本文關鍵詞：USF1調控TGFβ信號通路對黑色素瘤發(fā)生發(fā)展的影響

  更多相關文章： 黑色素瘤 1205-Lu細胞 上游刺激因子1 轉化生長因子β 遷移

【摘要】：背景:上游刺激因子1(USF1)是一種多功能的轉錄因子,在真核生物中廣泛表達,它在糖脂代謝,細胞增殖以及黑素沉積中均起重要作用。近來研究發(fā)現(xiàn)它可以激活轉化生長因子-β信號通路。而轉化生長因子-β信號通路與黑色素瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力有密切關系。但是,USF1在黑色素瘤中的作用不詳。目的:探討USF1在黑色素瘤中的表達以及USF1對黑色素瘤發(fā)生發(fā)展的影響及其機制。方法:采用實時定量PCR技術和Western blotting技術檢測USF1在正常人黑素細胞PIG1和黑色素瘤細胞1205-Lu、DO4、WM3211、WM278中的表達情況;高倍光學顯微鏡觀察在轉染USF1后的1205-Lu細胞形態(tài)變化;細胞遷移實驗檢測轉染USF1對1205-Lu細胞遷移的影響;為分析轉染USF1對1205-Lu細胞上皮間質化的影響,采用實時定量PCR技術和Western blotting技術檢測轉染USF1后1205-Lu細胞E-cad、α-SMA、Vi和FN表達情況;為進一步分析USF1對黑色素瘤發(fā)生發(fā)展的影響,采用qRT-PCR和Western blotting檢測轉染USF1后1205-Lu細胞中(轉化生長因子β)TGF-β、Smad2和α-SMA表達情況,以及si RNA干擾USF1后1205-Lu細胞中TGF-β、Smad2和α-SMA表達情況;最后采用Western blotting檢測單獨或聯(lián)合轉染si-RNA和TGF-β后1205-Lu細胞中Smad2、E-cad、α-SMA、Vi和FN的表達情況,以及高倍光學顯微鏡觀察在單獨或聯(lián)合轉染si-RNA和TGF-β后的1205-Lu細胞形態(tài)變化。結果:(1)USF1在1205-Lu、DO4、WM3211和WM278細胞的m RNA和蛋白相對表達量均明顯高于PIG1細胞,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。其中USF1在1205-Lu細胞中的表達量最高。(2)在轉染USF1后,1205-Lu細胞形態(tài)變長,呈梭狀,與對照組相比變化明顯。同時在轉染USF1后,1205-Lu細胞遷移能力與對照組相比明顯增強。(3)在1205-Lu細胞轉染USF1 48小時后,α-SMA、Vi和FN的m RNA和蛋白相對表達量均明顯高于未轉染USF1的對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。E-cad在1205-Lu細胞轉染USF1 48小時后的m RNA和蛋白相對表達量明顯低于未轉染USF1的對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)在1205-Lu細胞轉染USF1 48小時后,TGF-β、Smad2和α-SMA的m RNA和蛋白相對表達量均明顯高于未轉染USF1的對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。同時在1205-Lu細胞轉染si-USF1 48小時后,USF1、TGF-β、Smad2和α-SMA的m RNA和蛋白相對表達量均顯著低于未轉染si-USF1的對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。(5)采用si RNA干擾USF1 48小時后,Smad2、α-SMA和FN的表達明顯低于未轉染si-USF1和TGFβ的對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05);在轉染TGFβ48小時后,Smad2、α-SMA、Vi和FN的表達明顯高于未轉染si-USF1和TGFβ的對照組和轉染si-USF1和TGFβ組,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05);同時在轉染TGFβ組中E-cad的表達明顯低于未轉染si-USF1和TGFβ的對照組和轉染si-USF1和TGFβ組,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。在轉染si-USF1和TGFβ48小時后,Smad2、E-cad、α-SMA、Vi和FN表達和未轉染si-USF1和TGFβ組比較無明顯差異(P0.05)�！�6在轉染TGFβ后,1205-Lu細胞形態(tài)變長,呈梭狀,與未轉染si-USF1和TGFβ的對照組和轉染si-USF1和TGFβ組相比變化明顯,而轉染si-USF1和TGFβ后,能夠明顯逆轉TGFβ誘導的細胞形態(tài)學變化。結論:USF1在黑色素瘤細胞中存在明顯高表達,同時USF1能夠通過激活TGFβ信號通路促進黑色素瘤細胞發(fā)生上皮間質轉化和遷移,USF1可能成為一個新的黑色素瘤治療靶點。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5

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本文編號：1260058