在脊椎動物早期胚胎發(fā)育的過程中,其背腹體軸、前后體軸、左右體軸的建立是整個生物個體發(fā)育進(jìn)程中的重大事件,涉及到很多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的精密調(diào)控,例如Wnt信號通路、BMP信號通路、Nodal信號通路、FGF信號通路等等。其中,Wnt信號的活性在胚胎生成過程中所形成的活性梯度對于整個機(jī)體體軸的建立起到了至關(guān)重要的作用：母源的Wnt信號會特化胚胎背前部的形成；合子的Wnt信號主要負(fù)責(zé)胚胎后部腹部化的形成。Wnt/β-Catenin信號通路在調(diào)節(jié)胚胎的形成,腫瘤形成,機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài),機(jī)體再生以及胚胎干細(xì)胞的多能性等方面發(fā)揮了重要的作用。許多類型的癌癥和Wnt/β-Catenin信號活性的錯誤調(diào)控都是相互關(guān)聯(lián)的,同樣在在非洲爪蛙胚胎中母源的P-Catenin的缺失會使organizer和背部體軸都不能形成。β-Catenin穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)是調(diào)控Wnt/β-Catenin信號活性的一種主要機(jī)制,同時核內(nèi)高水平的β-Catenin也作為一些腫瘤的不良病狀預(yù)斷。在沒有Wnt蛋白激活的情況下,胞質(zhì)內(nèi)會形成由APC,GSK3,CK1和β-TrCP形成的降解復(fù)合體,其中CK1和GSK3會使β... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文名詞對照表
第一章 文章綜述
    1.1 前言
    1.2 非洲爪蛙早期胚胎的形成
        1.2.1 非洲爪蛙——一種經(jīng)典的動物模型
        1.2.2 非洲爪蛙胚胎的皮質(zhì)旋轉(zhuǎn)和母源的Wnt/β-Catenin信號
        1.2.3 中囊胚轉(zhuǎn)換
        1.2.4 組織者區(qū)和胚胎體軸的形成
        1.2.5 母源和合子Wnt/β-Catenin信號參與胚胎體軸形成
    1.3 Wnt/β-Catenin信號通路
        1.3.1 經(jīng)典的Wnt/β-Catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制概述
            1.3.1.1 細(xì)胞膜上的Wnt/β-Catenin信號——受體復(fù)合體
            1.3.1.2 細(xì)胞質(zhì)中的β-Catenin降解復(fù)合體
            1.3.1.3 細(xì)胞核中的轉(zhuǎn)錄復(fù)合體
        1.3.2 β-Catenin的核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.3.3 β-Catenin參與細(xì)胞之間的粘連
    1.4 賴氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b
        1.4.1 組蛋白賴氨酸甲基化和去甲基化修飾
        1.4.2 Kdm2a/Kdm2b的結(jié)構(gòu)和功能
        1.4.3 Kdm2a/Kdm2b相關(guān)的研究進(jìn)展
    1.5 結(jié)語
    1.6 參考文獻(xiàn)
第二章 賴氨酸去甲基化酶Kdm2a/Kdm2b調(diào)節(jié)早期胚胎體軸的形成
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 體外轉(zhuǎn)錄反義RNA探針及設(shè)計(jì)反義嗎啡啉
        2.2.3 非洲爪蛙胚胎的收集、培養(yǎng)以及顯微注射
        2.2.4 整體原位雜交
        2.2.5 非洲爪蛙胚胎的全胚胎蛋白的提取
        2.2.6 試劑配方
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 賴氨酸去甲基化酶Kdm2a和Kdm2b是進(jìn)化上保守的蛋白
        2.3.2 Kdm2a和Kdm2b具有相似的表達(dá)譜
        2.3.3 Kdm2a/Kdm2b參與非洲爪蛙胚胎前后體軸的形成
        2.3.4 敲降Kdm2a/Kdm2b會上調(diào)非洲爪蛙胚胎前部組織的標(biāo)志基因
        2.3.5 敲降Kdm2a/Kdm2b會下調(diào)非洲爪蛙胚胎后部組織的標(biāo)志基因
        2.3.6 Kdm2a和Kdm2b存在功能冗余和互補(bǔ)的作用
        2.3.7 Kdm2a和Kdm2b很有可能對胚胎的神經(jīng)發(fā)育過程也起到調(diào)節(jié)作用
    2.4 討論
    2.5 參考文獻(xiàn)
第三章 Kdm2a/Kdm2b調(diào)節(jié)細(xì)胞核內(nèi)β-Catenin的穩(wěn)定性
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 非洲爪蛙胚胎的收集、培養(yǎng)以及顯微注射
        3.2.3 整體原位雜交
        3.2.4 總RNA的提取
        3.2.5 cDNA的制備
        3.2.6 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        3.2.7 實(shí)時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        3.2.8 紫外線照射胚胎
        3.2.9 動物帽解聚/重聚實(shí)驗(yàn)
        3.2.10 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.11 細(xì)胞裂解液的提取
        3.2.12 熒光素酶分析
        3.2.13 免疫印跡
        3.2.14 免疫共沉淀
        3.2.15 抗體
        3.2.16 試劑配方
        3.2.17 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 在非洲爪蛙胚胎內(nèi)敲降Kdm2a/Kdm2b之后會激活母源和合子的Wnt/β-Catenin信號通路的靶基因
        3.3.2 Kdm2a/Kdm2b調(diào)控Wnt/β-Catenin信號的活性
        3.3.3 Kdm2a在翻譯水平上影響了β-Catenin的穩(wěn)定性
        3.3.4 Kdm2a/Kdm2b抑制由于過表達(dá)β-Catenin和ΔNβ-Cat所誘導(dǎo)的胚胎第二體軸的形成
        3.3.5 Kdm2a/Kdm2b作用于Tcf711的上游
        3.3.6 敲降Kdm2a/Kdm2b不能拯救由紫外線照射引起的胚胎腹部化表型
        3.3.7 Kdm2a/Kdm2b在細(xì)胞核內(nèi)抑制活化的β-Catenin活性且敲降Kdm2a/Kdm2b會增加原腸胚期β-Catenin的甲基化水平
        3.3.8 Kdm2a/Kdm2b調(diào)控β-Catenin活性并參與調(diào)節(jié)和前后體軸形成相關(guān)的基因表達(dá)
        3.3.9 Kdm2a/Kdm2b不直接參與調(diào)節(jié)細(xì)胞之間的粘連
    3.4 討論
    3.5 參考文獻(xiàn)
附錄1 相關(guān)試劑配制方法
附錄2 攻讀博士學(xué)位期間參與的工作及取得成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wnt signaling in disease and in development[J]. Roel NUSSE.  Cell Research. 2005(01)



本文編號：3114418