豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）引起的一種高度接觸性傳染病。PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科,是一種單股正鏈RNA病毒,基因組全長為15kb左右,可編碼至少10個(gè)開放閱讀框。PRRSV有兩種基因型,分別為基因1型和基因2型。我國目前普遍流行的高致病性PRRSV毒株大部分屬于Lineage8（JXA1、HuN4等）。Lineage1,也被稱作是NADC30-like株,于2013年開始在我國境內(nèi)流行,并再次引起了PRRS疫情。Lineage1和Lineage8均屬于基因2型。豬2型圓環(huán)病毒（Porcine Circovirus 2,PCV2）是一種單股負(fù)鏈DNA病毒,屬于環(huán)狀病毒科,是引起豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病的主要病原體。PCV2單獨(dú)感染很少引起臨床癥狀,常見與PRRSV發(fā)生混合感染。PRRSV和PCV2混合感染,與兩種病毒單獨(dú)感染相比能夠加重疾病,產(chǎn)生許多種明顯的... 

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 前言 第一章 廣西壯族自治區(qū)PRRSV病原學(xué)檢測
1.1 材料
    1.1.1 細(xì)胞
    1.1.2 病料采集
    1.1.3 主要試劑
    1.1.4 主要儀器設(shè)備
    1.1.5 相關(guān)試劑配制
    1.1.6 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.1.7 分子生物學(xué)軟件
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    1.2.1 病料的采集與處理
    1.2.2 組織樣品總RNA提取
    1.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
    1.2.4 PCR檢測
    1.2.5 PRRSVPCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收
    1.2.6 pEASY-Bluntcloning載體的構(gòu)建
    1.2.7 PRRSV病毒的分離鑒定
    1.2.8 PRRSV致病性分析
1.3 結(jié)果
    1.3.1 PRRSVRT-PCR檢測結(jié)果
    1.3.2 PRRSV主要基因片段遺傳進(jìn)化分析及氨基酸序列比對(duì)
    1.3.3 PRRSV分離鑒定
    1.3.4 GXBB16-1致病性檢測
    1.3.5 GXBB16-1全基因序列分析
1.4 討論
1.5 小結(jié) 第二章 廣西壯族自治區(qū)PCV3病原學(xué)檢測
2.1 材料
    2.1.1 病料采集
    2.1.2 主要試劑
    2.1.3 相關(guān)試劑配制
    2.1.4 引物設(shè)計(jì)與合成
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2.1 病料的采集和處理
    2.2.2 組織樣品中基因組DNA提取
    2.2.3 PCR檢測DNA樣品中的PCV
    2.2.4 pMD18T載體的構(gòu)建
    2.2.5 pMD18T載體轉(zhuǎn)化Trans5α感受態(tài)細(xì)胞
    2.2.6 質(zhì)粒PCR、酶切鑒定
    2.2.7 RealtimePCR反應(yīng)
    2.2.8 PCV3熒光定量檢測方法的建立
    2.2.9 PCV3全基因序列擴(kuò)增測序
    2.2.10 PCV3全基因序列生物信息學(xué)分析
2.3 結(jié)果
    2.3.1 PCV3熒光定量檢測方法的建立
    2.3.2 廣西地區(qū)PCV3基因全長測序及遺傳進(jìn)化分析
2.4 討論
2.5 小結(jié) 第三章 豬IFITM抗PRRSV作用研究
3.1 材料方法
    3.1.1 毒株
    3.1.2 質(zhì)粒
    3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.1.4 主要試劑
    3.1.5 主要儀器設(shè)備
    3.1.6 引物設(shè)計(jì)與合成
3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2.1 原代豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)的分離
    3.2.2 豬原代外周血淋巴細(xì)胞(PBMC)的分離
    3.2.3 接毒
    3.2.4 接種PRRSV的PAM、PBMC細(xì)胞中IFITM基因表達(dá)變化
    3.2.5 豬IFITM慢病毒包裝
    3.2.6 Marc145嘌呤霉素敏感性實(shí)驗(yàn)
    3.2.7 慢病毒感染構(gòu)建Marc145-IFITM穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
    3.2.8 熒光定量PCR分析IFITM抑制PRRSV復(fù)制作用
    3.2.9 間接免疫熒光分析IFITM抑制PRRSV復(fù)制作用
    3.2.10 Westernblot分析IFITM抑制PRRSV復(fù)制作用
    3.2.11 siRNA轉(zhuǎn)染
3.3 結(jié)果
    3.3.1 熒光定量PCR引物擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性判斷
    3.3.2 感染GXBB16-1后的PAM細(xì)胞IFITM基因轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)
    3.3.3 感染GXBB16-1后的PBMC細(xì)胞IFITM基因轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)
    3.3.4 豬IFITM分子氨基酸序列比對(duì)
    3.3.5 Marc145細(xì)胞對(duì)嘌呤霉素敏感性檢測
    3.3.6 Marc145-IFITMs細(xì)胞系構(gòu)建及鑒定
    3.3.7 IFITM在Marc145細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)對(duì)PRRSV復(fù)制的影響
    3.3.8 SiRNA干擾效率檢測
    3.3.9 敲低IFITM3的表達(dá)對(duì)病毒復(fù)制的影響
3.4 討論
3.5 小結(jié) 第四章 結(jié)論與展望 參考文獻(xiàn) 作者在學(xué)期間取得的學(xué)術(shù)成果 主要簡歷 致謝



本文編號(hào)：3734176