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DHHC蛋白家族成員(ZDHHC16、ZDHHC17)在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的作用及其機制研究

發(fā)布時間:2017-10-14 20:15

  本文關(guān)鍵詞:DHHC蛋白家族成員(ZDHHC16、ZDHHC17)在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的作用及其機制研究


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【摘要】:研究報道證實,細胞內(nèi)的前體蛋白在翻譯裝配完成后,需要進行一系列的修飾才能成為具備生物學活性的成熟蛋白,執(zhí)行生命活動功能。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的主要方式包括:泛素化修飾、磷酸化修飾、糖基化修飾和脂質(zhì)化修飾等。其中,脂質(zhì)化修飾對于蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)的運輸,分選以及功能的完成至關(guān)重要。通過脂質(zhì)化修飾后的成熟蛋白疏水性增高,與質(zhì)膜系統(tǒng)的脂質(zhì)雙分子層的融合性增強,促進蛋白質(zhì)的亞細胞定位和生命活動的執(zhí)行。目前已知的脂質(zhì)化修飾方式約有五種,蛋白的棕櫚酰化修飾是最近幾十年剛剛發(fā)現(xiàn)的一種重要的脂質(zhì)化修飾方式。棕櫚酰化修飾的過程是指將16碳的飽和脂肪酸-棕櫚酸,通過特定的化學鍵連接到被修飾蛋白特定的半胱氨酸位點上。目前從酵母到哺乳動物中篩選得到的可被棕櫚酰化修飾的蛋白已達上百種。目前,最為常見的棕櫚酰化修飾類型是S-型,其主要通過硫脂鍵連接棕櫚酸和被修飾蛋白的半胱氨酸位點。與其他四種脂質(zhì)化修飾方式不同,棕櫚酰化修飾的過程具有動態(tài)可逆性,可通過棕櫚;プ貦磅;^程,動態(tài)的調(diào)節(jié)被修飾蛋白的活性,從而調(diào)控被修飾蛋白的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運、靶向融合、下游信號轉(zhuǎn)導等,繼而影響細胞的生命活動。雖然蛋白棕櫚酰化修飾在四十多年前已被發(fā)現(xiàn),然而最近十幾年棕櫚;揎椕傅陌l(fā)現(xiàn),才使得對于該種修飾方式和被修飾蛋白的研究取得了突破性的進展。最初,一個重要的發(fā)現(xiàn)來自于對酵母的遺傳分析,人們在釀酒酵母中首次發(fā)現(xiàn)了包括Erf2和Akr1在內(nèi)的八種基因編碼的與棕櫚;揎椨嘘P(guān)的蛋白,并且提出了棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(Palmitoyltransferases, PATs)家族的存在,這一類蛋白的結(jié)構(gòu)具有共同的特征,都含有特征性的鋅指樣(Zinc finger)-DHHC (Aspartate-histidine-histidine-cysteine)-CRD (Cysteine rich domain)結(jié)構(gòu)域,因此這類蛋白又被稱為DHHC蛋白家族,該家族的大多數(shù)成員具有棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性。2004年,Bredt研究小組完成了人類與小鼠基因組23種DHHC蛋白基因的克隆和鑒定,與此同時,最近發(fā)展的蛋白質(zhì)組學研究和影像學技術(shù)的進步,加速了人們對這類蛋白功能的認識。近年來研究工作表明,棕櫚酰化修飾主要發(fā)生在神經(jīng)蛋白,隨著對DHHC蛋白-底物研究的日益深入,該家族成員的功能越來越多的被揭示出來。目前認為,DHHC蛋白與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、生理活動以及某些神經(jīng)、精神類疾病的發(fā)生密切相關(guān)。首先,在神經(jīng)元的各種特化結(jié)構(gòu)如軸突,樹突等形成和生長的過程中,多種關(guān)鍵蛋白可被棕櫚;揎棥H缟窠(jīng)細胞粘附分子140 (neural cell adhesion molecule 140,NCAM140)和NCAM180的棕櫚;揎椨欣谄湓谏L錐細胞膜的脂筏上定位,這一過程對于調(diào)控神經(jīng)元軸突的生長是必不可少的,研究表明,ZDHHC7和ZDHHC3均表現(xiàn)出對NCAM的棕櫚酰化修飾活性。其次,在神經(jīng)干細胞的發(fā)育過程中,DHHC家族成員也發(fā)揮著重要的作用。參與神經(jīng)干細胞的生成,自我更新及命運決定過程的多條信號通路中的關(guān)鍵分子均可被棕櫚;揎,如WNT3a, SHH (Sonic hedgehog, SHH)等。最新的研究證實,flotillin-2可被ZDHHC5棕櫚;揎,繼而影響神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元方向的分化。另外,DHHC蛋白還參與調(diào)節(jié)神經(jīng)末梢突觸遞質(zhì)的釋放,從而調(diào)控突觸的功能。在神經(jīng)突觸的前后膜上富含可被棕櫚酰化修飾的蛋白,如突觸相關(guān)蛋白25 (Synaptosome associated protein-25, SNAP-25),突觸后致密蛋白95(Postsynaptic density protein 95)等,其棕櫚;降母淖儗⒂绊戇@些突觸蛋白在前后膜的定位。目前已證實ZDHHC2, ZDHHC3, ZDHHC15, ZDHHC17均可介導上述蛋白的棕櫚;揎,與上述蛋白在胞質(zhì)內(nèi)的分選,運輸和突觸前后膜上的靶向聚集密切相關(guān)。同時,近年來的研究工作也證實,DHHC蛋白成員可以介導突觸前后膜上多種離子通道亞基的棕櫚;揎,動態(tài)的調(diào)控離子通道的活性,調(diào)節(jié)神經(jīng)信號的傳導。最為重要的是,對于哺乳動物的基因遺傳學研究發(fā)現(xiàn),該家族成員與多種神經(jīng)退行性病變和與學習記憶密切相關(guān)的神經(jīng)精神類疾病有關(guān),如ZDHHC8的缺失可能誘發(fā)精神分裂癥;對伴X連鎖智力發(fā)育遲滯的一個家系進行遺傳多態(tài)性分析證實ZDHHC15的突變?nèi)笔е略摷膊〉陌l(fā)生;ZDHHC17與Huntington舞蹈癥的發(fā)病有關(guān);ZDHHC12參與調(diào)節(jié)APP的代謝,暗示ZDHHC12可能與Alzheimer'sdisease的發(fā)生密切相關(guān)。這些研究結(jié)果表明DHHC蛋白家族成員在神經(jīng)系統(tǒng)正常結(jié)構(gòu)的建立以及功能的完成過程中發(fā)揮著舉足輕重的作用,故而深入的研究這一類蛋白的功能不僅具有深刻的科學價值還具有很大的臨床指導意義。然而目前對這個家族蛋白功能的研究大多停留在體外水平,體內(nèi)研究尚且處在起步階段。雖然目前已經(jīng)建立了ZDHHC5,8,17基因敲除小鼠模型,但其在體內(nèi)的作用機制尚不明確。同時,小鼠的發(fā)育模式也不利于觀察棕櫚;饔迷谂咛グl(fā)育尤其是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用。而模式動物斑馬魚,發(fā)育迅速,遺傳背景清晰,并具有完全透明的身體,便于觀察和實驗操作,因此被廣泛的應用于神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的研究。本研究選取模式動物斑馬魚為實驗對象,利用反向遺傳學手段,研究DHHC家族成員在胚胎神經(jīng)發(fā)育中的作用及分子機制。第一部分ZDHHC16在神經(jīng)干細胞增殖中的作用及機制研究背景介紹ZDHHC16 (zinc finger DHHC-type containing 16)是哺乳動物23種DHHC蛋白中的第16號成員。該基因編碼的氨基酸序列高度保守。分析斑馬魚的zdhhcl6基因發(fā)現(xiàn),基因全1749bp,編碼一個由387個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。與其他成員相比,目前關(guān)于該基因的研究報道還比較少,且均停留于體外水平。研究表明,ZDHHC16可以激活c-Abl,參與調(diào)控細胞的凋亡程序。但是,ZDHHC16在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的功能目前尚無文獻報道。因此,實驗通過胚胎整封原位雜交(Whole-mount in situ hybridization, WISH)、免疫組化、聚合酶鏈式反應(Polymerase chain reaction, PCR)等方法研究抑制ZDHHC16表達后的胚胎表型,探討ZDHHC16在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的功能,明確ZDHHC16對神經(jīng)干細胞生命活動的調(diào)控作用,并深入研究ZDHHC16的棕櫚;揎椈钚詫ι窠(jīng)干細胞發(fā)育信號分子的作用。研究內(nèi)容首先,為了了解ZDHHC16在斑馬魚胚胎的時空表達模式,本研究設(shè)計合成了zdhhc16特異性引物和地高辛標記的RNA探針,利用RT-PCR技術(shù)和WISH技術(shù),檢測zdhhc16在斑馬魚胚胎發(fā)育各時期的表達以及分布情況。結(jié)果表明,zdhhc16為母源性表達,且在神經(jīng)板形成階段,表達水平顯著增高。同時,zdhhc16集中表達于斑馬魚胚胎神經(jīng)板的最前端,這一結(jié)果暗示該基因可能參與調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)特別是前腦的發(fā)育過程。為了研究ZDHHC16對斑馬魚神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響,本研究利用反向遺傳學手段,設(shè)計合成針對zdhhc16的Morpholino (MO),在斑馬魚胚胎發(fā)育至1-2細胞期時利用顯微注射技術(shù)注入胚胎,觀察表型。結(jié)果顯示,與對照組相比,抑制ZDHHC16表達后,在胚胎發(fā)育至10hpf (Hours post fertilization)時,神經(jīng)板前端表現(xiàn)出缺陷,至24hpf時胚胎呈現(xiàn)出端腦體積縮小甚至缺失的表型。48hpf胚胎石蠟切片HE染色結(jié)果也證實了這一結(jié)果。為了進一步揭示ZDHHC16對胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育,尤其是明確其在端腦發(fā)育中的作用,本研究利用原位雜交技術(shù),檢測多個標志基因的表達變化。結(jié)果顯示,抑制ZDHHC16表達后,24hpf胚胎中后腦的標記基因otx2 (Orthodenticle homeobox 2), pax2a (Paired box 2a), krox20 (Early growth response 2)表達均正常,而端腦標記基因foxg1 (Forkhead box G1), emx2 (Empty spiracles homeobox 2), dlx2 (Distal-less homeobox 2)的表達均出現(xiàn)不同程度的減弱,免疫組化檢測神經(jīng)元標記基因acetylated a-tubulin的表達也進一步證實了這一結(jié)果。上述結(jié)果暗示ZDHHC16在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中參與端腦發(fā)育的調(diào)控。由于抑制ZDHHC16后胚胎在神經(jīng)發(fā)育早期出現(xiàn)缺陷,因此我們利用原位雜交技術(shù),在神經(jīng)板形成階段(75%下包期)檢測神經(jīng)標記基因sox3 (Sex determining region Y-box 3)和rx3 (Retinal homeobox gene 3)的表達。結(jié)果顯示,與對照組相比,其在神經(jīng)板前端的表達減弱,提示ZDHHC16可能參與了胚胎端腦神經(jīng)干細胞生命活動的調(diào)控。接下來,分別在體內(nèi)水平和體外水平,研究ZDHHC16對端腦神經(jīng)干細胞的作用。利用原位雜交和RT-PCR技術(shù)檢測神經(jīng)干細胞標記基因sox2的表達水平,發(fā)現(xiàn)抑制ZDHHC16后sox2 (Sex determining region Y-box 2)的表達減弱,mRNA水平降低,提示神經(jīng)干細胞的數(shù)量減少。接著,利用BrdU摻入實驗,RT-PCR和原位雜交檢測增殖相關(guān)基因-pcna (Proliferating cell nuclear antigen)和mcm5 (Minichromosome maintenance complex component 5),切片TUNEL染色技術(shù),分別檢測端腦處神經(jīng)干細胞的增殖水平和凋亡情況。結(jié)果顯示,抑制ZDHHC16的表達后,凋亡的神經(jīng)干細胞數(shù)量沒有明顯的變化,而端腦處神經(jīng)干細胞的增殖水平減弱。同時,在體外培養(yǎng)的原代神經(jīng)干細胞中得到的實驗結(jié)果,與體內(nèi)的結(jié)果一致,也進一步驗證了上述結(jié)論。最后,為了探索ZDHHC16調(diào)控端腦神經(jīng)干細胞增殖的機制。本研究利用RT-PCR技術(shù)檢測參與神經(jīng)干細胞增殖的多條信號通路下游關(guān)鍵因子的表達水平,結(jié)果顯示,抑制ZDHHC16的表達,FGF通路下游的轉(zhuǎn)錄因子pea (ets variant 4), erm (ets variant 5)的mRNA表達水平顯著下降,接著,通過Western blot檢測FGF通路關(guān)鍵效應蛋白ERK的磷酸化水平,結(jié)果也出現(xiàn)了顯著的下調(diào)。此外,利用Western blot技術(shù)檢測FGF通路中配體和受體蛋白的表達水平,發(fā)現(xiàn)抑制ZDHHC16并不會影響上述基因mRNA和蛋白的表達水平,暗示ZDHHC16通過影響ERK上游激酶的活性發(fā)揮作用。同時,本研究通過體外合成ZDHHC16ADHHC表達載體,與zdhhc16 MO共同注射斑馬魚胚胎進行挽救實驗,發(fā)現(xiàn)ZDHHC16ADHHC并不能像野生型ZDHHC16一樣挽救注射表型,上調(diào)ERK的磷酸化水平,因此我們推測ZDHHC16通過其棕櫚酰化修飾作用,影響ERK上游的MEK蛋白激酶的活性,調(diào)節(jié)ERK的磷酸化水平,進而發(fā)揮調(diào)控端腦神經(jīng)干細胞增殖的功能。結(jié)論神經(jīng)干細胞具有自我更新的特性,其數(shù)量的維持和命運的決定依賴于一系列復雜的內(nèi)外源性因子和信號分子為其提供精確穩(wěn)定的環(huán)境。神經(jīng)干細胞的增殖、分化、凋亡等事件正確有序的進行對于神經(jīng)系統(tǒng)正常發(fā)育以及功能的完成具有至關(guān)重要的作用。本研究以斑馬魚為模型,探索ZDHHC16對端腦神經(jīng)干細胞增殖的作用及機制。本研究發(fā)現(xiàn),在胚胎神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中,ZDHHC16通過其棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性,調(diào)節(jié)FGF/ERK信號通路的轉(zhuǎn)導,繼而促進端腦神經(jīng)干細胞的增殖。本研究加深了DHHC蛋白家族及蛋白的棕櫚酰化修飾作用在神經(jīng)發(fā)育中的功能的理解,同時也為神經(jīng)管發(fā)育畸形的研究特別是對端腦缺陷的研究和臨床治療提供了新線索。第二部分ZDHHC17在神經(jīng)元軸突生長過程中的作用及機制研究背景介紹ZDHHC17 (zinc finger DHHC-type containing 17)是哺乳動物中23種DHHC蛋白中的第17號成員,該基因編碼含633個氨基酸的蛋白,其蛋白結(jié)構(gòu)包括N-端的6-8個錨蛋白重復序列(Ankyrinrepeats, ANK)以及五個跨膜螺旋,其特征性的DHHC結(jié)構(gòu)域位于靠近第四個跨膜螺旋的位置。研究證實,ZDHHC17在體內(nèi)主要表達于神經(jīng)系統(tǒng),暗示該蛋白的功能可能特異性的與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和生命活動有關(guān)。近年來對于ZDHHC17功能的研究主要集中在與某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生的關(guān)系。目前建立的ZDHHC17基因敲除小鼠模型表現(xiàn)出與人類的亨廷頓舞蹈癥類似的表型,提示該基因可能與亨廷頓舞蹈癥的發(fā)生密切相關(guān)。同時,許多參與調(diào)控神經(jīng)信號傳遞的關(guān)鍵蛋白,如SNAP25、PSD95等均可被ZDHHC17棕櫚;揎棥A硗,研究表明,ZDHHC17可以修飾Mg2+、Ca2+等離子通道,調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。最新的研究發(fā)現(xiàn),ZDHHC17可以活化JNK (c-Jun N-terminus kinase, JNK)信號通路,參與調(diào)節(jié)下游信號通路的傳導。然而,關(guān)于ZDHHC17在神經(jīng)發(fā)育中的作用及分子機制,目前尚無人涉及。因此本研究選取斑馬魚為動物模型,利用顯微注射MO的方法,建立ZDHHC17-knockdown胚胎模型,同時通過建立原代培養(yǎng)神經(jīng)干細胞定向誘導分化的細胞模型和神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor, NGF)誘導的PC12細胞定向分化為神經(jīng)元的體外模型,利用RNAi技術(shù),共同探討ZDHHC17在胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的作用及分子機制。研究內(nèi)容首先,為了研究ZDHHC17在斑馬魚胚胎神經(jīng)發(fā)育中的作用,本部分研究利用RT-PCR技術(shù)和WISH技術(shù),檢測zdhhc17 mRNA在斑馬魚胚胎中的時空表達譜。結(jié)果顯示,zdhhc17集中表達于神經(jīng)系統(tǒng),且從尾芽期開始,表達水平顯著增高。接著,我們選取1-2細胞期胚胎,顯微注射zdhhc17 MO抑制ZDHHC17蛋白的翻譯,構(gòu)建ZDHHC17-knockdown胚胎模型,同時注射小鼠zdhhc17 mRNA構(gòu)建ZDHHC17-overexpression模型,并觀察表型。結(jié)果顯示,抑制ZDHHC17表達的胚胎外觀與注射Con MO的胚胎沒有差別。但是Touch-response test結(jié)果顯示,抑制ZDHHC17表達后,發(fā)育至3dpf (Days post fertilization)的胚胎,運動能力明顯降低,表現(xiàn)為受刺激后游動速率減慢,游動距離縮短。利用免疫熒光染色技術(shù)檢測神經(jīng)元標記基因Znp-1,結(jié)果顯示,胚胎發(fā)育至28hpf,抑制組胚胎的運動神經(jīng)元軸突的生長受限,而過表達組胚胎的運動神經(jīng)元軸突則呈現(xiàn)生長過度的傾向。然而,對于22hpf胚胎的Islet1 (ISL LIM homeobox 1)的染色結(jié)果表明,各組間神經(jīng)元生成的數(shù)量并沒有明顯的差異,提示該蛋白的功能可能與神經(jīng)元軸突的生成密切相關(guān),并不影響神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元方向的分化過程。為了進一步驗證在體內(nèi)模型中觀察到的結(jié)果,本研究又建立了原代培養(yǎng)神經(jīng)干細胞定向誘導為神經(jīng)元模型和NGF誘導的PC12細胞定向分化的體外模型,通過RNAi技術(shù)抑制ZDHHC17的表達,觀察神經(jīng)元分支生長情況和神經(jīng)元生成的數(shù)量,得到的結(jié)果均與體內(nèi)結(jié)果一致。接下來,為了探索ZDHHC17調(diào)控神經(jīng)元軸突生長的作用機制,本研究以NGF誘導的定向分化為神經(jīng)元的PC12細胞為模型,利用Western blot技術(shù)檢測參與調(diào)控神經(jīng)元分化的重要信號通路-絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase, MAPK)家族中的關(guān)鍵因子,包括p-ERK (phosphorylated extracellular regulated MAP kinase, p-ERK), p-JNK, p-p38,結(jié)果表明,在抑制ZDHHC17的表達后,ERK的磷酸化水平顯著下降,而p-JNK和p-p38的表達則無明顯變化。因此,本研究繼續(xù)探索ZDHHC17促進ERK磷酸化的機制。分析ZDHHC17的蛋白結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)其不含有激酶結(jié)構(gòu)域,因此我們推測ZDHHC17通過影響ERK上游其他激酶的活性調(diào)控ERK磷酸化。我們構(gòu)建帶有GFP標簽的ZDHHC17表達載體,利用免疫共沉淀技術(shù),檢測ZDHHC17與ERK上游的激酶TrkA (Tyrosine kinase A, TrkA)和cAMP依賴型蛋白激酶A (cAMP-dependent protein kinase A, PKA)的結(jié)合情況。結(jié)果表明,ZDHHC17僅可以與TrkA結(jié)合。同時免疫熒光檢測結(jié)果表明,抑制ZDHHC17表達后,表達TrkA陽性的運輸囊泡聚集在細胞核的核周,其在胞質(zhì)內(nèi)的運輸受到抑制,提示ZDHHC17通過促進TrkA在胞質(zhì)內(nèi)的運輸,調(diào)控下游的信號轉(zhuǎn)導。目前的研究認為TrkA在胞質(zhì)內(nèi)通常沿著微管網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)運輸,并且可以反作用于微管蛋白(tubulin)、調(diào)節(jié)微管蛋白的動態(tài)平衡。因此我們分別在體內(nèi)體外,利用免疫共沉淀技術(shù)檢測tubulin蛋白與TrkA蛋白的相互作用。結(jié)果表明,抑制ZDHHC17表達以后,TrkA和tubulin的結(jié)合能力減弱,而過表達ZDHHC17可以促進TrkA和tubulin的相互作用。證明ZDHHC17是通過調(diào)節(jié)TrkA-tubulin復合物的形成,影響TrkA激酶在胞質(zhì)內(nèi)的運輸,導致下游p-ERK表達水平的變化,繼而調(diào)控神經(jīng)元軸突的生長。最后,為了進一步深入研究ZDHHC17促進TrkA-tubulin復合物形成的機制,我們分析ZDHHC17的蛋白結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)其含有可能與蛋白識別粘附作用有關(guān)的錨蛋白重復序列,因此,我們構(gòu)建缺失型ZDHHC17蛋白表達載體(ZDHHC17△ANK)轉(zhuǎn)染NGF誘導的PC12細胞模型,利用Westernblot檢測ERK的磷酸化水平,結(jié)果顯示,過表達ZDHHC17△ANK并不能如過表達野生型ZDHHC17一樣,顯著的提高ERK1/2的磷酸化水平,提示我們ZDHHC17調(diào)節(jié)神經(jīng)元軸突生長并不依賴于其棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性,而其錨蛋白結(jié)構(gòu)域參與調(diào)控TrkA-tubulin復合物的形成。結(jié)論在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中,神經(jīng)元軸突的生成對于突觸的形成,神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和神經(jīng)系統(tǒng)功能的實現(xiàn)至關(guān)重要。神經(jīng)元軸突的正常生長依賴于適宜的生長環(huán)境和一系列內(nèi)源性的神經(jīng)相關(guān)蛋白的共同作用。本研究證實,在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中,ZDHHC17通過促進TrkA-tubulin復合物的形成,影響下游信號通路的轉(zhuǎn)導,從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元軸突的生長。與之前的大多數(shù)研究不同,本研究結(jié)果表明,ZDHHC17蛋白的錨蛋白結(jié)構(gòu)域參與調(diào)節(jié)TrkA-tubulin復合物的形成,而這一過程是不依賴于其棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性的。上述結(jié)果不僅拓展了ZDHHC17在神經(jīng)發(fā)育過程中的作用,深化了其分子調(diào)控機制,更是為該家族蛋白作用機制的研究提供了新的視角。
【關(guān)鍵詞】:ZDHHC16 神經(jīng)干細胞 棕櫚酰化 端腦 FGF/ERK ZDHHC17 軸突生長 ERK1/2 TrkA Tubulin
【學位授予單位】:山東大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R321
【目錄】:
  • 中文摘要7-14
  • Abstract14-20
  • 符號說明20-23
  • 前言23-31
  • 第一章 ZDHHC16在神經(jīng)干細胞增殖過程中的作用及機制的研究31-91
  • 背景介紹31
  • 第一部分 ZDHHC16在胚胎端腦發(fā)育過程中作用的研究31-70
  • 材料和方法31-61
  • 結(jié)果61-63
  • 討論63-65
  • 結(jié)論65
  • 附圖65-70
  • 第二部分 ZDHHC16對神經(jīng)干細胞存活影響的研究70-81
  • 材料和方法70-75
  • 結(jié)果75-76
  • 討論76-77
  • 結(jié)論77-78
  • 附圖78-81
  • 第三部分 ZDHHC16調(diào)節(jié)端腦神經(jīng)干細胞增殖的機制研究81-91
  • 材料方法81-83
  • 結(jié)果83-85
  • 討論85-87
  • 結(jié)論87-88
  • 附圖88-91
  • 第二章 ZDHHC17在神經(jīng)元軸突生長過程中的作用及機制研究91-123
  • 背景介紹91
  • 第一部分 ZDHHC17在神經(jīng)元生長過程中作用的研究91-109
  • 材料和方法91-98
  • 結(jié)果98-101
  • 討論101-104
  • 結(jié)論104
  • 附圖104-109
  • 第二部分 ZDHHC17調(diào)控神經(jīng)元軸突生長的機制研究109-123
  • 材料和方法109-113
  • 結(jié)果113-115
  • 討論115-117
  • 結(jié)論117-118
  • 附圖118-123
  • 參考文獻123-133
  • 致謝133-134
  • 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄134-135
  • 學位論文評閱及答辯情況表135-136
  • 英文論文1136-158
  • 英文論文2158-183

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 趙冉冉;徐曉臣;王維平;焦清海;;癲癇與海馬神經(jīng)再生[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2014年05期

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5 劉偉;張小瓊;朱敏;;4.1N與相關(guān)蛋白質(zhì)相互作用研究進展[J];生命的化學;2015年04期

6 暴艷敏;馬桂蘭;喬自林;于國偉;;頂復門原蟲蛋白質(zhì)棕櫚;难芯窟M展[J];中國獸醫(yī)科學;2013年09期

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8 劉紅;葉榮;;病毒蛋白脂酰化及其功能[J];微生物與感染;2014年02期

9 婁輝;戎偉;李慧萍;何朝族;;野油菜黃單胞菌AvrXccE1是一個毒性/無毒性雙功能Ⅲ型效應蛋白[J];植物病理學報;2015年03期

10 李薈暉;宋質(zhì)銀;;MICOS復合物/線粒體內(nèi)膜結(jié)構(gòu)調(diào)控關(guān)鍵復合物的研究進展[J];中國細胞生物學學報;2015年09期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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2 楊金華;鼠冠狀病毒S蛋白膜內(nèi)區(qū)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的研究[D];復旦大學;2011年

3 張楠;Noggin和BDNF基因修飾的BMSCs、羥基紅花黃色素A、重復經(jīng)顱磁刺激對血管性癡呆大鼠作用機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2011年

4 衛(wèi)玲;中國漢族人群散發(fā)性肌萎縮側(cè)索硬化癥的易感基因位點研究[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

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7 周鈞;Ferroportin抑制肝細胞癌生長的機制研究[D];中南大學;2012年

8 劉爽;砷對小鼠海馬神經(jīng)元再生及腦組織損傷的研究[D];大連醫(yī)科大學;2013年

9 周良子;蛋白質(zhì);D(zhuǎn)移酶10參與擬南芥的發(fā)育及鹽脅迫響應[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2013年

10 劉麗星;三七總皂苷調(diào)節(jié)MCAO大鼠Nogo-A/RhoA通路及保護Aβ25-35誘導SH-SY5Y細胞損傷的機制[D];北京中醫(yī)藥大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 祁英培;牛胎兒神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學;2013年

2 喻松霞;人胚胎干細胞無血清無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立[D];南昌大學醫(yī)學院;2013年



本文編號:1032981

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