本文關(guān)鍵詞：寄生曲霉菌在不同飼料原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B_1的差異性及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黃曲霉毒素(Afltoxin,AFT)是一類(lèi)主要由寄生曲霉菌和黃曲霉菌產(chǎn)生的具有致癌、致畸和致突變的次級(jí)代謝產(chǎn)物,在黃曲霉毒素所有類(lèi)型中,以黃曲霉毒素B1(AFB1)毒性最強(qiáng),已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織劃定為I類(lèi)致癌物。自然條件下,不同飼料原料中黃曲霉毒素的污染水平存在較大差異,探明不同原料黃曲霉毒素污染水平差異性的原因及可能的作用機(jī)制,對(duì)原料的選擇、貯藏,預(yù)防及有效控制原料中黃曲霉毒素的污染,從而保證飼料產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要理論依據(jù)和指導(dǎo)意義。因此,本項(xiàng)目在研究籽粒完整性對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1影響的基礎(chǔ)上,分析影響不同原料AFB1污染水平差異的可能成分,研究這些成分對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的影響,闡明不同飼料原料黃曲霉毒素污染水平差異性的原因及可能的作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.籽粒完整性對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響研究試驗(yàn)選取飼料工業(yè)生產(chǎn)中的常規(guī)飼料原料(玉米、小麥、花生和大豆)及其副產(chǎn)品(玉米粕、小麥粕、花生粕和大豆粕)作為試驗(yàn)材料,接種寄生曲霉菌孢子液,在同等條件下培養(yǎng)15d,分別在0d,5d,10d和15d收集樣品,通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定樣品中AFB1的含量。結(jié)果表明:1)未滅菌、滅菌處理的粉碎玉米、花生、大豆和小麥及其副產(chǎn)品均隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),刺激寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的量增加。同時(shí)期未滅菌、滅菌粉碎樣品,AFB1產(chǎn)生量均顯著高于其對(duì)應(yīng)餅粕類(lèi)樣品(P0.05)。同時(shí)期滅菌粉碎的不同原料及其副產(chǎn)品AFB1含量均高于對(duì)應(yīng)的未滅菌同類(lèi)樣品。2)玉米、小麥、花生和大豆籽粒樣品隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),除表面滅菌處理和高壓滅菌處理的籽粒玉米在培養(yǎng)5d時(shí)AFB1含量最高外,其它籽粒樣品(花生、大豆和小麥)產(chǎn)生AFB1的最高含量均出現(xiàn)在培養(yǎng)15d。寄生曲霉菌在玉米、小麥、花生和大豆籽粒上開(kāi)始生長(zhǎng)的部位不同。同等條件下,觀察到寄生曲霉菌最先在籽粒玉米和小麥胚部開(kāi)始生長(zhǎng),但在籽粒花生和玉米中的生長(zhǎng)速度比在大豆和小麥中生長(zhǎng)快速。說(shuō)明籽粒結(jié)構(gòu)及其完整性不同對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的影響也不同,這可能是影響寄生曲霉菌在玉米、小麥、花生和大豆中AFB1產(chǎn)生的重要因素。2.油脂種類(lèi)及其水平對(duì)寄生曲霉菌在不同原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響研究試驗(yàn)以脫脂原料(脫脂玉米粉、脫脂大豆粉、脫脂小麥粉、脫脂花生粉、脫脂玉米胚粉和脫脂小麥胚粉)為試驗(yàn)材料,添加不同油脂(玉米油、花生油、大豆油和小麥油)的不同水平(2%,5%,10%和15%),接種寄生曲霉菌的孢子液,在同等條件下培養(yǎng)15d,分別在0d,5d,10d和15d收集樣品,通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定樣品中AFB1的含量。結(jié)果表明:1)不同油脂及其添加水平對(duì)寄生曲霉菌在對(duì)應(yīng)脫脂原料中產(chǎn)生AFB1的影響。結(jié)果顯示,所用的6種脫脂樣品在培養(yǎng)前10d均隨著培養(yǎng)時(shí)間和對(duì)應(yīng)油脂添加水平的增加,AFB1含量線性增加,除脫脂玉米粉、脫脂大豆粉、脫脂小麥粉、脫脂小麥胚粉的15%油脂添加水平和脫脂小麥粉的2%、10%油脂添加水平AFB1積累程度在培養(yǎng)10d時(shí)最高,其余樣品AFB1含量均在培養(yǎng)15d時(shí)最高。說(shuō)明脂肪含量是影響寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的重要因素,但不同油脂的同一個(gè)添加水平在對(duì)應(yīng)的原料中產(chǎn)生AFB1的量和積累速度不同。2)不同油脂及其添加水平對(duì)寄生曲霉菌在不同脫脂原料中產(chǎn)生AFB1的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,不同油脂的同一添加水平對(duì)寄生曲霉菌在同一脫脂原料中產(chǎn)生AFB1的差異相對(duì)較小,而同一油脂同一添加水平對(duì)寄生曲霉菌在不同脫脂原料中產(chǎn)生AFB1的差異較大。在培養(yǎng)10d時(shí),當(dāng)四種油脂(大豆油、花生油、玉米油和小麥油)的15%油脂水平添加到脫脂大豆粉中,AFB1含量最大值是最小值的1.4倍。而當(dāng)大豆油的15%油脂水平添加到不同脫脂樣品(脫脂大豆粉、脫脂花生粉、脫脂玉米胚粉、脫脂小麥胚粉、脫脂玉米粉和脫脂小麥粉)中,AFB1含量最大值是最小值的31.3倍。其他油脂的不同油脂水平均出現(xiàn)類(lèi)似趨勢(shì)。而且在培養(yǎng)15d時(shí),所有油脂種類(lèi)及其油脂水平刺激寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的量與培養(yǎng)10d時(shí)產(chǎn)生AFB1的量均出現(xiàn)類(lèi)似趨勢(shì)。說(shuō)明脂肪含量是影響寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的重要因素,但是脂肪種類(lèi)對(duì)AFB1產(chǎn)生的影響較小。3.不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響及其可能的作用機(jī)制研究通過(guò)準(zhǔn)確分析試驗(yàn)樣品的不同營(yíng)養(yǎng)成分(氨基酸、礦物質(zhì)、碳和氮含量),選擇可能影響黃曲霉毒素產(chǎn)生的成分和水平,以合成培養(yǎng)基為培養(yǎng)基質(zhì),接種寄生曲霉菌的孢子液,在同等條件下培養(yǎng)3d后收集樣品。通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定培養(yǎng)液中的AFB1含量,Real-time PCR技術(shù)測(cè)定黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中關(guān)鍵基因的表達(dá)量。結(jié)果表明:1)不同試驗(yàn)樣品中各氨基酸(蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和賴(lài)氨酸)含量差異在幾倍至幾十倍。樣品中礦物質(zhì)(鉀、鈉、鎂、鈣、鐵、銅、鋅和錳)含量,除鈣、鈉含量差別較小外,其余礦物質(zhì)含量差別較大,變化幅度在5-30倍。不同樣品中碳含量差別較小,其最低碳含量和最高碳含量之間差別不足1.5倍。樣品之間的氮含量差別較大,在10倍左右。2)天冬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、谷氨酸對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中刺激AFB1產(chǎn)生最明顯,最佳添加水平分別是:1%,2%,4%和1%。甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸和賴(lài)氨酸隨著添加量的增加對(duì)AFB1產(chǎn)生的影響較小。鐵、銅、錳和鋅對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中刺激AFB1產(chǎn)生的最佳添加水平分別是:30mg/L,24mg/L,30mg/L和10mg/L。鎂和鉀的添加水平在0.4%和0.1%時(shí),最有利于AFB1產(chǎn)生。碳、氮含量及碳氮比分別在45%,4%,8:1時(shí)刺激AFB1產(chǎn)生效果最明顯。說(shuō)明適宜水平的營(yíng)養(yǎng)成分含量能刺激寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生AFB1。3)與對(duì)照組相比,天冬氨酸添加水平在1%時(shí)能顯著上調(diào)afl R、afl O、afl D和afl U基因的表達(dá)(P0.05)。苯丙氨酸和亮氨酸添加水平分別在2%和0.5%時(shí)能顯著上調(diào)afl R、afl D、afl U、afl S和afl O基因的表達(dá)(P0.05)。谷氨酸添加水平在1%能顯著上調(diào)afl D、afl R、afl S和afl O基因的表達(dá)(P0.05)。賴(lài)氨酸均有上調(diào)afl R、afl D、afl U、afl S和afl O基因表達(dá)的趨勢(shì)但是與對(duì)照組相比差異不顯著。鐵的添加量在30mg/L時(shí)顯著上調(diào)afl D、afl O和afl S基因的表達(dá)(P0.05)。銅的添加量在24mg/L時(shí)顯著上調(diào)afl R、afl D、afl S和afl O基因的表達(dá)(P0.05)。鋅的添加水平在10mg/kg時(shí)顯著上調(diào)afl R、afl U基因的表達(dá)(P0.05)。錳的添加水平在30mg/kg顯著上調(diào)afl R、afl D、afl U和afl S基因的表達(dá)(P0.05)。鉀的添加量在0.1%時(shí)和鎂的添加量在0.4%時(shí)分別顯著顯著上調(diào)afl R、afl S和afl U基因的表達(dá)(P0.05)和afl R、afl D、afl U、afl S和afl O基因的表達(dá)(P0.05)。碳含量45%時(shí),afl R、afl D、afl U和afl S基因的表達(dá)顯著升高(P0.05)。氮含量4%時(shí),與對(duì)照組相比能顯著上調(diào)afl U、afl S和afl O基因的表達(dá)(P0.05)。說(shuō)明苯丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、鐵、銅、錳和鎂刺激寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的最適添加水平,也能不同程度的上調(diào)黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中afl R、afl S、afl O、afl U和afl D關(guān)鍵基因的相對(duì)表達(dá)。綜合上述,本研究得出以下結(jié)論:1)籽粒結(jié)構(gòu)及其完整性是造成寄生曲霉菌在玉米、大豆、小麥和花生中產(chǎn)生AFB1差異的重要因素。2)脂肪含量是影響寄生曲霉菌產(chǎn)生AFB1的重要因素,但是脂肪種類(lèi)對(duì)AFB1的產(chǎn)生影響較小。3)苯丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、鐵、銅、錳和鎂可上調(diào)黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中相關(guān)基因的表達(dá),是刺激AFB1產(chǎn)生的重要因素。
【關(guān)鍵詞】：寄生曲霉菌 油脂 飼料原料 成分 黃曲霉毒素B1
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S816;S859.8
【目錄】：

• 摘要9-13
• ABSTRACT13-18
• 縮略語(yǔ)表18-19
• 第一章 文獻(xiàn)綜述19-45
• 1 前言19-20
• 2 黃曲霉毒素概述20-35
• 2.1 黃曲霉毒素的發(fā)現(xiàn)20-21
• 2.2 黃曲霉毒素的種類(lèi)、結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì)21-23
• 2.3 黃曲霉毒素的產(chǎn)生條件、分布及毒性危害23-25
• 2.4 黃曲霉毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)25-27
• 2.5 黃曲霉毒素的檢測(cè)方法27-30
• 2.5.1 薄層層析法28
• 2.5.2 高效液相色譜法28-29
• 2.5.3 免疫化學(xué)分析方法29-30
• 2.6 黃曲霉毒素的生物合成30-35
• 3 黃曲霉毒素的污染情況35-37
• 4 基質(zhì)中主要成分對(duì)黃曲霉毒素產(chǎn)生的影響37-41
• 4.1 油脂對(duì)黃曲霉素產(chǎn)生的影響38-39
• 4.2 氨基酸對(duì)黃曲霉毒素產(chǎn)生的影響39-40
• 4.3 礦物質(zhì)對(duì)黃曲霉毒素產(chǎn)生的影響40-41
• 4.4 碳、氮含量及碳氮比對(duì)黃曲霉毒素產(chǎn)生的影響41
• 5 立體依據(jù)、研究目的意義、研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線41-45
• 5.1 立體依據(jù)、研究目的意義41-42
• 5.2 研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線42-45
• 5.2.1 研究?jī)?nèi)容42-44
• 5.2.2 技術(shù)路線44-45
• 第二章 籽粒完整性對(duì)寄生曲霉菌在不同飼料原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響45-57
• 1 引言45
• 2 材料與方法45-50
• 2.1 試驗(yàn)材料45-47
• 2.1.1 飼料樣品及來(lái)源45-46
• 2.1.2 產(chǎn)毒菌株及來(lái)源46
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備46
• 2.1.4 主要試劑46-47
• 2.1.5 主要試劑的配制47
• 2.2 試驗(yàn)方法47-50
• 2.2.1 產(chǎn)毒菌株的活化及孢子菌懸液的制備47
• 2.2.2 樣品中水分和粗脂肪的測(cè)定47
• 2.2.3 未滅菌、滅菌處理的不同粉碎原料及其副產(chǎn)品對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響47-48
• 2.2.4 未滅菌、滅菌處理的不同籽粒原料對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響48
• 2.2.5 黃曲霉毒素B1含量的測(cè)定48-49
• 2.2.6 數(shù)據(jù)處理49-50
• 3 結(jié)果與分析50-54
• 3.1 未滅菌、滅菌處理的不同粉粹原料及其副產(chǎn)品對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響50-52
• 3.2 未滅菌、滅菌處理的不同籽粒原料對(duì)寄生曲霉菌產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響52-53
• 3.3 寄生曲霉菌在不同籽粒原料中的生長(zhǎng)情況53-54
• 4 討論54-56
• 5 小結(jié)56-57
• 第三章 油脂種類(lèi)及其水平對(duì)寄生曲霉菌在不同原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響57-67
• 1 引言57
• 2 材料與方法57-60
• 2.1 試驗(yàn)材料57-58
• 2.1.1 飼料樣品及來(lái)源57-58
• 2.1.2 油脂樣品及來(lái)源58
• 2.1.3 產(chǎn)毒菌株及來(lái)源58
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備58
• 2.1.5 主要試劑58
• 2.1.6 主要試劑的配制58
• 2.2 試驗(yàn)方法58-60
• 2.2.1 產(chǎn)毒菌株的活化及孢子菌懸液的制備58
• 2.2.2 樣品中水分和脂肪的測(cè)定58
• 2.2.3 油脂種類(lèi)及其水平對(duì)寄生曲霉菌在對(duì)應(yīng)脫脂原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響58-59
• 2.2.4 油脂種類(lèi)及其水平對(duì)寄生曲霉菌在不同脫脂原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響59
• 2.2.5 黃曲霉毒素B1含量的測(cè)定59
• 2.2.6 數(shù)據(jù)處理59-60
• 3 結(jié)果與分析60-65
• 3.1 油脂種類(lèi)及其水平對(duì)寄生曲霉菌在對(duì)應(yīng)脫脂原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響60-62
• 3.2 油脂種類(lèi)及其水平對(duì)寄生曲霉菌在不同脫脂原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響62-65
• 4 討論65-66
• 5 小結(jié)66-67
• 第四章 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響及其可能的作用機(jī)制67-98
• 1 引言67-68
• 2 材料和方法68-81
• 2.1 試驗(yàn)材料68-71
• 2.1.1 飼料樣品及來(lái)源68
• 2.1.2 氨基酸樣品及來(lái)源68
• 2.1.3 產(chǎn)毒菌株及來(lái)源68
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備68-69
• 2.1.5 主要試劑及培養(yǎng)基69
• 2.1.6 主要試劑的配置69-71
• 2.2 試驗(yàn)方法71-81
• 2.2.1 產(chǎn)毒菌株的活化及孢子菌懸液的制備71
• 2.2.2 樣品中氨基酸的測(cè)定71-72
• 2.2.3 樣品中礦物質(zhì)含量的測(cè)定72-73
• 2.2.4 樣品中碳、氮含量的測(cè)定73
• 2.2.5 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響73-76
• 2.2.6 黃曲霉毒素B1含量的測(cè)定76
• 2.2.7 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在黃曲霉毒素合成過(guò)程中相關(guān)基因表達(dá)的影響76-80
• 2.2.8 數(shù)據(jù)處理80-81
• 3 結(jié)果與分析81-93
• 3.1 樣品中不同營(yíng)養(yǎng)成分的含量81-86
• 3.2 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響86-89
• 3.2.1 氨基酸對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響86-87
• 3.2.2 礦物質(zhì)對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響87-88
• 3.2.3 碳、氮含量及碳氮比對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響88-89
• 3.3 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響89-93
• 3.3.1 氨基酸對(duì)寄生曲霉菌在黃曲霉毒素合成過(guò)程中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響89-91
• 3.3.2 礦物質(zhì)對(duì)寄生曲霉菌在黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響91-92
• 3.3.3 碳、氮含量對(duì)寄生曲霉菌在黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響92-93
• 4 討論93-97
• 4.1 樣品中不同營(yíng)養(yǎng)成分的含量93
• 4.2 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的影響93-95
• 4.3 不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)寄生曲霉菌在黃曲霉毒素生物合成過(guò)程中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響95-97
• 5 小結(jié)97-98
• 第五章 結(jié)語(yǔ)98-101
• 1 主要研究結(jié)論98
• 2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)98-99
• 3 本研究的不足及進(jìn)一步研究打算99-101
• 參考文獻(xiàn)101-122
• 研究生期間發(fā)表的主要論文122-123
• 致謝123-124

【參考文獻(xiàn)】

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5 孫秀蘭;食品中黃曲霉毒素B_1金標(biāo)免疫層析檢測(cè)方法研究[D];江南大學(xué);2005年

6 鮑蕾;黃曲霉毒素的生物積累及其檢測(cè)技術(shù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2009年

7 張浩;茶葉發(fā)酵過(guò)程中的多酚變化及其對(duì)黃曲霉產(chǎn)毒的抑制效應(yīng)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 靳學(xué)敏;郫縣豆瓣中黃曲霉毒素B_1在線監(jiān)測(cè)技術(shù)研究[D];西華大學(xué);2011年

2 李冰;黑曲霉對(duì)黃曲霉毒素B_1的降解及應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：寄生曲霉菌在不同飼料原料中產(chǎn)生黃曲霉毒素B_1的差異性及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：498230