精原干細(xì)胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是雄性體內(nèi)唯一具有自我更新和分化功能的生殖細(xì)胞,又被稱為雄性生殖干細(xì)胞（male germline stem cells,mGSCs）。精原干細(xì)胞雖然只占雄性總體生殖細(xì)胞的0.03%,但它卻是雄性動(dòng)物源源不斷得產(chǎn)生精子,維持雄性生殖能力的基礎(chǔ)。奶山羊是我國一種重要的經(jīng)濟(jì)性家畜,為人類提供豐富的奶制品和肉制品;同時(shí)它還是重要的生物反應(yīng)器。但生殖力低下極大的限制了奶山羊的發(fā)展和應(yīng)用。探索奶山羊精原干細(xì)胞自我更新、增殖和分化,在優(yōu)秀種質(zhì)資源的保存,和通過基因編輯技術(shù)獲得優(yōu)良奶山羊品系等方面具有重大意義。LIN28A是哺乳動(dòng)物體內(nèi)唯一一個(gè)同時(shí)具有冷休克結(jié)構(gòu)和CCHC鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白。它既可以結(jié)合DNA,在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因的表達(dá);又可以結(jié)合RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。LIN28A特異性表達(dá)在精原干細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,可以作為雄性生殖干細(xì)胞的生物學(xué)標(biāo)記。但其在奶山羊雄性生殖細(xì)胞中的表達(dá)和功能尚不清楚。在本研究中,我們探索了LIN28A在雄性奶山羊中的表達(dá)模式及其對(duì)奶山羊精原干細(xì)胞干性維持和自我更新的影響,并發(fā)現(xiàn)LIN28A... 

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
文獻(xiàn)綜述
    第一章 精原干細(xì)胞研究進(jìn)展
        1.1 精原干細(xì)胞的起源與發(fā)生
            1.1.1 精原干細(xì)胞的起源
            1.1.2 出生后雄性生殖細(xì)胞的發(fā)育
            1.1.3 精原干細(xì)胞的生物標(biāo)記
        1.2 精原干細(xì)胞自我更新的模型
            1.2.1 碎片化模型(fragmentation model)
            1.2.2 修訂的As模型(Revised As model)
        1.3 生精發(fā)生的調(diào)控
            1.3.1 精原干細(xì)胞niche的微環(huán)境
            1.3.2 維持SSCs的細(xì)胞信號(hào)通路
            1.3.3 mTORC1 信號(hào)通路在SSCs命運(yùn)決定中的作用
        1.4 表觀修飾調(diào)控精子發(fā)生和雄性生殖
            1.4.1 DNA起始甲基化修飾和去甲基化修飾
            1.4.2 染色質(zhì)重構(gòu)
        1.5 單細(xì)胞測序(single cell sequencing,SNS)
    第二章 LIN28A研究進(jìn)展
        2.1 Lin28 基因與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
        2.2 LIN28A的表達(dá)和功能
            2.2.1 LIN28A在個(gè)體發(fā)育中的表達(dá)模式
            2.2.2 LIN28A在多能干細(xì)胞的作用
            2.2.3 LIN28A在發(fā)育和生理的作用
            2.2.4 LIN28A與細(xì)胞分化的控制
        2.3 LIN28A作用的分子機(jī)制:兩個(gè)獨(dú)立的機(jī)制通路
            2.3.1 Let-7 依賴的通路
            2.3.2 不依賴于Let-7 的通路
        2.4 LIN28A在生殖中的功能
            2.4.1 LIN28A在雄性生殖中的作用
            2.4.2 LIN28A在雌性生殖中的作用
            2.4.3 LIN28A在 PGC發(fā)育的功能
            2.4.4 LIN28A在生殖相關(guān)疾病中的功能
        2.5 小結(jié)與展望
實(shí)驗(yàn)部分
    第三章 LIN28A在奶山羊體內(nèi)的表達(dá)模式
        3.1 材料和方法
            3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 LIN28A在奶山羊睪丸組織中的表達(dá)定位
            3.2.2 LIN28A在奶山羊不同組織的表達(dá)模式
            3.2.3 奶山羊LIN28A基因的克隆與生物信息學(xué)分析
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 LIN28A促進(jìn)奶山羊精原干細(xì)胞的自我更新和增殖
        4.1 材料與方法
            4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 異位過表達(dá)LIN28A的 mGSCs-I-SB細(xì)胞系的獲得
            4.2.2 異位過表達(dá)LIN28A促進(jìn)GmGSCs-I-SB細(xì)胞的增殖
            4.2.3 異位過表達(dá)LIN28A不導(dǎo)致GmGSCs-I-SB細(xì)胞的凋亡
            4.2.4 異位過表達(dá)LIN28A促進(jìn)GmGSCs-I-SB細(xì)胞的干性與自我更新
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
    第五章 過表達(dá)LIN28A的 GmGSCs-I-SB的體內(nèi)功能驗(yàn)證
        5.1 材料與方法
            5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2 結(jié)果
            5.2.1 LIN28A促進(jìn)GmGSCs-I-SB細(xì)胞體內(nèi)的增殖
            5.2.2 體內(nèi)移植的GmGSCs-I-SB不能完成分化
            5.2.3 LIN28A通過mTOR信號(hào)通路促進(jìn)奶山羊精原干細(xì)胞的增殖
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
    第六章 LIN28A促進(jìn)GmGSCs-I-SB干性維持、自我更新和增殖的機(jī)制探索
        6.1 材料與方法
            6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            6.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2 結(jié)果
            6.2.1 過表達(dá)LIN28A不影響H3K4ME1/2/3 修飾水平
            6.2.2 過表達(dá)LIN28A不改變基因組整體的甲基化修飾水平
            6.2.3 奶山羊5 號(hào)染色體上的NANOG基因是功能性基因
            6.2.4 奶山羊5 號(hào)染色體上的NANOG基因啟動(dòng)子區(qū)域的生物信息學(xué)分析
            6.2.5 LIN28A與 TET1 互作調(diào)控NANOG基因啟動(dòng)子的甲基化修飾水平
            6.2.6 LIN28A以不依賴Let-7g方式促進(jìn)NANOG的轉(zhuǎn)錄
        6.3 討論
        6.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)和進(jìn)一步研究計(jì)劃
    創(chuàng)新點(diǎn)
    進(jìn)一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介



本文編號(hào)：3665967