田鼠巴貝斯蟲(chóng)（Babesia microti）是最重要的人獸共患巴貝斯蟲(chóng)之一,經(jīng)蜱傳播,寄生于宿主紅細(xì)胞中。目前,防控巴貝斯蟲(chóng)病仍缺少疫苗和高效藥物,了解蟲(chóng)體與宿主的互作機(jī)制,研發(fā)新型防治技術(shù)已刻不容緩。外泌體是一種可攜帶蛋白質(zhì)、RNA和脂質(zhì)等多種生物活性物質(zhì)的膜性小囊泡,可以介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞遷移和細(xì)胞間通訊等功能。目前已有多種寄生蟲(chóng)外泌體在寄生蟲(chóng)-宿主互作中發(fā)揮重要作用的研究被報(bào)道,然而巴貝斯蟲(chóng)外泌體研究仍基本為空白。因此對(duì)田鼠巴貝斯蟲(chóng)外泌體的研究為深入解析巴貝斯蟲(chóng)與宿主互作機(jī)制提供基礎(chǔ)。此外,B.nicroti寄生于宿主紅細(xì)胞中,必然暴露于活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）,蟲(chóng)體依賴硫氧還蛋白系統(tǒng)抵抗宿主的氧化作用。硫氧還蛋白（thioredoxin,Trx）是一種廣泛存在于原核生物和真核生物中的小分子蛋白質(zhì),它和硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase,TrxR）、NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng),是硫氧還蛋白系統(tǒng)的重要組成部分。已有研究表明惡性瘧原蟲(chóng)（Plasmodium farciparum）Trx2和TrxR分子都是潛... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１外泌體的生物合成途徑??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??

２外泌體的組分??近年來(lái)，對(duì)外泌體的研究己然成為熱門(mén)，大量的研宄數(shù)據(jù)清晰的揭示了外泌??體的結(jié)構(gòu)和功能。外泌體主要組成包括脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸（圖２－２）。??然而，引發(fā)人們密切關(guān)注的是外泌體中的蛋白質(zhì)。許多外泌體均攜帶有部分??母細(xì)胞來(lái)源的共通的蛋白組分，同時(shí)又含有另外一部分蛋白可以反映細(xì)胞來(lái)源特??異性，可以反映母細(xì)胞的類(lèi)型和病理生理狀態(tài)［１Ｑ，１１］。普遍在各種外泌體中發(fā)現(xiàn)的??蛋白有血小板衍化生長(zhǎng)因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ），乳凝集素??（ｌａｃｔａｄｈｅｒｉｎ），跨膜蛋白家族和溶酶體相關(guān)膜蛋白－２Ｂ?（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ａｎｄ??ｌｙｓｏｓｏｍｅ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ－２Ｂ）?［１２，丨３］，膜轉(zhuǎn)運(yùn)和融合蛋白如膜耳關(guān)蛋白??（ａｎｎｅｘｉｎｓ）、小窩蛋白（ｆｌｏｔｉｌｌｉｎｓ）、ＧＴＰ?酶（ＧＴＰａｓｅｓ）、熱休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋ??ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、四分子交耳關(guān)體家方矣成員（ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎｓ，如?ＣＤ９，ＣＤ６３，ＣＤ８１，ＣＤ８２），多??１４??

（６）盡量棄去上層白色物質(zhì)，同時(shí)盡量吸取沉淀上面的絮狀物，剩余即為紅??細(xì)胞，１ＸＰＢＳ重懸清洗，２０００ｒｐｍ，４°Ｃ離心ｌＯｍｉｎ，重復(fù)三次。??１．２．２田鼠巴貝斯蟲(chóng)的短期體外培養(yǎng)??將１Ｘ１０７田鼠巴貝斯蟲(chóng)感染４周齡雌性昆明小鼠（約３０ｇ）。感染后７２ｈ，染??蟲(chóng)率約３０％－４０％時(shí)，應(yīng)用１．２．１中所述方法收集染蟲(chóng)紅細(xì)胞。將每ＩＸ?１〇７染蟲(chóng)紅??細(xì)胞用?ｌｍｌ?培養(yǎng)液（含有?４０％?ＦＢＳ、２５?ｍＭＨＥＰＥＳ、１％?Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ?的??ＲＰＭＩ?１６４０）重懸，置于３７１：，５％Ｃ０２環(huán)境中培養(yǎng)。??１．２．３免疫血清制備??將１Ｘ１０７田鼠巴貝斯蟲(chóng)感染４周齡雌性昆明小鼠（約３０ｇ）。感染后２１天，??對(duì)小鼠摘眼球采血，收集血液置于３７°Ｃ溫�。欤�，而后４°Ｃ靜置過(guò)夜。３０００ｒｐｍ，４°Ｃ??離心ｌＯｍｉｎ，吸取血清并每管２０ｕｌ分裝，－７０°Ｃ保存?zhèn)溆谩??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]田鼠巴貝斯蟲(chóng)兩個(gè)硫氧還蛋白基因的克隆及鑒定[D]. 熊康.上海師范大學(xué) 2016



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