抗生素的大規(guī)模及不合理使用加速了全球性的抗生素耐藥危機(jī)（Crisis of antibiotic resistance）。然而單細(xì)菌和細(xì)菌群體的耐藥性研究并不能解決不斷出現(xiàn)的抗生素治療失效問題。從宿主細(xì)胞,抗生素和病原菌三者相互作用的角度研究抗生素耐受性（Antibiotic tolerance）的產(chǎn)生可以為抗生素耐藥性的研究帶來新的策略。經(jīng)過長期的臨床實(shí)踐也表明抗生素耐受性的產(chǎn)生先于耐藥性并且促進(jìn)了耐藥性的進(jìn)化。因此,本論文深入研究了一種宿主細(xì)胞介導(dǎo)的抗生素耐受性（Cell-associated antibiotic tolerance）的發(fā)生機(jī)制。本研究首先表征了細(xì)胞外細(xì)菌包括蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus NVH0075/95）,糞腸球菌（Enterococcus faecalis ATCC29212）,金黃色葡萄球菌（Stphylococcus aureusATCC29213）,豬鏈球菌（Streptococcus suis CQ2B50）,大腸桿菌（Escherichia coli ATCC25922）,肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２抗菌藥作用靶點(diǎn)和耐藥性機(jī)制［１８］??抗生素可以根據(jù)其作用機(jī)制分類，一類抗生素耐藥的靶點(diǎn)同樣可以是其?

第一章緒論??中的關(guān)系可以為抗生素研究策略奠定基礎(chǔ)抗生素耐藥性（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ?ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）在前面的論述??中己經(jīng)說明，主要是通過遺傳突變或者獲得耐藥基因而產(chǎn)生耐藥性。如圖１－３?ａ所示，區(qū)分耐藥??菌（Ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎ）和敏感菌的最本質(zhì)區(qū)別是，單個耐藥菌（Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ?ｓｔｒａｉｎ）的ＭＩＣ值比相應(yīng)??的敏感菌的ＭＩＣ顯著升高，并且升高的濃度遠(yuǎn)超過了治療該類細(xì)菌的濃度。因此，耐藥性的獲??得使得耐藥菌在高濃度的抗生素作用下無法殺滅。??然而，耐受菌（Ｔｏｌｅｒａｎｔ?ｓｔｒａｉｎ）和非耐受菌（Ｎｏｎ－ｔｏｌｅｒａｎｔ?ｓｔｒａｉｎ）無法僅憑ＭＩＣ來區(qū)分，因?yàn)??耐受菌的ＭＩＣ與敏感菌相比并沒有改變（如圖１－３?ｂ）。同樣的持留菌（Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ?ｓｔｒａｉｎ）的ＭＩＣ??值也沒有發(fā)生變化（圖丨－３?ｃ）。而最小殺菌時間（ｔｈｅ?ｍｉｎｉｍｕｍ?ｄｕｒａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｋｉｌｌｉｎｇ，ＭＤＫ）可以進(jìn)??一步區(qū)分耐受菌和持留菌．耐受菌的ＭＤＫ最早期就比敏感菌大很多，而持留菌的ＭＤＫ在最初??是與敏感菌相同，一段時間后才高于敏感菌（如圖１－３?ｂ和ｃ）。事實(shí)上，細(xì)菌持留現(xiàn)象早在１９４４??年就己經(jīng)被發(fā)現(xiàn)１５４１，抗生素作用細(xì)菌后發(fā)現(xiàn)細(xì)菌群體中一定比例的表型異化的小亞群表現(xiàn)為對抗??生素耐藥

細(xì)胞的自噬作用是清除細(xì)胞內(nèi)入侵的細(xì)菌的機(jī)制之一，主要通過自噬小體和溶酶體的相互作??用完成ＤＯＭ％，細(xì)胞吞噬作用是細(xì)胞自噬的基礎(chǔ)，大部分的病原體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)依靠吞噬作用［％’??如圖１－７所示，細(xì)菌經(jīng)吞噬作用進(jìn)入內(nèi)涵體或核內(nèi)體（Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）中，然后內(nèi)涵體通過??與自暖小體（Ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）融合將細(xì)菌送入自嗤體中進(jìn)一步形成自噬內(nèi)涵體（Ａｍｐｈｉｓｏｍｅ）。最??后自唾內(nèi)涵體和溶酶體（Ｌｙｓｏｓｏｍｅ）促進(jìn)自嗤溶酶體融合（Ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍａｌ－ｌｙｓｏｓｏｍａｌｆｕｓｉｏｎ），利??用溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境（Ａｃｉｄｉｃ?ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）和溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ）等將自嗤溶酶體中的細(xì)菌降??解完成自噬的清除機(jī)制。細(xì)菌逃逸自噬的方式可以通過阻止自噬過程中姿勢溶酶體的酸性環(huán)境來??抵抗自噬的捕殺。如副溶血弧菌就可以通過阻止上皮細(xì)胞的早期核內(nèi)體和晚期核內(nèi)體酸化進(jìn)一步??阻止溶酶體的酸化并在上皮細(xì)胞內(nèi)形成保護(hù)壁龕而成功的在細(xì)胞內(nèi)存活［５又另一方面，細(xì)菌可以??通過阻止自噬體的形成而阻止自噬過程［１＜）８］。自噬中的標(biāo)志性的蛋白可以用來示蹤自噬發(fā)展過程。??例如自噬的關(guān)鍵蛋白ＬＣ３＿，ＬＣ３家族包括ＬＣ３Ａ，?Ｂ，?Ｃ和ＧＡＢＡＲＡＰ等亞家族其中??對ＬＣ３Ｂ研究最為廣泛，它是一個具有１２５個氨基酸殘基的蛋白，被Ａｔｇ４剪切失去Ｃ端的２２個??氨基酸蛋白并暴露出Ｃ端的甘氣酸，這時的蛋白為細(xì)胞質(zhì)中的ＬＣ３Ｂ－Ｉ１１１２１。在自噬的過程中，??ＬＣ３Ｂ－Ｉ的Ｃ端的甘氨酸經(jīng)過泛素化過程，在Ｃ端上共價連接一個磷脂酰乙醇胺（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙ??ｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ


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