淫羊藿(Epimedium davidii Franch)為我國傳統(tǒng)的補益中草藥,具有“益精氣,堅筋骨,補腰膝,強心力”之功效。隨著近年來對其藥理學功能研究的日益深入,人們發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷(Icariin,ICA)為淫羊藿的主要藥理有效成分。諸多臨床和實驗藥理研究表明,ICA具有抗病毒、抗氧化、免疫增強等效果。然而,由于黃酮類成分水溶性較差,在實際臨床應用時經(jīng)常會造成一定的不便。為了提高ICA的生物利用率,更好地發(fā)揮其抗病毒效果,便于在臨床推廣應用,通過混合磷酸鹽法成功的對ICA進行了磷酸化修飾,得到磷酸化淫羊藿苷(phosphated Icariin,pICA)。在本項目組前期的試驗中,我們發(fā)現(xiàn)感染1型鴨肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV-1)可以導致雛鴨發(fā)生嚴重的肝損傷,且這種肝損傷與其體內(nèi)嚴重的氧化應激存在顯著的相關(guān)性,這說明DHAV-1感染雛鴨引起的炎癥損傷與氧化應激損傷有著密切聯(lián)系,當引入ICA與pICA治療之后,雛鴨體內(nèi)炎癥因子水平顯著下降、抗氧化酶活性明顯提升,最終存活率得到顯著提升,表現(xiàn)出良好的治療效果,這種療效可能與ICA與pICA的抗炎癥作...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號及縮略語
緒論
文獻綜述
    第一章 1型鴨肝炎病毒研究進展
        1 DHAV的分類及其導致的鴨病毒性肝炎流行病學和臨床癥狀
            1.1 DHAV的分類
            1.2 流行病學
            1.3 臨床癥狀
            1.4 致病機理
        2 診斷方法
            2.1 中和實驗
            2.2 電鏡檢測
            2.3 酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)
            2.4 分子生物學診斷
            2.5 其他診斷方法
        3 防治措施
            3.1 預防手段
            3.2 治療措施
        參考文獻
    第二章 淫羊藿苷和化學修飾的研究進展及其抗DHAV-1的前期研究
        1 淫羊藿苷的研究進展
            1.1 淫羊藿的分布及主要活性成分
            1.2 ICA的藥理作用
            1.3 ICA在獸醫(yī)方面的應用
        2 化學修飾的研究進展
        3 ICA與其化學修飾產(chǎn)物抗DHAV-1的前期研究
            3.1 ICA的磷酸化修飾
            3.2 ICA與pICA抗DHAV-1所致雛鴨肝損傷研究
            3.3 ICA和pICA抗DHAV-1造成的雛鴨氧化應激作用
            3.4 ICA和pICA抗DHAV-1感染鴨胚肝細胞及增殖的作用
            3.5 ICA和pICA免疫增強作用研究
            3.6 ICA與pICA抗DHAV-1感染雛鴨的前期研究總結(jié)
        4 本試驗研究目的
        參考文獻
試驗研究
    第三章 ICA與pICA緩解DHAV-1誘導DEHs炎癥反應作用的研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗藥物
            1.2 主要試劑及材料
            1.3 主要儀器
            1.4 鴨胚肝細胞(Duck embryonic hepatocytes,DEHs)的制備
            1.5 ICA與pICA對DEHs分泌炎癥因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的影響
            1.6 ICA與pICA對炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因mRNA表達的影響
            1.7 ICA與pICA對TLR家族相關(guān)因子基因mRNA表達的影響
            1.8 ICA與pICA對TLR家族及NF-κB相關(guān)蛋白表達的影響
            1.9 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果
            2.1 ICA與pICA對DEHs分泌炎癥因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的影響
            2.2 ICA與pICA對炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因mRNA表達的影響
            2.3 ICA與pICA對TLR家族相關(guān)因子基因mRNA表達的影響
            2.4 ICA與pICA對TLR家族及NF-κB相關(guān)蛋白表達的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
    第四章 ICA與pICA緩解DHAV-1誘導DEHs氧化應激作用的研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗藥物
            1.2 主要試劑及材料
            1.3 主要儀器
            1.4 DEHs的制備
            1.5 ICA與pICA對DHAV-1感染鴨胚肝細胞氧化應激相關(guān)指標的影響
            1.6 H₂O₂致DEHs氧化損傷的有效濃度篩選
            1.7 ICA與pICA對H₂O₂誘導的氧化損傷DEHs抗DHAV-1感染的能力的影響
            1.8 H₂O₂誘導的氧化損傷對DHAV-1感染鴨胚肝細胞毒力的影響
            1.9 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果
            2.1 ICA與pICA對DHAV-1感染鴨胚肝細胞氧化應激相關(guān)指標的影響
            2.2 H₂O₂誘導DEHs氧化損傷有效濃度篩選結(jié)果
            2.3 ICA與pICA對H₂O₂誘導的氧化損傷DEHs抗DHAV-1感染的能力的影響
            2.4 H₂O₂誘導的氧化損傷對DHAV-1感染鴨胚肝細胞毒力的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
    第五章 ICA與pICA對DHAV-1誘導的DEHs氧化應激的調(diào)控機制
        1 材料與方法
            1.1 試驗藥物
            1.2 主要試劑及材料
            1.3 主要儀器
            1.4 DEHs的制備
            1.5 ICA與pICA對DEHs中SOD、GSH-Px蛋白表達的影響
            1.6 ICA與pICA對抗氧化相關(guān)基因mRNA表達的影響
            1.7 ICA與pICA對MAPKs信號通路相關(guān)蛋白表達的影響
            1.8 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果
            2.1 ICA與pICA對DEHs中SOD和GSH-Px蛋白表達的影響
            2.2 ICA與pICA對抗氧化相關(guān)基因mRNA表達的影響
            2.3 ICA與pICA對MAPKs信號通路相關(guān)蛋白表達的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
    第六章 ICA與pICA緩解DHAV-1誘導的DEHs線粒體損傷作用的研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗藥物
            1.2 主要試劑及材料
            1.3 主要儀器
            1.4 DEHs的制備
            1.5 ICA與pICA對鴨胚肝細胞線粒體膜電位的影響
            1.6 ICA與pICA對鴨胚肝細胞線粒體內(nèi)ROS的影響
            1.7 ICA與pICA對鴨胚肝細胞細胞色素C氧化酶(COX)活性的影響
            1.8 ICA與pICA對鴨胚肝細胞琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的影響
            1.9 ICA與pICA對鴨胚肝細胞內(nèi)ATP含量的影響
            1.10 ICA與pICA對鴨胚肝細胞內(nèi)Ca²⁺濃度的影響
            1.11 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果
            2.1 ICA與pICA對鴨胚肝細胞線粒體膜電位的影響
            2.2 ICA與pICA對鴨胚肝細胞線粒體內(nèi)ROS水平的影響
            2.3 ICA與pICA對鴨胚肝細胞細胞色素C氧化酶(COX)活性的影響
            2.4 ICA與pICA對鴨胚肝細胞琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的影響
            2.5 ICA與pICA對鴨胚肝細胞內(nèi)ATP含量的影響
            2.6 ICA與pICA對鴨胚肝細胞內(nèi)Ca²⁺濃度的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
    第七章 ICA與pICA緩解DHAV-1誘導DEHs細胞凋亡作用的研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗藥物
            1.2 主要試劑及材料
            1.3 主要儀器
            1.4 DEHs的制備
            1.5 ICA與pICA對DHAV-1誘導的鴨胚肝細胞凋亡的影響
            1.6 ICA與pICA對鴨胚肝細胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達的影響
            1.7 ICA與pICA對鴨胚肝細胞凋亡相關(guān)蛋白表達的影響
            1.8 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果
            2.1 ICA與pICA對DHAV-1誘導的鴨胚肝細胞凋亡的影響
            2.2 ICA與pICA對鴨胚肝細胞凋亡相關(guān)基因表達的影響
            2.3 ICA與pICA對鴨胚肝細胞凋亡相關(guān)蛋白表達的影響
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
    第八章 ICA與pICA緩解DHAV-1抑制DEHs細胞增殖作用的研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗藥物
            1.2 主要試劑及材料
            1.3 主要儀器
            1.4 DEHs的制備
            1.5 ICA與pICA對鴨胚肝細胞細胞周期的影響
            1.6 ICA與pICA對鴨胚肝細胞增殖相關(guān)基因表達的影響
            1.7 ICA與pICA對鴨胚肝細胞PCNA蛋白表達的影響
            1.8 ICA與pICA對鴨胚肝細胞細胞增殖相關(guān)通路蛋白表達的影響
            1.9 炎癥損傷、氧化應激損傷、線粒體損傷、細胞凋亡及細胞增殖評價指標間相關(guān)性分析
            1.10 統(tǒng)計方法
        2 結(jié)果
            2.1 ICA與pICA對鴨胚肝細胞細胞周期的影響
            2.2 ICA與pICA對鴨胚肝細胞增殖相關(guān)基因mRNA表達的影響
            2.3 ICA與pICA對鴨胚肝細胞PCNA蛋白表達的影響
            2.4 ICA與pICA對鴨胚肝細胞細胞增殖相關(guān)通路蛋白表達的影響
            2.5 炎癥損傷、氧化應激損傷、線粒體損傷、細胞凋亡及細胞增殖評價指標間相關(guān)性分析
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
結(jié)論
論文創(chuàng)新點
攻讀學位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3847423