究及活血化瘀方防治腦缺血提供深層次認識。實驗內(nèi)容共包括三個部分:1.基于數(shù)據(jù)挖掘的丹參、紅花藥對配伍特點研究:基于《中醫(yī)方劑大辭典》及《中藥成方制劑》數(shù)據(jù)庫,應(yīng)用“中醫(yī)傳承輔助平臺”系統(tǒng),提取含丹參、紅花藥對的方劑,運用軟件的關(guān)聯(lián)規(guī)則,改進的互信息法等數(shù)據(jù)挖掘方法,客觀地分析丹參、紅花藥對的組方規(guī)律和特點,以期更好地理解丹紅注射液配伍的原理和適應(yīng)證,為后續(xù)相關(guān)實驗研究提供理論支持。2.基于腦缺血病理反應(yīng)相關(guān)環(huán)節(jié)的丹紅注射液抗腦缺血作用研究:通過不同劑量丹紅注射液干預大鼠腦缺血模型,在篩選出最佳劑量的基礎(chǔ)上,觀察丹紅注射液對12h、24h腦缺血的干預作用,并從神經(jīng)元凋亡及血腦屏障方面考察丹紅注射液在腦缺血病理級聯(lián)反應(yīng)中不同環(huán)節(jié)的保護作用,從而初步明確丹紅注射液抗腦缺血的作用特點,為后期機制研究奠定基礎(chǔ)。3.基于組學技術(shù)的丹紅注射液抗腦缺血作用機制研究:在明確丹紅注射液對腦缺血不同環(huán)節(jié)具有保護作用的基礎(chǔ)上,利用蛋白質(zhì)組學技術(shù),考察丹紅注射液對腦缺血狀態(tài)下海馬組織中蛋白質(zhì)譜的影響,通過數(shù)據(jù)分析和挖掘,篩選出具有特征變化的相關(guān)蛋白以及這些蛋白可能富集到的通路,并對相關(guān)蛋白質(zhì)進行驗證;同時利用靶標代謝組學技術(shù),進一步考察了其對腦缺血狀態(tài)下大腦皮層相關(guān)氨基酸代謝變化情況,進而從不同層面綜合闡釋丹紅注射液對腦缺血的保護作用機制。實驗結(jié)果1.基于數(shù)據(jù)挖掘的丹參、紅花藥對配伍特點研究結(jié)果共納入方劑39首、中成藥74種,其中發(fā)現(xiàn)丹參、紅花常與活血、行氣之品聯(lián)用,且絕大部分藥物歸心、肝經(jīng),主以胸痹、真心痛、心悸、中風、瘀血疼痛證、婦科病等為治療病證。2.基于腦缺血病理反應(yīng)相關(guān)環(huán)節(jié)的丹紅注射液抗腦缺血作用特點研究(1)丹紅注射液抗腦缺血量-效、時-效研究不同劑量(1.44、0.72、0.36、0.18mL/kg)丹紅注射液干預腦缺血模型大鼠,以0.72mL/kg效果最佳,且0.72 mL/kg、0.36 mL/kg、0.18 mL/kg劑量之間呈現(xiàn)量效關(guān)系,0.72mL/kg丹紅注射液抗腦缺血作用24h療效優(yōu)于12h。(2)丹紅注射液對腦缺血大鼠血腦屏障通透性的影響丹紅注射液除可改善腦缺血大鼠神經(jīng)功能評分、腦梗死體積外,還可以減輕腦水腫和血腦屏障崩解程度,并對腦缺血狀態(tài)下腦組織、心肌組織中的α-actinin蛋白含量均有調(diào)整作用,提示α-actinin蛋白變化可能是丹紅注射液治療腦病、心病的共同分子生物學基礎(chǔ)之一。(3)丹紅注射液對腦缺血大鼠神經(jīng)凋亡的影響腦缺血后大鼠海馬組織表現(xiàn)出神經(jīng)細胞凋亡,缺血誘導了 Apaf-1及其下游分子Caspase-9、Caspase-3的表達,并且增加Bax表達,降低Bcl-2的表達,從而降低Bcl-2/Bax比值;丹紅注射液可顯著抑制Apaf-1及Caspase-9、Caspase-3的激活,逆轉(zhuǎn)Bax、Bcl-2蛋白表達以及Bcl-2/Bax比值的變化。提示丹紅注射液可通過抑制腦缺血大鼠海馬組織Apaf-1的表達,從而抑制Caspase信號通路活性來發(fā)揮抗凋亡的作用,使Caspase介導的缺血核心周邊半暗帶細胞凋亡擴展減慢。3.基于組學技術(shù)的丹紅注射液抗腦缺血作用機制研究(1)基于靶標代謝組學的丹紅注射液抗腦缺血作用研究研究顯示:腦缺血大鼠供能氨基酸(Val、Ile、Leu、Lys)和神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸(Gln、Glu、Gly、Ser、Tau、Tyr、Phe)變化顯著,丹紅注射液可選擇性調(diào)節(jié)腦中供能氨基酸的異常,降低Glu含量,并抑制Gln、Gly、Ser對其興奮毒性的放大。提示丹紅注射液可通過改善腦能量代謝和神經(jīng)遞質(zhì)氨基酸的釋放/合成,進而發(fā)揮腦保護作用。(2)基于蛋白質(zhì)組學的丹紅注射液抗腦缺血作用機制研究以蛋白質(zhì)組學為研究手段,發(fā)現(xiàn)與丹紅注射液抗腦缺血作用顯著相關(guān)的蛋白有12個(Gsk-3β、Cnsklg1、Gpc4、Ctbp2、Acta2、Apc、Akt1、Sos1、Prkaa1、Eef2、Flnc、Rap1a),主要富集于WNT信號通路、AMPK信號通路以及MAPK信號通路,并對其蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)關(guān)系進行分析,獲得以Gsk-3β和Akt1為中心節(jié)點的與其它潛在靶標蛋白共同組成的蛋白網(wǎng)絡(luò),結(jié)合驗證實驗發(fā)現(xiàn)除Ctbp2外其余11個蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果與質(zhì)譜結(jié)果表達趨勢一致,且Gsk-3β蛋白抑制劑阻斷實驗亦證實了丹紅注射液參與了候選蛋白質(zhì)在腦缺血損傷海馬組織中的表達變化。綜上所述,通過本研究初步揭示了丹紅注射液抗腦缺血的作用特點、蛋白網(wǎng)絡(luò)、相關(guān)信號通路以及氨基酸代謝情況,從而系統(tǒng)闡釋活血化瘀方(丹紅注射液)抗腦缺血的作用及其機制;另外,所獲得的蛋白網(wǎng)絡(luò)可能是腦缺血病理機制的核心單元,進而為認識和防治腦缺血提供參考和依據(jù)。本研究創(chuàng)新點1.揭示了丹紅注射液抗腦缺血作用與改善能量代謝、神經(jīng)遞質(zhì)氨基酸的釋放/合成,抑制神經(jīng)元凋亡以及保護血腦屏障有關(guān);2.揭示了丹紅注射液抗腦缺血作用相關(guān)的由12個蛋白組成的網(wǎng)絡(luò),涉及三條信號通路,即WNT信號通路、AMPK信號通路和MAPK信號通路。
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔一然;劉欣;李德鳳;張毅;楊洪軍;;活血化瘀方對腦缺血大鼠海馬組織Apaf-1/Caspase信號通路的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2017年05期

2 劉寧;劉昊;黃宇玲;白華;劉鐵楠;王志軍;;ACEI聯(lián)合丹紅注射液對慢性心衰合并心律失常的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2017年03期

3 崔一然;李德鳳;張毅;劉欣;楊洪軍;;腦缺血大鼠海馬和心肌組織α-actinin蛋白表達及“腦心同治”方的干預作用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2017年02期

4 趙帥;曾靖;蔡海榮;劉煒楓;張為章;陳伯鈞;;丹紅注射液對動脈粥樣硬化家兔內(nèi)皮功能及肝X受體mRNA的影響[J];廣州中醫(yī)藥大學學報;2017年01期

5 殷英;衛(wèi)國;王艷華;牟菲;段佳林;郭超;關(guān)月;朱艷榮;奚苗苗;文愛東;;丹紅注射液促進心梗模型大鼠缺血心肌血管新生[J];中成藥;2016年09期

6 郭俊林;張志明;;丹紅注射液治療慢性腦供血不足的Meta分析[J];西部中醫(yī)藥;2016年07期

7 萬鴻平;鄧小容;杜敏;柯偉;;丹紅注射液對急性進展性腦梗死病人Hcy、hs-CRP的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2016年13期

8 何晶;趙勤華;王嵐;宮素崗;劉錦銘;趙步長;;丹紅注射液治療慢性肺源性心臟病患者30例臨床觀察[J];中醫(yī)臨床研究;2016年18期

9 王洲羿;肖展翅;周剛;李鋼;高聚;倪小紅;;丹紅注射液治療血管性癡呆療效初步觀察及評估[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2016年14期

10 肖怡;李永琦;李紅娟;吳穎潔;;丹紅注射液治療在冠心病的臨床療效[J];昆明醫(yī)科大學學報;2016年04期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周丹;以藥效差示血清色譜法研究丹紅注射液治療大鼠心肌缺血/再灌注損傷的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

，

本文編號：1293225