實(shí)際生產(chǎn)中,高產(chǎn)奶牛常被飼喂高精料比例日糧以維持其產(chǎn)奶所需的能量供應(yīng),然而長期高精料日糧飼喂會(huì)誘導(dǎo)奶牛亞急性瘤胃酸中毒(SARA)的發(fā)生。同樣,外源大腸桿菌感染誘發(fā)的乳房炎在實(shí)際生產(chǎn)中也會(huì)造成奶牛的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。LPS是引起這些反應(yīng)的主要致炎因子,主要誘導(dǎo)肝臟的急性期反應(yīng)。然而伴隨肝臟的炎癥反應(yīng),脂代謝關(guān)鍵酶SCD1的下調(diào)也是重要的脂代謝紊亂信號。本文以飼喂高精料日糧誘發(fā)SARA的荷斯坦奶牛及外源乳腺接種Ecoli的奶牛模型進(jìn)行試驗(yàn),揭示了肝臟中引起的炎癥反應(yīng)及單不飽和脂肪酸合成限速酶SCD1下調(diào)的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制,并以牛肝細(xì)胞為模型在體外驗(yàn)證了丁酸鈉抑制LPS刺激細(xì)胞后產(chǎn)生的負(fù)面影響。1.短期高谷物日糧對荷斯坦奶牛和澤西奶牛的系統(tǒng)性肝臟炎癥和代謝的影響長期高精料日糧飼喂通常會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)性炎癥反應(yīng),例如急性期蛋白和其它生物標(biāo)志物的改變,而這些改變通常發(fā)生在血漿和具免疫功能的組織器官中,如肝臟。然而,對于急性飼喂高谷物日糧所產(chǎn)生的系統(tǒng)性機(jī)體反應(yīng)的研究還不清楚。因此,本試驗(yàn)采用六頭荷斯坦奶牛和六頭澤西奶牛作為試驗(yàn)對象,采取2×2拉丁方設(shè)計(jì)。試驗(yàn)周期為10天,分為四個(gè)階段,階段一(S1)為第...

【文章頁數(shù)】：182 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 SARA的誘發(fā)機(jī)制及其并發(fā)癥和預(yù)防措施
        1 SARA的誘發(fā)機(jī)制
            1.1 導(dǎo)致瘤胃pH降低的原因
        2. SARA狀態(tài)下的炎癥反應(yīng)及繼發(fā)癥
            2.1 SARA引起的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)
            2.2 SARA引起的繼發(fā)癥種類
        3.SARA的臨床診斷和預(yù)防
        參考文獻(xiàn)
    第二章 SARA所產(chǎn)生的LPS引起天然免疫反應(yīng)及對脂代謝基因表達(dá)的影響
        1 瘤胃微生物及細(xì)菌免疫原
            1.1 LPS一般結(jié)構(gòu)
            1.2 LPS的生物活性
            1.3 LPS主要誘導(dǎo)的炎癥信號通路
        2.硬脂酰輔酶A去飽和酶的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)活性
            2.1 SCD1對脂肪酸生成和氧化的調(diào)節(jié)
            2.2 SCD1與胰島素/Akt信號通路相關(guān)
            2.3 SCD1與炎癥
        3 SARA狀態(tài)下的表觀遺傳修飾機(jī)制
            3.1 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制
            3.2 表觀遺傳修飾與基因表達(dá)
            3.3 內(nèi)源LPS引起的基因的表觀遺傳修飾
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第三章 短期飼喂高谷物日糧對荷斯坦奶牛和澤西奶牛的系統(tǒng)性肝臟炎癥和代謝反應(yīng)的影響
        1 材料與方法
            1.1 主要儀器與試劑
            1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.4 血漿生化指標(biāo)檢測
            1.5 RNA提取與定量
            1.6 蛋白提取和定量
            1.7 統(tǒng)計(jì)
        2 結(jié)果與分析
            2.1 血液生化與肝臟甘油三酯
            2.2 肝臟基因表達(dá)情況
            2.3 mTOR信號通路蛋白表達(dá)
        3 討論
            3.1 血漿中炎癥的生物標(biāo)志物影響
            3.2 與炎癥反應(yīng)和代謝有關(guān)的基因表達(dá)
            3.3 mTOR信號通路
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第四章 長期高精料日糧飼喂誘導(dǎo)的荷斯坦奶牛SARA對肝臟內(nèi)SCD1的表達(dá)及脂肪酸組分的影響
        1 材料與方法
            1.1 主要儀器與試劑
            1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.3 樣品收集
            1.4 LPS及生化指標(biāo)檢測
            1.5 氣相色譜分析脂肪酸含量
            1.6 RNA提取,cDNA合成和實(shí)時(shí)熒光PCR
            1.7 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
            1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2 結(jié)果與分析
            2.1 瘤胃pH,血漿和瘤胃LPS濃度及乳成分分析
            2.2 瘤胃液中的VFA含量和血漿中生化指標(biāo)
            2.3 瘤胃液和肝靜脈血漿中的長鏈脂肪酸含量
            2.4 參與肝臟脂質(zhì)代謝的基因表達(dá)
            2.5 SCD1蛋白在肝臟中的表達(dá)
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第五章 E.coli誘導(dǎo)的奶牛乳房炎對肝臟及乳腺中SCD1基因表達(dá)的影響及其機(jī)制
        1 材料與方法
            1.1 主要儀器與試劑
            1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.3 染色質(zhì)收縮狀態(tài)測定
            1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.5 報(bào)告基因構(gòu)建
            1.6 轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)構(gòu)建
            1.7 細(xì)胞培養(yǎng),轉(zhuǎn)染和報(bào)告基因活性的測定
            1.8 5'-cDNA末端快速擴(kuò)增(5'-RACE)實(shí)驗(yàn)
            1.9 啟動(dòng)子上轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析
            1.10 統(tǒng)計(jì)
        2 結(jié)果
            2.1 大腸桿菌乳房炎對肝臟和乳腺中SCD1的表達(dá)影響
            2.2 SCD1啟動(dòng)子的定位以及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的推測
            2.3 急性乳房炎對肝臟中SCD1啟動(dòng)子的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響
            2.4 大腸桿菌感染對乳腺和肝臟中SREBP1a和C/EBP因子的基因表達(dá)
            2.5 SREBP1a和C/EBPs轉(zhuǎn)錄因子對SCD1啟動(dòng)子活性的作用
            2.6 C/EBP結(jié)合位點(diǎn)對SCD1啟動(dòng)子活性的影響
            2.7 C/EBPα與C/EBPβ對SCD1啟動(dòng)子活性的影響機(jī)制
            2.8 SREBP1a和C/EBPα對SCD1啟動(dòng)子活性的共同作用結(jié)果
        3 討論
            3.1 C/EBP-α和-β在乳腺細(xì)胞和肝細(xì)胞中對SCD1啟動(dòng)子活性的影響
            3.2 C/EBPβ對SCD1啟動(dòng)子活性的間接影響機(jī)制
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第六章 長期飼喂高精料日糧引起的荷斯坦奶牛肝臟中SCD1基因表達(dá)下調(diào)的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制
        1 材料與方法
            1.1 主要儀器和試劑
            1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.3 瘤胃pH和肝臟中甘油三酯含量檢測
            1.4 脂肪酸檢測
            1.5 RNA提取,cDNA合成和實(shí)時(shí)熒光PCR
            1.6 染色質(zhì)重塑實(shí)驗(yàn)
            1.7 SCD1啟動(dòng)子DNA甲基化實(shí)驗(yàn)
            1.8 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
            1.9 染色質(zhì)免疫共沉淀分析
            1.10 統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 瘤胃pH值分析
            2.2 肝臟甘油三酯含量及血漿中Δ9長鏈脂肪酸含量的變化
            2.3 SARA狀態(tài)下脂代謝和炎癥反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)
            2.4 SARA狀態(tài)下對SCD1啟動(dòng)子的染色質(zhì)重塑的影響
            2.5 SCD1啟動(dòng)子特定位點(diǎn)的DNA甲基化分析
            2.6 誘導(dǎo)SARA對肝臟中SREBP1c在SCD1啟動(dòng)子上結(jié)合的影響
        3 討論
            3.1 SCD1在反芻動(dòng)物肝臟脂質(zhì)代謝中的作用
            3.2 SREBP1的表達(dá)豐度及其在SCD1啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合率
            3.3 誘導(dǎo)SARA對奶牛肝臟脂肪酸分解代謝的影響
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第七章 丁酸鈉對LPS誘導(dǎo)的奶牛肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)及脂代謝酶表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
        1 材料與方法
            1.1 主要儀器和試劑
            1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.4 細(xì)胞活力檢測
            1.5 流式細(xì)胞檢測細(xì)胞凋亡
            1.6 ELISA檢測細(xì)胞因子
            1.7 RNA提取和實(shí)時(shí)熒光PCR
            1.8 細(xì)胞免疫熒光分析
            1.9 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
            1.10 統(tǒng)計(jì)
        2 結(jié)果與分析
            2.1 不同劑量的LPS和SB處理對牛肝細(xì)胞活力的影響
            2.2 丁酸鈉對LPS刺激牛肝細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響
            2.3 0.5mM/L的SB和4μg/mL的LPS對肝細(xì)胞凋亡的作用
            2.4 丁酸鈉對肝細(xì)胞經(jīng)LPS處理后的炎癥和脂代謝基因表達(dá)影響
            2.5 丁酸鈉預(yù)處理對NF-κB信號通路活化的影響
            2.6 丁酸鈉預(yù)處理對LPS刺激的肝細(xì)胞中組蛋白H3乙�；挠绊�
            2.7 丁酸鈉預(yù)處理對牛肝細(xì)胞中與脂肪酸代謝有關(guān)的蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
本論文創(chuàng)新點(diǎn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3865202