發(fā)布時間：2023-04-22 22:25

　　家蠅(Musca domestica L.)屬于雙翅目、環(huán)裂亞目、蠅科、家蠅屬。作為一種重要的病媒生物,能夠傳播多種疾病,如痢疾、霍亂、沙眼等,嚴重威脅人畜健康。目前,化學防治仍是治理家蠅最有效的方法,由于其分布范圍廣、繁殖速度快、適應(yīng)能力強,隨著殺蟲藥劑的廣泛大量使用,家蠅已對多種衛(wèi)生害蟲常用殺蟲劑產(chǎn)生抗性。前期生物測定發(fā)現(xiàn),在實驗室反選獲得的家蠅馬拉硫磷敏感品系中,雄蠅抗性顯著高于雌蠅。本文以實驗室的家蠅馬拉硫磷敏感品系和抗性近等位基因系為研究對象,結(jié)合遺傳雜交,利用生物測定、生化、分子生物學及計算機模擬技術(shù),對羧酸酯酶介導的家蠅馬拉硫磷抗性進行了系統(tǒng)研究,旨在闡明家蠅對馬拉硫磷產(chǎn)生性別抗性差異的機制,為制定合理有效的害蟲防治策略提供理論基礎(chǔ)。增效劑試驗表明,與敏感品系雌蠅相比,DEF對敏感品系雄蠅和抗性雌雄蠅的增效作用明顯,增效比均達到100倍以上,初步推斷酯酶參與家蠅馬拉硫磷抗性及性別抗性差異的形成。通過克隆家蠅羧酸酯酶基因MdαE7的ORF全長和序列比對,發(fā)現(xiàn)與敏感種群相比,抗性種群中共存在7個穩(wěn)定的突變位點:Ser250-Thr、Trp251-Ser、Met303-He、L...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 有機磷類殺蟲藥劑概述
        1.1.1 有機磷類殺蟲藥劑發(fā)展小史
        1.1.2 有機磷類殺蟲藥劑的作用機制
        1.1.3 家蠅對有機磷類殺蟲藥劑的抗性現(xiàn)狀
    1.2 羧酸酯酶介導的昆蟲抗藥性機制
        1.2.1 羧酸酯酶概述
        1.2.2 羧酸酯酶與昆蟲抗藥性關(guān)系
    1.3 家蠅性別與抗藥性關(guān)系
        1.3.1 家蠅性別決定機制
        1.3.2 家蠅性別調(diào)控方式
        1.3.3 家蠅性別抗性差異研究
    1.4 桿狀病毒表達系統(tǒng)
        1.4.1 桿狀病毒
        1.4.2 桿狀病毒表達載體
    1.5 本文研究的目的的和意義
第二章 DEF對家蠅馬拉硫磷抗性的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試蟲源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 生物測定
        2.1.4 增效劑試驗
    2.2 結(jié)果于分析
        2.2.1 家蠅馬拉硫磷敏感和抗性品系的抗性水平
        2.2.2 增效劑試驗結(jié)果
    2.3 討論
第三章 家蠅羧酸酯酶基因MdαE7的克隆及分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試蟲源
        3.1.2 主要試劑及材料
        3.1.3 相關(guān)試劑配制
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 Total RNA提取及cDNA第一條鏈的合成
        3.1.6 PCR擴增、回收、連接和轉(zhuǎn)化
        3.1.7 陽性克隆鑒定
        3.1.8 酯酶三維建模
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 序列分析
        3.2.3 三維結(jié)構(gòu)分析
    3.3 討論
第四章 羧酸酯酶基因MdαE7突變與馬拉硫磷抗性相關(guān)性及性別連鎖分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試蟲源
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 遺傳雜交
        4.1.5 馬拉硫磷藥劑處理
        4.1.6 單頭家蠅Total RNA提取及cDNA第一條鏈的合成
        4.1.7 PCR擴增及測序
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 不同遺傳世代家蠅對馬拉硫磷的抗性水平
        4.2.2 MdαE7基因各突變位點頻率與馬拉硫磷抗性的關(guān)系
        4.2.3 MdαE7基因與雄性決定因子(M因子)連鎖分析
    4.3 討論
第五章 家蠅羧酸酯酶MdαE7外源表達
    5.1 材料與方法
        5.1.1 供試蟲源
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
        5.1.4 羧酸酯酶表達載體構(gòu)建
        5.1.5 定點突變
        5.1.6 細胞培養(yǎng)
        5.1.7 重組病毒載體構(gòu)建及細胞轉(zhuǎn)染
        5.1.8 P2代重組病毒液擴增及滴度測定
        5.1.9 羧酸酯酶外源表達及表達產(chǎn)物制備
        5.1.10 羧酸酯酶外源表達驗證
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 羧酸酯酶表達載體驗證
        5.2.2 重組病毒載體鑒定
        5.2.3 P2代重組病毒滴度
        5.2.4 羧酸酯酶表達產(chǎn)物電泳圖譜
    5.3 討論
第六章 家蠅羧酸酯酶MdαE7及其突變體的功能分析
    6.1 材料與方法
        6.1.1 主要試劑
        6.1.2 主要儀器
        6.1.3 細胞毒性試驗
        6.1.4 羧酸酷酶模式底物的水解活性測定
        6.1.5 馬拉硫磷的代謝活性測定
        6.1.6 羧酸酯酶與模式底物和馬拉硫磷的分子對接分析
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 馬拉硫磷對細胞毒性試驗結(jié)果
        6.2.2 羧酸酯酶表達產(chǎn)物對模式底物的水解活性
        6.2.3 羧酸酯酶表達產(chǎn)物對馬拉硫磷的代謝活性
        6.2.4 羧酸酯酶與模式底物和馬拉硫磷的分子對接結(jié)果
    6.3 討論
第七章 家蠅羧酸酯酶基因MdαE7表達水平研究
    7.1 材料與方法
        7.1.1 供試蟲源
        7.1.2 主要試劑及材料
        7.1.3 主要儀器
        7.1.4 基因組提取
        7.1.5 Total RNA提取及cDNA第一條鏈的合成
        7.1.6 標準曲線制作
        7.1.7 熒光定量PCR反應(yīng)
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 標準曲線生成
        7.2.2 家蠅羧酸酯酶基因MdαE7的DNA和mRNA表達量分析
    7.3 討論
全文總結(jié)
    1. 研究總結(jié)
    2. 創(chuàng)新點
    3. 問題與展望
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3798515