發(fā)布時間：2017-10-17 22:33

  本文關(guān)鍵詞：丙咪嗪對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的保護作用

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【摘要】：研究背景：青光眼中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的變性是不可逆的,嚴(yán)重者可能造成永久性失明。目前視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞及其纖維的進(jìn)行性退變是目前公認(rèn)的青光眼的病理基礎(chǔ)。大量研究表明,細(xì)胞凋亡是神經(jīng)節(jié)細(xì)胞死亡的主要途徑。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞在視覺信息的接收、加工以及傳導(dǎo)中有重要的作用,了解RGC變性的潛在機制,尋求可行的治療方案,以保護RGC損傷是學(xué)者一直以來致力研究的方向。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡是視神經(jīng)損害類疾病最后的通路,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的改變與某些神經(jīng)組織退行性病變緊密相關(guān),視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷可導(dǎo)致視力的不可逆損傷。許多眼病患者視力喪失都是這個原因,目前世界上還沒有有效的治療辦法。炎癥和神經(jīng)毒素、外傷、高眼壓等均可造成視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞不可逆的損傷,使其發(fā)生凋亡。目前視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡機制未完全清楚,可能與生化調(diào)節(jié)、基因調(diào)控等有關(guān)。在最近十年中,已經(jīng)表明許多分子途徑參與了RGC變性的進(jìn)程,并施加了一定的保護作用,如胰島素樣生長因子1和肝細(xì)胞生長因子。在許多所識別的分子途徑中,神經(jīng)營養(yǎng)蛋白調(diào)節(jié)的信號傳導(dǎo)途徑,包括腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)和它的酪氨酸激酶受體B(TrkB),被證明對不同類型的感覺神經(jīng)元包括視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活、分化和再生至關(guān)重要。三環(huán)類抗抑郁藥,包括阿米替林和丙咪嗪(IMIP),已經(jīng)顯示出在許多神經(jīng)元系統(tǒng)刺激BDNF／TrkB的途徑,目前比較確定的是：BDNF通過TrkB信號傳導(dǎo)系統(tǒng)在抗抑郁藥作用機制中起到重要作用。研究表明,不同抗抑郁藥治療一段時間后都可引起腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子蛋白增加。另外,所有抗抑郁藥均被發(fā)現(xiàn)可以增加TrkB受體磷酸化,因此我們認(rèn)為,抗抑郁藥作用機制可能是誘導(dǎo)TrkB受體活性。但抗抑郁藥是否對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞產(chǎn)生BDNF／TrkB樣的神經(jīng)保護目前尚無定論。丙咪嗪是三環(huán)類抗抑郁藥,有實驗證實,它可以顯著減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡,在海馬中顯示丙咪嗪(加氯胺酮)增加腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的產(chǎn)生和蛋白激酶C磷酸化來修改運動活性。在皮層神經(jīng)干細(xì)胞,丙咪嗪同樣通過激活腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子信號通路保護神經(jīng)元免于炎癥誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。此外,在嗅球,使用丙咪嗪長期治療可誘導(dǎo)過度腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的產(chǎn)生,增加對傷后大腦的可塑性。因此,本研究觀察三環(huán)類抗抑郁藥丙咪嗪是否可通過激活TrkB途徑減少視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡,旨在為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷可能的保護治療方案提供理論依據(jù)。本研究分以下三個部分進(jìn)行。第一部分丙咪嗪對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞TrkB信號通路的作用目的：觀察Imip對RGC-5細(xì)胞中TrkB信號通路的影響。方法：體外培養(yǎng)RGC-5細(xì)胞株,分為對照組、0.5|amol/L Imip組和5μmol/L Imip組,分別給予不同方法處理。對照組：不進(jìn)行處理；0.5μmol/L Imip組：加入0.5μmol/L 的 Imip實驗溶液培養(yǎng)12h; 5μmol/L Imip組：加入5μmol/L 的 Imip實驗溶液培養(yǎng)12h。以Western印跡法進(jìn)行分析,觀察TrkB和ERK1-2磷酸化程度。結(jié)果：對照組與0.5μmol/L Imip組相比,二者pTrkB/TrkB和pERKl-2/ERK1-2均相似,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與對照組和0.5μmol/L Imip組相比,5μmol/L Imip組的pTrkB/TrkB和pERKl-2/ ERK1-2均顯著增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：高濃度的Imip(5μmol/L)能通過磷酸化RGC-5細(xì)胞的TrkB和ERK1-2激活TrkB信號通路。第二部分丙咪嗪對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的保護作用目的：觀察Imip對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的RGC凋亡的保護作用。方法：體外培養(yǎng)RGC-5細(xì)胞株,分為對照組、H2O2損傷組和Imip干預(yù)組,分別給予不同方法處理。對照組：不進(jìn)行處理；H2O2損傷組：加入H2O2培養(yǎng)48h使RGC-5細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；Imip干預(yù)組：加入H2O2之前加入μmol/L的Imip實驗溶液預(yù)處理30min,后續(xù)操作同H2O2損傷組處理方法進(jìn)行處理。采用原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL)檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：與對照組相比,H2O2損傷組和Imip干預(yù)組的細(xì)胞凋亡率均顯著上升,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05); Imip干預(yù)組的細(xì)胞凋亡率顯著低于H2O2損傷組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：Imip預(yù)處理能顯著減少氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的RGC-5細(xì)胞凋亡。第三部分丙咪嗪對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡保護作用機制目的：探討丙咪嗪對RGC細(xì)胞凋亡的保護作用是否與TrkB通路有關(guān)。方法：體外培養(yǎng)RGC-5細(xì)胞株,分為對照組和TrkB阻斷組,兩組均以5μmol/L的Imip預(yù)處理30min,加入H2O2處理1h后,TrkB阻斷組加入TrkB功能性抗體阻斷劑TrkB-IgG,阻斷TrkB信號通路的激活,對照組中加入等效非特異性對照抗體NC-IgG作為對照。47h后,TUNEL法檢測RGC-5的細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：TrkB阻斷組細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組,兩組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：Imip可能通過激活TrkB信號通路發(fā)揮細(xì)胞凋亡保護作用。
【關(guān)鍵詞】：丙咪嗪 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié) 氧化應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 TrkB 保護作用
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1;R775
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 符號說明15-16
• 前言16-18
• 第一部分 丙咪嗪對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞TrkB信號通路的作用18-23
• 1 材料與方法18-19
• 2 結(jié)果19
• 3 討論19-22
• 4 小結(jié)22-23
• 第二部分 丙咪嗪對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的保護作用23-29
• 1 材料與方法23-25
• 2 結(jié)果25
• 3 討論25-28
• 4 小結(jié)28-29
• 第三部分 丙咪嗪對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡保護作用機制29-34
• 1 材料與方法29-31
• 2 結(jié)果31
• 3 討論31-33
• 4 小結(jié)33-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖表35-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 綜述45-68
• 參考文獻(xiàn)58-68
• 致謝68-70
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文70-71
• 外文論文71-104
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表104

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李穎;張秀麗;汪卓;;人參皂苷Rb1對H_2O_2損傷RGC-5細(xì)胞的保護作用及機制探討[J];山東醫(yī)藥;2014年47期

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本文編號：1051423