本文關(guān)鍵詞：環(huán)氧合酶2信號對犬乳腺腫瘤干細(xì)胞增殖和抗凋亡的調(diào)控作用研究

  更多相關(guān)文章： 犬乳腺腫瘤 腫瘤干細(xì)胞 COX-2 Wnt/β-catenin

【摘要】：研究目的：環(huán)氧合酶及其限速產(chǎn)物前列腺素E2(COX-2/PGE2)在犬乳腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中表現(xiàn)出多重生物學(xué)功能,該信號通路的異常激活可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抗凋亡能力以及增加腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險。為了闡明COX-2信號通路對犬腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)性能的維持及調(diào)控作用,本試驗(yàn)將從組織和細(xì)胞水平對這上述現(xiàn)象和潛在機(jī)理進(jìn)行探討： 研究方法：1.通過免疫組化化學(xué)分析方法,檢測COX-2與腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD44、Oct-3/4、 EGFR和Ki-67在正常乳腺組織以及原發(fā)性腫瘤組織中的表達(dá)分布和相關(guān)性,并從腫瘤組織中分離腫瘤單細(xì)胞建立無血清懸浮培養(yǎng)的腫瘤干細(xì)胞微乳球模型,進(jìn)一步分析上述標(biāo)記的表達(dá)類型間的關(guān)聯(lián)性。2.以CMT1211和CMT1016兩株犬乳腺腫瘤細(xì)胞建立富集腫瘤干細(xì)胞的微乳球模型,RT-PCR和Weseternblot分析COX-2/PGE2信號通路、Wnt/p-catenin信號通路相關(guān)因子以及干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記因子的表達(dá)差異,確定異常激活因子。考察懸浮培養(yǎng)細(xì)胞CD44+/CD24以及ALDH+表型細(xì)胞的比例變化,以及細(xì)胞的增殖、侵襲和體內(nèi)成瘤能力的變化。確定COX-2對腫瘤干細(xì)胞富集及腫瘤發(fā)生的作用。3.通過siRNA干擾和COX-2抑制劑(塞來昔布)靶向抑制細(xì)胞中COX-2的表達(dá),同時分析其對腫瘤干細(xì)胞特征的影響。最后,將微乳球細(xì)胞接種免疫缺陷小鼠建立體內(nèi)腫瘤模型,單一使用塞來昔布或者聯(lián)合化療藥物順鉑觀察其對腫瘤的治療作用。研究結(jié)果：1.COX-2在正常乳腺、癌前增生以及腫瘤組織中的表達(dá)存在明顯的差異,可作為早期組織向腫瘤轉(zhuǎn)變的提示因子,其異質(zhì)性的表達(dá)類型也反映了腫瘤組織細(xì)胞層次性。在原發(fā)性乳腺腫瘤組織中COX-2的表達(dá)與CD44和EGFR具有顯著的相關(guān)性。在微乳球中,COX-2的表達(dá)升高與腫瘤的惡性程度相關(guān),并伴隨CD44和Oct-3/4的表達(dá)上調(diào),進(jìn)一步提示了COX-2在維持腫瘤干細(xì)胞亞群的數(shù)量及其性能方面具有潛在作用。2.基因差異表達(dá)分析的結(jié)果顯示,COX-2、EP2、EP4、15-PDGH、β-catenin、Cyclin-D1、Oct-3/4、ALDH1A3表達(dá)存在明顯差異,說明了腫瘤干細(xì)胞的富集過程伴隨COX-2科Wnt信號通路的異常激活。而對微乳球進(jìn)行細(xì)胞表型和ALDH+細(xì)胞亞群的分析結(jié)果也顯示,微乳球成功富集了乳腺腫瘤干細(xì)胞,相對于貼壁細(xì)胞顯示出更強(qiáng)的增殖、遷移、侵襲能力以及在體內(nèi)形成腫瘤的能力。3.siRNA干擾或者選擇性抑制劑可成功降低腫瘤細(xì)胞中的COX-2表達(dá)水平,并有效減少腫瘤細(xì)胞中CD44+/CD24-、 ALDH+細(xì)胞亞群的比例以及抑制腫瘤細(xì)胞的惡性行為,而這些作用可被PGE2所逆轉(zhuǎn)。抑制COX-2的表達(dá)可下調(diào)β-catenin和Cyclin D1的蛋白水平,同時上調(diào)Phospho-(3-catenin (Ser33/37Thr41)的表達(dá),聯(lián)合順鉑可有效破壞微乳球的形成,增加凋亡細(xì)胞的比例。與單獨(dú)分別給藥相比,口服塞來昔布(20mg/kg,1次/日)聯(lián)合腹腔注射順鉑(6mg/kg,1次/3日)可有效抑制小鼠異位移植腫瘤的生長,減少腫瘤組織中腫瘤干細(xì)胞的數(shù)目。結(jié)論：綜合試驗(yàn)的所有數(shù)據(jù),表明COX-2/PGE2對腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)性能具有重要的調(diào)控作用,而這一作用方式可能是通過Wnt/β-catenin信號通路來實(shí)現(xiàn)的。靶向抑制環(huán)氧合酶信號通路對犬乳腺腫瘤干細(xì)胞的抑制作用為臨床的腫瘤治療提供了新的依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：犬乳腺腫瘤 腫瘤干細(xì)胞 COX-2 Wnt/β-catenin
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.292
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-7
• 圖表目錄7-8
• 縮略詞表8-9
• 第一章 引言9-21
• 1.1 腫瘤干細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生發(fā)展9-10
• 1.2 乳腺腫瘤干細(xì)胞與微環(huán)境10-11
• 1.3 乳腺腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物及其相關(guān)信號調(diào)控因子11-17
• 1.4 環(huán)氧合酶信號通路及其相關(guān)因子17-18
• 1.5 靶向環(huán)氧合酶與乳腺腫瘤干細(xì)胞18-19
• 1.6 研究目的和意義19-21
• 第二章 組織學(xué)中環(huán)氧合酶2與犬乳腺腫瘤起源的關(guān)系研究21-34
• 2.1 材料和方法21-23
• 2.2 試驗(yàn)方法23-24
• 2.3 數(shù)據(jù)分析24
• 2.4 結(jié)果24-31
• 2.5 討論31-33
• 2.6 小結(jié)33-34
• 第三章 腫瘤干細(xì)胞中環(huán)氧合酶2及其相關(guān)信號因子的表達(dá)分析34-54
• 3.1 材料和方法34-42
• 3.2 數(shù)據(jù)分析42
• 3.3 結(jié)果42-51
• 3.4 討論51-53
• 3.5 小結(jié)53-54
• 第四章 駛向環(huán)氧合酶信號通路對乳腺腫瘤干細(xì)胞和腫瘤形成的抑制作用研究54-71
• 4.1 試驗(yàn)材料和方法54-59
• 4.2 數(shù)據(jù)分析59
• 4.3 試驗(yàn)結(jié)果59-69
• 4.4 討論69-70
• 4.5 小結(jié)70-71
• 第五章 結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)71-73
• 參考文獻(xiàn)73-87
• 致謝87-89
• 作者簡介89

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Naoko Takebe;Sally Hunsberger;Sherry X.Yang;;Expression of Gli1 in the hedgehog signaling pathway and breast cancer recurrence[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年04期

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本文編號：923230