豬流感病毒(SIV)是一種正黏病毒科,流感病毒屬,有囊膜、分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒,是引起流感的主要病原之一。影響流感病毒感染的主要因素包括病毒、宿主和傳播途徑。越來越多的調(diào)查發(fā)現(xiàn),不同地區(qū)或者同一地區(qū)不同豬場/豬群對同一SIV的易感性和感染程度存在很大差異,使人們認(rèn)識到外界環(huán)境和宿主營養(yǎng)條件對抵抗SIV感染的重要性。黃曲霉毒素B1(AFB1)是目前最常見的一種霉菌毒素,廣泛存在于發(fā)霉的玉米、小麥和花生等農(nóng)作物中,具有影響宿主免疫和降低生長性能等作用。所以,在本研究中我們提出AFB1可能促進(jìn)SIV復(fù)制,并深入探討其作用機(jī)理。考慮到豬在SIV傳播中的重要地位以及AFB1的廣泛暴露,找到一種能夠防止豬群免受AFB1暴露和SIV侵害的營養(yǎng)物質(zhì)變得尤為重要。α-甘露寡糖又稱為甘露低聚糖,是從酵母培養(yǎng)細(xì)胞壁中提取的一類新型抗原活性物質(zhì),可通過物理吸附或直接結(jié)合霉菌毒素,消除毒素對機(jī)體的有害影響,同時具有增強(qiáng)免疫、促生長及抗病毒等生物學(xué)功能。所以,本研究通過體內(nèi)、體外添加α-MOS來研究其對AFB1促進(jìn)SIV復(fù)制的干預(yù)作用及其作用機(jī)理。一、AFB1對SIV復(fù)制的影響研究本試驗中,我們首先檢測不同...

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【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號與縮略語
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 黃曲霉毒素B₁的研究進(jìn)展
        1. 霉菌毒素概述
        2. 黃曲霉毒素B₁(AFB₁)概述
            2.1 AFB₁的來源
            2.2 AFB₁的分布
            2.3 AFB₁的作用機(jī)制
            2.4 AFB₁在動物體內(nèi)的代謝和影響因素
        3. AFB₁的危害
            3.1 AFB₁對機(jī)體的危害
            3.2 AFB₁對經(jīng)濟(jì)的危害
        4. AFB₁的防治
            4.1 AFB₁的人為管控
            4.2 AFB₁的化學(xué)防治
            4.3 AFB₁的生物防治
            4.4 AFB₁的其他防治方法
        參考文獻(xiàn)
    第二章 豬流感病毒的研究進(jìn)展
        1. 流感病毒概述
        2. 豬流感病毒(SIV)概述
            2.1 SIV的易感動物
            2.2 SIV感染的癥狀
            2.3 影響SIV感染的因素
        3. SIV感染的防治策略
            3.1 SIV感染的預(yù)防策略
            3.2 SIV感染的治療策略
        參考文獻(xiàn)
    第三章 甘露寡糖的研究進(jìn)展
        1. 甘露寡糖概述
        2. 酵母來源甘露寡糖(A-MOS)概述
            2.1 α-MOS的來源和制備
            2.2 α-MOS的應(yīng)用
            2.3 α-MOS的作用機(jī)制
        3. A-MOS對機(jī)體的影響
            3.1 α-MOS對仔豬生產(chǎn)性能的影響
            3.2 α-MOS對腸道形態(tài)和微生物的影響
            3.3 α-MOS對免疫功能的影響
            3.4 α-MOS對霉菌毒素毒性的影響
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗研究
    第四章 黃曲霉毒素B₁對豬流感病毒復(fù)制的影響研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            1.6 病毒培養(yǎng)和擴(kuò)增
            1.7 細(xì)胞活力測定
            1.8 細(xì)胞乳酸脫氫酶檢測
            1.9 細(xì)胞凋亡測定
            1.10 病毒滴度檢測
            1.11 動物試驗設(shè)計
            1.12 HE染色試驗
            1.13 熒光定量PCR檢測
            1.14 免疫印跡試驗
            1.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2. 結(jié)果
            2.1 不同濃度AFB₁對MDCK、A549和PAMs活性的影響
            2.2 AFB₁促進(jìn)SIV在MDCK、A549和PAMs上復(fù)制
            2.3 AFB₁加劇SIV在小鼠肺臟中感染
            2.4 AFB₁加劇SIV感染所致肺組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的TLRS通路研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            1.6 病毒培養(yǎng)和擴(kuò)增
            1.7 熒光定量PCR檢測
            1.8 免疫印跡試驗
            1.9 小RNA干擾
            1.10 動物試驗設(shè)計
            1.11 HE染色試驗
            1.12 免疫組化染色
            1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2. 結(jié)果
            2.1 AFB₁上調(diào)SIV感染的PAMs上的TLR4-NFκB-TNFα表達(dá)
            2.2 TLR4干擾和NFκB抑制劑阻礙AFB₁促進(jìn)SIV在PAMs上復(fù)制
            2.3 AFB₁上調(diào)SIV感染小鼠脾臟中的TLR4-NFκB-TNFα表達(dá)
            2.4 TLR4敲除和抑制劑削弱AFB₁促進(jìn)的SIV感染及其所致炎癥和肺組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的巨噬細(xì)胞極化機(jī)制研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            1.6 病毒培養(yǎng)和擴(kuò)增
            1.7 動物試驗設(shè)計
            1.8 小鼠肺支氣管灌洗
            1.9 HE染色試驗
            1.10 熒光定量PCR檢測
            1.11 免疫印跡試驗
            1.12 MTT法測定細(xì)胞增殖活性
            1.13 流式測定細(xì)胞凋亡情況
            1.14 病毒滴度檢測
            1.15 免疫熒光
            1.16 試劑盒檢測NO、TNF-α和IL-10
            1.17 掃描電鏡觀察細(xì)胞極化
            1.18 流式細(xì)胞術(shù)鑒定巨噬細(xì)胞極化
            1.19 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2. 結(jié)果
            2.1 低劑量AFB₁加劇SIV感染所致肺組織損傷
            2.2 低劑量AFB₁促進(jìn)SIV在小鼠肺臟中復(fù)制
            2.3 低劑量AFB₁加劇SIV感染所致炎癥和脾組織損傷
            2.4 低劑量AFB₁促進(jìn)SIV感染的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞向M2極化
            2.5 不同濃度AFB₁和LPS對PAMs活性的影響
            2.6 低濃度AFB₁促進(jìn)SIV在PAMs上復(fù)制
            2.7 低濃度AFB₁促進(jìn)SIV感染的PAMs向M2型極化
            2.8 LPS刺激逆轉(zhuǎn)M2極化從而降低AFB₁促進(jìn)的SIV復(fù)制
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第七章 甘露寡糖對黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的干預(yù)作用研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞和病毒培養(yǎng)
            1.6 動物試驗設(shè)計
            1.7 HE染色試驗
            1.8 MTT法測定細(xì)胞增殖活性
            1.9 中性紅法測定細(xì)胞吞噬作用
            1.10 DAPI染色測定細(xì)胞活性
            1.11 病毒滴度檢測
            1.12 免疫熒光試驗
            1.13 熒光定量PCR檢測
            1.14 免疫印跡試驗
            1.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2. 結(jié)果
            2.1 不同濃度α-MOS對PAMs活性的影響
            2.2 α-MOS阻礙AFB₁促進(jìn)SIV在PAMs上復(fù)制
            2.3 α-MOS削弱AFB₁促進(jìn)SIV在小鼠肺臟中復(fù)制
            2.4 α-MOS緩解AFB₁促進(jìn)SIV復(fù)制所致小鼠肺和脾組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第八章 甘露寡糖干預(yù)黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的機(jī)理研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞和病毒培養(yǎng)
            1.6 動物試驗設(shè)計
            1.7 病毒滴度檢測
            1.8 免疫熒光試驗
            1.9 免疫組化染色
            1.10 熒光定量PCR檢測
            1.11 免疫印跡試驗
            1.12 試劑盒檢測TNF-α
            1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2. 結(jié)果
            2.1 α-MOS阻礙AFB₁上調(diào)TLR4-NFκB通路在SIV感染的PAMs上表達(dá)
            2.2 TLR4過表達(dá)逆轉(zhuǎn)α-MOS對AFB₁促進(jìn)的SIV感染及其炎性反應(yīng)的抑制性作用
            2.3 TNF-α體外添加對AFB₁促進(jìn)的SIV復(fù)制無顯著影響
            2.4 α-MOS降低AFB₁上調(diào)TLR4-NFκB通路在SIV感染的小鼠脾臟和肺臟中表達(dá)
            2.5 α-MOS以TLR4依賴性方式減輕AFB₁促進(jìn)的SIV感染和組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
本文創(chuàng)新點
致謝
攻讀博士學(xué)位期間科研成果



本文編號：3930970