捻轉(zhuǎn)血矛線蟲是寄生于小反芻動物皺胃,以吸食宿主血液為生的寄生性胃腸道線蟲。感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲可引起嚴重貧血、腹瀉、脫水甚至是宿主的死亡。近期的研究表明寄生性胃腸道線蟲可通過產(chǎn)生排泄分泌物（ESP）釋放免疫抑制因子與宿主免疫細胞或免疫調(diào)節(jié)分子相互作用,抑制或逃避宿主的免疫應答從而保證其存活。T細胞和單核細胞均為參與宿主機體免疫應答的核心細胞,因此針對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP中一些對T細胞和單核細胞功能抑制分子的研究有助于揭示其調(diào)節(jié)宿主免疫反應及產(chǎn)生免疫逃避的具體機制。同時鑒定出的抑制分子可作為候選疫苗抗原,用于臨床治療與研究,為控制捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病提供新的方法。為此,我們進行了以下研究:1捻轉(zhuǎn)血矛線蟲半乳糖凝集素C端與N端糖結(jié)合域與山羊PBMC結(jié)合位點的鑒定及其功能研究在之前的研究中,我們發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲半乳糖凝集素（Hco-gal-m/f）的C端和N端糖結(jié)合域（CRD）具有不同的糖結(jié)合能力。然而,在宿主與寄生蟲相互作用中,Hco-gal-m/f的不同CRD是否具有不同的免疫調(diào)節(jié)功能依然未知。在本章研究中,我們發(fā)現(xiàn)Hco-gal-m/f的N端CRD（MNh）和C端CRD（MCh）可通過不同的受體與... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：259 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語
前言
    參考文獻
第一篇 文獻綜述
    第一章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲及捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病
        1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病概述
            1.1 病原學
            1.2 生活史
        2 流行病學
            2.1 致病作用、病理變化及臨床癥狀
            2.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的診斷
            2.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的防治
            2.4 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的抗藥性
        3 小結(jié)
        參考文獻
    第二章 寄生性胃腸道線蟲感染與免疫研究
        1 寄生性胃腸道線蟲病概述
        2 寄生性胃腸道線蟲感染與宿主免疫應答
            2.1 機體檢測
            2.2 信號轉(zhuǎn)導
            2.3 機體免疫誘導
            2.4 免疫排斥
            2.5 機體修復
        3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染與宿主免疫應答
            3.1 三期幼蟲、四期幼蟲與宿主免疫應答
            3.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲與宿主免疫應答
        4 總結(jié)與展望
        參考文獻
    第三章 反芻動物胃腸道線蟲免疫調(diào)節(jié)分子研究進展
        1 反芻動物胃腸道線蟲概述
        2 胃腸道線蟲調(diào)節(jié)分子
            2.1 半乳糖凝集素
            2.2 蛋白酶抑制劑
            2.3 補體系統(tǒng)抑制分子
            2.4 巨噬細胞遷移抑制因子
            2.5 其他免疫調(diào)節(jié)性分子
        3 免疫調(diào)節(jié)分子用于疫苗研究
            3.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲
            3.2 背帶線蟲
        4 總結(jié)
        參考文獻
第二篇 實驗研究
    第四章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲半乳糖凝集素C端與N端糖結(jié)合域與山羊PBMC結(jié)合位點的鑒定及功能研究
        1 材料和方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 重組表達質(zhì)粒pET-32a-MNh及pET-32a-MCh雙酶切鑒定
            2.2 重組蛋白rMNh及rMCh的純化
            2.3 rMNh及rMCh與山羊PBMC結(jié)合
            2.4 MNh及MCh在山羊PBMC上受體鑒定
            2.5 rMCh與rMNh對細胞增殖的作用
            2.6 rMCh與rMNh對山羊PBMC一氧化氮分泌的影響
            2.7 rMCh與rMNh對山羊PBMC凋亡作用
            2.8 rMCh與rMNh對山羊PBMC細胞因子轉(zhuǎn)錄的影響
        3 討論
        參考文獻
    第五章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP中與山羊T細胞結(jié)合蛋白的鑒定及其對T細胞功能的影響
        1 材料和方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP的獲取與多克隆抗體的制備
            2.2 山羊T細胞的磁珠分選
            2.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP與山羊T細胞的結(jié)合
            2.4 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP與山羊T細胞體外免疫共沉淀的SDS-PAGE和Western Blot分析
            2.5 LC-MS/MS鑒定與分析
            2.6 GO注釋與KEGG分析
            2.7 ESP對T細胞活力影響
            2.8 ESP對T細胞凋亡的影響
            2.9 ESP對T細胞增殖的影響
            2.10 ESP對T細胞周期的影響
            2.11 ESP對T細胞主要分型的影響
            2.12 ESP對T細胞分泌細胞因子的影響
        3 討論
        參考文獻
    第六章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP中與山羊單核細胞結(jié)合蛋白的鑒定及其對單核細胞功能的影響
        1 材料和方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 山羊單核細胞磁珠分選
            2.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP與山羊單核細胞的結(jié)合
            2.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲ESP與山羊單核細胞體外免疫共沉淀的SDS-PAGE和Western Blot分析
            2.4 LC-MS/MS鑒定與分析
            2.5 GO注釋與KEGG分析
            2.6 ESP對單核細胞分泌一氧化氮水平影響
            2.7 ESP對單核細胞吞噬能力影響
            2.8 ESP對單核細胞MHC分子表達影響
            2.9 ESP對單核細胞凋亡影響
            2.10 ESP對單核細胞分泌細胞因子的影響
        3 討論
        參考文獻
    第七章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM基因的克隆表達及其對T細胞功能的影響
        1 材料和方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM的PCR擴增
            2.2 重組質(zhì)粒pET28a-HcABHD、pET-32a-HcGHD及pET-32a-HcADRM的雙酶切鑒定
            2.3 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM的純化
            2.4 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM的Western blot分析
            2.5 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲不同發(fā)育階段Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM轉(zhuǎn)錄水平的變化
            2.6 Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM的組織定位
            2.7 重組蛋白Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM與山羊T細胞結(jié)合
            2.8 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM對T細胞活力影響
            2.9 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM對T細胞凋亡及相關信號通路的影響
            2.10 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM對T細胞增殖的影響
            2.11 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM對T細胞周期及相關通路的影響
            2.12 重組蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM對T淋巴細胞分泌細胞因子的影響
        3 討論
        參考文獻
    第八章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hc-Rab33、Hc-Mak1及Hc-ATPD基因的克隆表達及其對單核細胞功能的影響
        1 材料和方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 Hc-Rab33、Hc-Mak1及Hc-ATPD的PCR擴增
            2.2 重組質(zhì)粒pET28a-HcRab33、pET28a-HcMak1及pET28a-HcATPD的雙酶切鑒定
            2.3 重組蛋白rHc-Rb33、rHc-Mak1及rHc-ATPD的純化
            2.4 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD的Western blot分析
            2.5 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲不同發(fā)育階段Hc-Rb33、Hc-Mak1及Hc-ATPD轉(zhuǎn)錄水平的變化
            2.6 Hc-Rab33、Hc-Mak1及Hc-ATPD的組織定位
            2.7 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD與山羊單核細胞結(jié)合
            2.8 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD對單核細胞NO分泌水平的影響
            2.9 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD對單核細胞吞噬能力的影響
            2.10 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD對單核細胞內(nèi)MHC-11分子表達水平的影響
            2.11 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD對單核細胞凋亡的影響
            2.12 重組蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD對細胞因子分泌水平的影響
        3 討論
        參考文獻
    第九章 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲水解酶包含蛋白（Hc-ABHD）、粘附調(diào)節(jié)因子（Hc-ADRM）和Ras結(jié)構(gòu)域包含蛋白（Hc-Rab33）抗血清免疫保護性研究
        1 材料與方法
            1.1 實驗材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 蟲卵排出情況
            2.2 成蟲減少率
            2.3 血常規(guī)檢測
            2.4 血清抗體檢測
            2.5 細胞因子檢測
        3 討論
        參考文獻
全文總結(jié)
致謝
博士期間論文發(fā)表情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Recombinant Galectins of Hemonchus contortus Inhibit Goat Cytokine mRNA Transcription of Peripheral Blood Mononuclear Cells in vitro[J]. Charles I Muleke.  Agricultural Sciences in China. 2007(10)
[2]捻轉(zhuǎn)血矛線蟲雌、雄成蟲galectin基因的克隆、鑒定及序列分析[J]. 李春華,李祥瑞,魏曉鋒,徐立新.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2005(01)



本文編號：3152556